Asia-Ⅰ口蹄疫病毒P1-2A基因真核表达质粒的构建及小鼠免疫试验

目的 构建含有Asia-Ⅰ型口蹄疫病毒(FMDV)衣壳蛋白前体P1-2A 基因的真核表达质粒pVAXⅠ-P1-2A,并用pVAXⅠ-P1-2A免疫小鼠,评价其体液免疫和细胞免疫水平。方法 通过RT-PCR 方法扩增得到含有FMDV P1-2A编码区的目的基因,并将其克隆到pMD18-T载体上。将pMD18-T-P1-2A和 pVAXⅠ分别经EcoRⅤ和XbaⅠ双酶切后连接构建真核表达质粒pVAXⅠ-P1-2A。将酶切鉴定正确后的重组质粒转染HeLa细胞进行IFA检测。再进行小鼠血清特异性抗体试验、小鼠T淋巴细胞增殖试验和IFN-γ ELISPOT试验。结果 酶切结果与预期目的条带大小相符;荧光结果表明经pVAXⅠ-P1-2A转染的细胞有明显的黄绿色荧光,说明P1-2A基因在HeLa细胞中得到了表达;小鼠免疫结果表明,用免疫的小鼠都产生了较强的体液免疫和细胞免疫,并且T淋巴细胞增殖数和产生IFN-γ的细胞数和对照组相比显著提高(P<0.05)。间接ELISA试验表明,在免疫第14天抗体水平比对照组明显增高(P<0.05)。结论 成功构建了真核表达质粒pVAXⅠ-P1-2A,并通过小鼠免疫试验发现重组质粒试验组能够诱导产生特异性的体液免疫和细胞免疫应答。     

桔小实蝇幼体及成虫残体DNA条形码识别技术的建立与应用

实蝇类害虫多为国内外检疫对象, 其鉴定识别方法主要依据成虫的外部形态特征, 而传统的形态学识别法对口岸经常截获的幼体及残缺的虫体, 则无能为力。本研究以桔小实蝇Bactrocera dorsalis的幼体（卵、 幼虫、 蛹）以及成虫残体（足、 翅、 头部、 胸部、 腹部）为对象, 利用 DNA 条形码技术, 构建实蝇类害虫快速鉴定技术体系, 并以其他4种常见实蝇（包括番石榴实蝇B. correcta、 瓜实蝇B. cucurbitae、 南亚果实蝇B. tau、 柑桔大实蝇B. minax）为对象对该技术体系进行应用验证。结果显示, 桔小实蝇幼体以及成虫残体的碱基序列与数据库中靶标种COⅠ基因碱基序列的一致性为99.51%~99.84%, 其他4种实蝇相应序列与数据库中靶标种COⅠ基因序列的一致性分别为100%, 100%, 99.81%~99.83%和100%; 以邻接法（NJ法）构建系统发育树, 靶标种实蝇均与数据库中对应种实蝇聚为一支, 且置信度均为100%。以K2-P模型计算种内及种间遗传距离得出, 5种实蝇的种间遗传距离为0.0597~0.2363, 平均为0.1693; 种内遗传距离为0.0000~0.0041, 平均为0.0019。这些结果表明, 基于DNA条形码的物种识别技术完全可用于口岸截获的实蝇类害虫幼体及残体的准确鉴定。     

基于COⅠ和Cyt b基因序列的凤蝶科六属分子系统学研究

对凤蝶科6属25种的COⅠ基因和20种Cyt b基因的部分序列进行测定和分析, 探讨它们之间的系统发育关系; 以茶小卷叶蛾Adoxophyes honmai为外群, 用邻接法(neighbor-joining, NJ)、 最大简约法(maximum parsimony, MP)和贝叶斯法(Bayesian inference, BI)重建了凤蝶科6属的分子系统树。结果表明： COⅠ基因部分序列长度为661 bp, 其中保守位点417个, 可变位点244个, 简约信息位点191个; A+T的平均含量为70.3%, 明显高于C+G的平均含量29.6%。Cyt b基因部分序列长度为433 bp, 其中保守位点239个, 可变位点194个, 简约信息位点135个; A+T的平均含量为74.2%, 明显高于C+G的平均含量25.7%。分子系统树表明, 凤蝶属Papilio、 斑凤蝶属Chilasa、 尾凤蝶属Bhutanitis、 珠凤蝶属Pachliopta和喙凤蝶属Teinopalpus为单系性, 与传统形态分类结果相一致。但青凤蝶属Graphium单系性不够明确, 需要进一步探讨。研究结果为我国凤蝶科分子系统学研究积累了资料。     

