水稻基腐病细菌毒素的遗传特性和产毒相关的分子标记

[目的]水稻基腐病(Erwinia chrysanthemi pv.zeae)是水稻上重要的细菌病害之一,本论文对该病菌的毒素遗传特性和产毒相关的分子标记进行了研究.[方法]通过化学诱变方法,筛选基腐细菌去质粒的突变体Ech7-mu1;应用RAPD技术,筛选产毒素相关的分子标记.[结果]毒素活性测定结果表明,野生菌Ech7和去质粒菌株Ech7-mu1都能产生毒素.从260条随机引物中,筛选出引物K10,该引物能从不产生毒素的突变株Ech7-4中扩增出大小为2139bp的DNA特异片段,但不能扩增野生菌Ech7,将该片段克隆,测序分析,设计特异引物,在突变体Ech7-4中获得了与毒素产生相关的SCAR分子标记(标记符合率为100%).该基因片段有5个ORFs,其中2个ORFs分别编码NADH-黄素还原酶和N-乙酰转移酶,另外2个不完整的ORFs编码的蛋白分别与Pseudomonas aerginosa(ZP00136947)和Yersinia Pestis(ZP01177873)的抗菌素代谢转运蛋白通透酶(DMT)具有66%和46%的同源率.[结论]水稻基腐细菌毒素的生物合成是由染色体基因编码,与质粒无关.不产生毒素的突变菌株基因突变的位点位于SCAR标记DNA的3'末端.     

DNA分子标记在动物个体识别与亲权鉴定方面的应用

自从DNA分子标记技术建立以来,各种DNA分子标记相继被广泛地应用于遗传图谱的构建,评估遗传多样性以及个体识别,亲权鉴定等方面,综述了利用DNA分子标记技术,进行动物个体识别与亲权鉴定的原理,研究进展,现状及其应用前景与存在的问题。     

用双色荧光愿位杂交和PCR技术鉴定无精症患者标记染色体的来源

目的：为了研究无精症患标记染色体的来源,对无精症患进行明确的遗传学诊断。方法：应用双色FISH技术和PCR技术对2例无精症患进行分子细胞遗传学和分子遗传学检测。结果：确定了两例特发性无精症患的标记染色体均来源于Y染色体,其核型为46,X,ishdel(Y)(q11)(DYZ3 ,DXZ1-)。结论：FISH技术结合PCR技术,是鉴定标记染色体来源的又一非常重要方法,对于无精症患在进行胞质内单精子注射（ICSI）或其它治疗之前,完成遗传咨询和明确的遗传学诊断也是特别必须的。     

番木瓜两性基因的RAPD标记

应用混合分离群体分析法,在205个10碱基随机引物中,寻找番木瓜两性基因（M2）的RAPD标记,发现两个多态性RAPD条带：OPQ－07 1800和OPE－06 1050。它们仅能在两性DNA池中扩增到,而不能在雌性DNA池中扩增到,用上述两引物检测了210株番木瓜单株DNA,结果表明,OPQ－07 1800和OPE－061050与M2基因紧密连锁,它们位于M2基因的两侧,其遗传距离分别为4．5和1．9cM。     

胚乳性状数量基因的定位方法

将三倍体胚乳性状的数量遗传模型和二倍体性状数量基因（QTL）图构建方法相结合,导出双侧标记基因型下有关胚乳性状QTL的遗传组成、平均数和遗传方差分量,据之提出以某一区间双侧标记基因型胚乳性状的平均值为依变数,以该区间内任一点假定存在的QTL的加性效应d、显性效应h1和／或h2的系数为自变数,进行有重复观察值的多元线性回归分析,根据多元线性回归的显著性测验该点是否存在QTL,并估计出QTL的遗传效应。给定区间内任一点,皆可以此进行分析,从而可在整条染色体上作图,并以之确定QTL的数目和最可能位置,同时,在检测某一区间时,利用多元线性回归方法将该区间外可能存在的QTL的干扰进行统计控制,以提高QTL检测的精度。此外,还讨论了如何将之推广应用于其他类型的DNA不对应资料以及具复杂遗传模型的胚乳性状资料。     

