The production of activated oxygen species by an interaction of methemoglobin with ascorbate

Ascorbate reacts with methemoglobin to produce reactive oxygen species, most probably hydroxyl radicals. The main features of this system are: a) disappearance of ascorbate; b) consumption of oxygen with an ascorbate/O2 stoichiometry of 2:1; c) requirement of unliganded heme iron; d) formation of H2O2. The proposed mechanism involves an ascorbate-mediated interconversion of methemoglobin and oxy-hemoglobin, resulting in the production of H2O2. This product is decomposed by hemoglobin to produce hydroxyl radicals according to a Fenton-like reaction in which ascorbate recycles methemoglobin to hemoglobin. Alternative pathways of formation and of decomposition of H2O2 in this system appear to play a minor role.     

研究报告: 基于AS1411适配体的DNA-RNA杂交载体的抗肿瘤研究

目的 研究连接适配体的DNA-RNA分子作为杂交载体靶向肿瘤细胞并导入功能性RNA分子进入细胞的有效性，以及对肿瘤细胞的影响。方法 设计合成短的互补DNA、RNA分子，组装成DNA-RNA杂合链；连接AS1411适配体为靶向分子，再分别连接p21 saRNA和TIGIT siRNA作为药物分子，记为P21 saRNA和TIGIT siRNA，构成杂交载体，通用结构式为AS1411-DNA/RNA-sxRNA；检测AS1411-DNA/RNA-sxRNA能否靶向结合并进入肿瘤细胞及其对瘤细胞生存、迁移、侵袭和凋亡的影响。结果 将设计的杂交载体各部分等摩尔加入杂交缓冲体系并于特定温度条件下孵育，TBM聚丙烯酰胺凝胶电泳检测到AS1411-DNA/RNA-sxRNA成功组装；AS1411-DNA/RNA-sxRNA杂交载体在10%血清条件下也显示出良好的抗降解稳定性；荧光显微镜和激光共聚焦显微镜下观察，SKOV3细胞表面及胞内存在绿色大量荧光信号，杂交载体成功进入肿瘤细胞。杂交载体孵育后：在mRNA水平上，p21基因表达（2.14±0.25）是对照组（1.02±0.10）2倍以上，P<0.05；TIGIT基因表达（0.63±0.09）低于对照组（1.09±0.15），P<0.05；在蛋白质水平上，p21基因表达（1.57±0.16）是对照组（1.10±0.09）1.5倍以上，P<0.05；TIGIT基因表达（0.61±0.12）低于对照组（1.01±0.07），P<0.05。CCK-8实验显示，P21 saRNA（3.10±0.13）和TIGIT siRNA（2.91±0.13）杂交载体孵育组与空白对照组（3.67±0.15）相比，卵巢癌细胞增殖能力显著下降（P<0.05）；划痕实验结果显示，P21 saRNA孵育组愈合率（42.53±2.90）%、TIGIT siRNA孵育组愈合率（36.23±3.43）%，明显低于空白对照组（76.47±3.64）%，P<0.05；Transwell检测迁移能力发现：P21 saRNA孵育组（128.25±5.36）、TIGIT siRNA孵育组（119.50±8.79）低于对照组（186.5±8.56）；侵袭能力：P21 saRNA孵育组（145.5±9.45）、TIGIT siRNA孵育组（112.25±5.63）也显著低于对照组（202.50±10.12），P<0.05；细胞凋亡率：P21 saRNA孵育组（11.74%±2.47%）、TIGIT siRNA孵育组（17.12%±2.04%）明显高于对照组（5.66%±1.44%），P<0.05。结论 所制备的AS1411-DNA/RNA-sxRNA杂交载体能够有效靶向肿瘤细胞，携带功能性小RNA靶向导入肿瘤细胞并调控目的基因表达，使肿瘤细胞的增殖、侵袭和迁移能力受到抑制；该结果为利用DNA-RNA偶联AS1411适配体作为靶向工具的杂交载体，靶向杀伤表面表达NCL蛋白的肿瘤细胞提供了实验基础。