脂肪酶lipAB操纵子在防御假单胞菌中的克隆、表达及活性研究

对荚壳伯克氏菌PG1(Burkholderia glumae PG1)基因组中的脂肪酶操纵子lipAB片段进行直接克隆,构建含有脂肪酶基因的分泌表达载体,实现其在防御假单胞菌Pf-5(Pseudomonas protegens Pf-5)中的异源表达,并研究重组工程菌的胞外脂肪酶活性。利用Red/ET直接克隆技术获得克隆载体p15A-cm-lipAB;再通过亚克隆技术构建重组表达载体pBBR1-km-lipAB和pBBR1-km-Papra-lipAB,将这两个表达载体分别电转至Pf-5中,通过卡那霉素或者阿伯拉霉素抗性筛选得到转化子,以三丁酸甘油酯平板扩散法和对硝基苯酚法检测脂肪酶酶活,并通过实时荧光定量PCR检测启动子的替换对lipA表达的影响。本研究从PG1中成功克隆了脂肪酶操纵子lipAB(GenBank accession number:AJK49931. 1 and AJK49932. 1);成功构建了重组工程菌Pf-5/pBBR1-km-lipAB和Pf-5/pBBR1-km-Papra-lipAB,并成功检测到两株工程菌的胞外脂肪酶活性;以LB培养基培养至24 h时,启动子优化后lipA基因表达量是原始水平的2. 1倍;在LB培养基摇瓶发酵至66 h时,Pf-5/pBBR1-km-lipAB的脂肪酶酶活最高且为13. 51 U/mL,而Pf-5/pBBR1-km-Papra-lipAB的酶活为46. 85 U/mL,是Pf-5/pBBR1-km-lipAB的3. 47倍。初步实现基因lipA在Pf-5中的表达,发现组成型启动子Papra比lipAB的原始启动子PlipAB效率更高,为将来实现规模化生产奠定了技术基础。     

029泰国人流感H5N1病毒全基因组特征

2001年，将H5N1禽流感病毒分为A～E5种基因型。2002年后，未再发现这些基因型，而出现了8种新的基因型（V、W、X1、X2、X3、Y、Z和Z^＋）。2003年末到2004年5月，H5N1流感A病毒的再现首次波及大部分东南亚国家，然而，仅越南和泰国报告了人类病例。人们一般认为2003～2004在东亚和东南亚H5N1病毒有共同的起源，且已发现它们在抗原性上应有别于1997年和2003年初的病毒，     

宁夏固原地区农村回、汉族近亲结婚的调查

固原地区位于宁夏南部山区,共辖６县,总人口１６２．２万,其中回族占４６．２％。当地经济、文化等条件都非常落后,加之风俗习惯的影响,致使本地近亲婚配多见,尤其回族较多,出生遗传缺陷也较多。在加拿大基金会的援助下,我所于１９９２年８月对本地区农村的回、汉...     

恶性疟原虫多抗原表位基因表达载体的构建及其在大豆幼胚中的表达

疟疾是当今最需要研究有效疫苗的主要传染病之一。AWTE基因编码恶性疟原虫多种抗原表位基因 ,CTB基因编码霍乱毒素 B亚基 ,是一种既能引起细胞免疫又能引起体液免疫的免疫载体和佐剂。把 AWTE- CTB融合基因构建到植物表达载体 p BVG- ny2上 ,通过基因枪导入法 ,转化大豆幼胚分生组织。 X- glu染色检测到 GUS基因的表达 ;抗原性分析实验结果表明 ,特异表达的融合蛋白可与 CTB和 AWTE抗体结合 ,具有 CTB抗原性。这个实验结果 ,表明疟疾多抗原表位基因首次在转基因大豆幼胚中得到瞬时表达     