非特异性脂质转移蛋白突变体的构建及在两种硫氧还蛋白表达载体中的表达比较

对水稻非特异性脂质转移蛋白(Nospecific lipid transfer protein,nsLTP) LTP110中结构重要的5个氨基酸位点进行了定点突变,测序结果证实了突变体构建成功。在尝试了多种大肠杆菌表达系统进行表达之后,发现硫氧还蛋白融合表达载体适合于LTP110野生型及突变体的表达。将编码野生型LTP110及突变体Y17A,P72L,R46A,D45A,C50A蛋白的cDNA顺序克隆进两种硫氧还蛋白表达载体并对其表达情况进行了比较：pTrxFus载体可以在宿主菌GI724中以较低水平表达野生型LTP110及突变体Y17A,P72L,R46A融合蛋白,但不能表达D45A和C50A融合蛋白;pET32a(+)载体可以在宿主菌BL21 (DE3) trxB-中以可溶蛋白的形式表达野生型及所有突变型融合蛋白,且表达量比在pTrxFus载体/GI724突主菌中表达量高。对pET32a(+)载体中表达的LTP110融合蛋白进行了纯化,并利用带有荧光标记的脂肪酸分子对其测活,结果表明表达的野生型LTP110分子具有结合脂质的活性。     

RAPD技术在玉米亚属植物分类研究中的应用

对玉兰亚属的17个种进行RAPD标记实验的结果表明,RAPD标记在玉兰亚属内具有很高的多态性,证明RAPD标记可作为木兰科低等级分类单元的分类依据,聚类分析结果显示,分布于美洲的渐叶木兰与其它分布于亚洲的种类明显分开,滇藏木兰与亚洲的其余15个种也具有较远的亲缘关系,其余各个种各自聚类,种间均有着不同的遗传距离,RAPD及分子序列测定分析结果均不支持玉兰亚属以萼片状花被片,开花时间,花被片颜色作为分组的依据,建议玉兰亚属以地理分布特征作为分组依据,建立亚洲组与美洲组两个类群。     

DNA分子标记在小麦抗条锈性遗传研究中的应用

综述了近年来DNA分子标记在小麦抗条锈性遗传研究中的应用现状和潜力。内容涉及DNA分子标记在基因标记,基因克隆,遗传图谱构建和辅助选择育种等方面的应用,并列举了代表性实例,展望了DNA分子标记技术在小麦抗条锈病研究上的前景。     

芯片杂交中荧光标记样品定量与非定量的比较研究

比较在芯片杂交中,荧光标记样品定量与非定量对杂交结果的影响。其方法是,提取经As2O3作用K562细胞前后的总RNA,逆转录成cDNA第一链,并分别用Cy3／Cy5标记。标记后的样品再次定量或不定量,但均取相同体积上样与K562芯片杂交,用扫描仪扫描并分析。其结果,标记后样品定量与不定量杂交的结果都与理论推测一致,但以样品定量进行杂交的效果更好,标记样品杂交前再次定量的,分析发现2个基因表达下调;杂交前不定量仅取相同体积进行杂交的,发现6个基因片段表达下调,其中只有2个基因与细胞凋亡通路密切相关。认为在芯片的杂交检测中,对荧光标记样品杂交前再次定量可大大提高杂交结果的可靠性。     

大豆SSR技术研究进展

微卫星DNA是重复单位少于 6个核苷酸的简单重复序列。在大部分真核细胞的基因组中有着广泛分布 ,呈孟德尔式遗传。以此为基础发展起来的SSR标记是一种共显性分子标记 ,遗传多态性丰富。本文着重介绍近年来SSR技术应用在大豆遗传图谱构建、基因研究、品种鉴定和分子标记辅助育种等方面取得的进展 ,并初步预测该方法在大豆研究中的发展方向。