假菠萝麻蛋白酶分离纯化及特性研究

从假菠萝麻叶汁中用乙醇分部沉淀法得到一种蛋白酶,对酪蛋白有强烈的水解活性,经Ｓｅｐｈａｄｅｘ Ｇ－１００柱层析和ＳＰ－Ｓｅｐｈａｄｅｘ Ｃ－５０离子交换柱层析等步骤纯化,可得到六角形结晶。结晶酶液经ＰＡＧＥ圆盘电泳,每条胶柱上只显示一条蛋白带,其活性在ｐＨ４。５－１０、５５℃范围内较稳定,最适ｐＨ８．５最适温度５０℃,Ｋｍ（酪蛋白）值为０．１８５％（Ｗ／Ｖ）。用ＳＤＳ－ＰＡＧＥ和Ｓｅｐｈａｄｅｘ     

琥珀酰—CCK7对大鼠胰腺腺泡细胞分泌α淀粉酶和蛋白酶的影响

琥珀酰－ＣＣＫ７为新合成的ＣＣＫ８的一种类似物,当琥珀酰－ＣＣＫ７的浓度为１×１０＾－１１ｍｏｌ／Ｌ－１×１０［－７］ｍｏｌ／Ｌ时,能促使大鼠胰腺离体腺泡细胞分泌α淀粉酶和蛋白酶,其最有效浓度为１×１０＾－９ｍｏｌ／Ｌ。在相同摩尔条件下,琥珀酰－ＣＣＫ７的促分泌效应明显大于ＣＣＫ８,且这种效应在３小时内随着作用时间的延长而增加,这为开发高活性ＣＣＫ８的类似物提供了依据。     

地衣芽孢杆菌2709碱性蛋白酶编码序列的PCR扩增、克隆及序列测定

在地衣芽孢杆菌NCIB 6816菌株碱性蛋白酶基因已知序列的基础上,通过设计合适的引物,利用PCR(Polymerase Chain Reaction)技术从地衣芽孢杆菌2709菌株的柒色体DNA中扩增了2709碱性蛋白酶的编码序列。对两个克隆的PCR片段的全序列分析结果显示,2709碱性蛋白酶的编码序列同相应的NCIB 6816序列相比有3％左右的碱基组成差异。由此推定的2709碱性蛋白酶的氨基酸序列肯定了2709碱性蛋白酶属典型的subtilisin Carlsberg类,同时还表明来源于不同地衣芽孢杆菌菌株的subtilisin Carlsberg存在着若干氨基酸组成上的差异。     

剑麻蛋白酶的分离纯化及其部分特性的研究

采用乙醇分步沉淀和 DEAE-纤维素柱层析,可从剑麻 Agave sisalana 叶汁中分离到一个均一的蛋白酶组分,其结晶为平面六边形。该酶可为半胱氨酸和 EDTA 所激活,受 PCMB(p-chloromercuribenzoatc)、DTNB(5,5′-dithiobis(2-nitrobenzoic acid))及 Hg~(2 )、Ag~( )、Cu~(2 )的可逆抑制和碘乙酸(pH 7.5)的不可逆抑制。该酶以酪蛋白为底物时,酶反应的最适 pH 值约为7.5,最适温度为50℃,Km 值为0.0625%酪蛋白,该酶在45℃(含45℃)以下较为稳定。且在6.0—10.0的 pH 值范围内稳定。     

乳链球菌Z270乳糖－蛋白酶质粒pUCL22的消除及其整合

用简单的温和法消除乳链球菌Lactococcus lactis sub sp．Lactis Z270的乳糖-蛋白酶质粒pUCL22(54kb)。DNA普通琼脂糖凝胶电泳图和生化检验证明,变异菌株D16和D17的质粒pUCL22被消除了。脉冲电泳图表明,D16的染色体限制酶图谱与野生菌Z270的相似,但D17的染色体被质粒的蛋白酶基因多位点整合,从而改变了其染色体限制酶的酶切图。     

蕃茄蛋白酶抑制剂Ⅱa,Ⅱb的分离纯化及性质研究

经硫酸铵分级、ＣＭ－纤维素柱层析和Ｓｅｐｈａｄｅｘ Ｇ－７５柱层析,从野生型秘鲁蕃茄未成熟果实的匀浆液中分离纯化了蛋白酶抑制剂Ⅱａ,Ⅱｂ。纯化的蛋白酶抑制剂经ＳＤＳ－ＰＡＧＥ鉴定呈单一带,分子量均为１７ｋＤ。Ｗｅｓｔｅｒｎ ｂｌｏｔｔｉｎｇ结果表明蛋白酶抑制剂Ⅱａ,Ⅱｂ均与马铃薯蛋白酶抑制Ⅱ有血清学上的交叉反应。抑制蛋白酶活性测定显示两种蛋白酶抑制剂都表现强的抑制胰凝乳蛋白酶的活性,但对胰蛋白酶的     

丝氨酸蛋白酶抑制剂的研究及应用

丝氨酸蛋白酶抑制剂（serpin）是一类结构、序列同源的蛋白酶抑制剂,它是体内许多蛋白水解级联反应的调节因子,其遗传性结构或分泌异常将导致许多疾病．因此对于其结构及作用机理的研究将为临床应用提供依据．     

粘质赛氏菌胞外蛋白酶的提取、纯化及部分性质研究

经过硫酸铵３０％～５０％分级沉淀、二步柱层析可获聚丙烯酰胺凝胶电泳均一的粘质赛氏菌胞外蛋白酶制品,收率可达５３％,并制备了酶的结晶,该酶以ＳｅｐｈａｄｅｘＧ１００柱层析及ＳＤＳ－ＰＡＧＥ测得分子量约为８１０００,该酶的最适ｐＨ为７．０,最适温度为４５℃,Ｚｎ２＋、Ｍｎ２＋、Ｆｅ２＋、Ｃｕ２＋、Ｃｏ２＋等重金属离子不同程度地抑制酶活性。