两种福寿螺与中国圆田螺齿舌的形态学特征比较

齿舌作为软体动物独特的摄食器官,是软体动物门重要的分类特征。利用扫描电镜对入侵物种福寿螺Pomacea canaliculata、P.maculata和本地物种中国圆田螺(Cipangopaludina chinensis)的齿舌形态进行了比较观察。两种福寿螺和中国圆田螺齿式均为2·1·1·1·2。两种福寿螺齿舌的差异主要体现在中央齿的第一突起,P.canaliculata中央齿第一突起宽而短,不如P.maculata锋利。P.canaliculata与P.maculata第一突起长与中央齿宽以及第一突起宽与中央齿宽的比值均具有显著差异。两种福寿螺与中国圆田螺齿舌的中央齿、侧齿、缘齿,不论是从形态还是数量上都明显不同。两种福寿螺中央齿第一突起大而尖,呈倒三角形,两侧对称排列3个小齿;中国圆田螺的中央齿第一突起短而宽,呈方形,两侧对称排列4个小齿。两种福寿螺的侧齿大突起内侧有1个小而尖的小齿,大突起外侧另有2个小齿;中国圆田螺侧齿上缘中间大突起外侧有3个小齿,呈锯齿状。两种福寿螺的内缘齿和外缘齿相似,缘齿上缘的中间尖齿尖锐,旁边再形成一小齿;中国圆田螺内缘齿上缘的中间尖齿突出,外缘齿基部细长,上缘有小的尖齿8~10个,呈梳状。两种福寿螺与中国圆田螺的第一突起宽与中央齿宽之比、第一突起长与中央齿宽之比、第二突起宽与中央齿宽之比、第二突起长与中央齿宽之比均差异显著。食性不同可能是造成种间齿舌结构差异的原因之一。     

Rhodococcus sp. R04细胞色素P450单加氧酶及CYP125A18与唑类药物的互作分析

红球菌 (Rhodococcus sp.) R04基因组有15种细胞色素P450单加氧酶,其中CYP125A18与结核分枝杆菌 (Mycobacterium tuberculosis) 和马红球菌 (Rhodococcus equi) 的CYP125有较高同源性。利用NCBI蛋白质数据库搜索同源序列,对Rhodococcus sp. R04的15种CYP450一级结构序列进行比对和系统发育分析;对CYP125A18基因进行了克隆表达,并用紫外分光光度法对蛋白质的光谱学特性以及与唑类药物互作情况进行分析。实验结果表明,Rhodococcus sp. R04 15种CYP450均含有保守的氨基酸序列和铁血红素催化中心。SDS-PAGE分析表明,CYP125A18分子量约为50 kD,CYP125A18还原态和CO结合后与CYP125A18氧化态的差示光谱表现为典型的CYP450光谱特性。CYP125A18与底物4-胆甾烯-3-酮结合后,血红素铁全部转变为高自旋状态;与唑类药物滴定后发生了II型光谱转变。解离常数表明,7种唑类药物与CYP125A18的亲和力由强到弱依次为酮康唑、益康唑、4-苯基咪唑、氟康唑、4-甲基-2-苯基咪唑、克霉唑、甲硝唑。上述发现对研究CYP125代谢胆固醇具有重要意义,同时为疾病耐药性研究及药物选择提供数据和理论支持。     

小花三脉紫菀和狭叶三脉紫菀的区别:形态学和细胞学证据

产自湖北神农架的狭叶三脉紫菀Aster ageratoides var. gerlachii (Hance) Chang一直被各种文献和有关标本馆误定为小花三脉紫菀A. ageratoides var. micranthus Ling。我们对二者进行了野外采集和形态学、细胞学的比较研究,分析了导致错误鉴定的原因,重新确定了二者的界限。小花三脉紫菀无横走地下茎,这一性状具有重要的分类学价值。核型研究发现,小花三脉紫菀为二倍体,2n=2x=18=18m,核型属1A型;狭叶三脉紫菀则是四倍体,2n=4x=36=32m+4sm (2SAT),核型属2A型。二变种的染色体数目、核型均为首次报道。狭叶三脉紫菀在湖北为新分布记录。     

滇西耿马县小新寨中二叠世沙子坡组"Rugososchwagerina"的再研究

中二叠世的Eopolydiexodina-Rugososchwagerina类动物群是一个具有重要地层及古地理意义的动物群,也是滇西保山地块沙子坡组的一个指示性动物群。文中详细研究了耿马小新寨沙子坡组“Rugososchwageri-na”标本的形态学特征,阐明了其与RugososchwagerinaMiklukho-Maklay,1956的模式标本在特征上的显著区别。依据幼壳形态特征在类个体发育及系统发生研究中的重要性,对小新寨“Rugososchwagerina”标本的属级分类提出质疑,并建议建立新属Xiaoxinzhaiellagen.nov.。     

中国翼手类一新纪录种

记述采自中国吉林南部鼠耳蝠属Myotis 1种:大趾鼠耳蝠Myotis macrodactylus为翼手目中国新纪录.提供了外形、头骨和牙齿的特征描述、照片、分布和生态习性.