亚硒酸钠对AH_(22)小鼠腹水型肝癌细胞中组织特异酶CPSⅠ的诱导及对细胞增殖酶ACT的抑制

通过连续四天腹腔给硒(1μgNa_2SeO_3/克体重)后,腹水型肝癌细胞中与细胞分化相关的CPS_(ase)Ⅰ活性显著上升,同时与细胞增殖相关的ACT_(ase)活性明显下降。而在正常鼠肝中,按相同方式给硒的结果是ACT_(ase)活性明显增高,CPS_(ase)Ⅰ活性则略有下降。该结果表明硒可能涉及对细胞分化与增殖的调控。     

外来入侵种红脂大小蠹COⅠ基因分化的研究

红脂大小蠹Dendroctonu svalens LeConte为近年来危害最为严重的外来入侵生物。本研究利用特异引物扩增出红脂大小蠹COⅠ基因序列(GenBank登录号:GQ495096-GQ495128),在160个位点中发现3个该种与大小蠹属其他种不同的特异位点;比较不同地理种群的红脂大小蠹,发现中国种群间遗传分化不明显,说明入侵种的瓶颈效应,而遗传变异是入侵种与环境长期互作的结果;基于COⅠ基因序列比对的研究发现,入侵中国的红脂大小蠹与该虫原发生地北美洲部分种群具有同源性。     

前列腺Ⅰ号抗炎镇痛作用以及抗前列腺炎的实验研究

采用热板法和扭体法观察前列腺Ⅰ号抗炎、镇痛以及抗大鼠实验性前列腺炎的作用。采用小鼠耳廓二甲苯制炎法观察抗炎作用,前列腺炎模型采用向大鼠前列腺组织内注入角叉菜胶的方法。结果显示前列腺Ⅰ号能减少小鼠扭体反应数,延长小鼠热板法引起的痛反应潜伏期,对小鼠耳廓肿胀有明显的抑制作用,前列腺炎模型试验中,前列腺液检查卵磷脂小体明显增加,白细胞数降低。因此前列腺Ⅰ号具有明显的抗炎、镇痛以及抗前列腺炎的作用。     

Genetic variation in vitamin D receptor gene (Fok1:rs2228570) is associated with risk of coronary artery disease

Objective: The Fok1 polymorphism (rs2228570) in vitamin D receptor gene appears to be the only polymorphism influencing size of translated protein. Investigations into its association with coronary artery disease (CAD) are sparse.

Methods: Male patients (n?=?98) with verified CAD were recruited alongside age- and sex-matched controls (n?=?55). Genotyping was performed by PCR-RFLP and plasma 25-Hydroxyvitamin D levels were assessed by HPLC-UV.

Results: The C-variant (mutant) was predominantly expressed in patients compared to controls (68.9% versus 55.5%; p?=?0.025). The observed genotypes were not associated with 25-Hydroxyvitamin D levels.

Conclusion: This study presents Fok1 polymorphism as a potential genetic marker for CAD.     

新疆准噶尔盆地北缘晚渐新世睡鼠再研究（英文）

周氏似日本睡鼠Gliruloides zhoui是发现于新疆准噶尔盆地北缘晚渐新世铁尔斯哈巴合哺乳动物组合I带的一个化石新属种。新属似日本睡鼠Gliruloides的属征为:中等大小;颊齿咀嚼面凹;上、下颊齿通常具9条主要横脊,有时具次级附脊;上颊齿的前边附脊和后边附脊以及下颊齿的下前边附脊和下后边附脊都很发育,几乎占据了其所在齿谷的整个长度。上颊齿的横脊唇端趋于游离。M1和M2具V形或窄U形三角座,内脊不完整或近于完整,前中央脊不与内脊相连。下颊齿的下内脊通常不连续;下臼齿的下前边脊在唇端稍向后弯,但不与原尖相连。p4,m1-m3,P4,M1-M3的齿根数分别为2,2,3,3。新属与Glirulus在形态上相似,但Glirulus的上颊齿的三角座均为宽U型,具有完整的内脊,前中央脊通常与内脊相交,横脊唇端通常不游离。新属与Vasseuromys属的最主要形态差异在于上颊齿具有很发育的前边附脊和后边附脊,而后者上颊齿的前边附脊和后边附脊通常缺失或很不发育。归入该属的种还有土耳其早中新世的Vasseuromys duplex和Vasseuromys aff.V.duplex。土耳其Thrace早渐新世的Glis guerbuezi很可能是Gliruloides和Glirulus的共同祖先类型。Gliruloides可能生活于温湿的生态环境。     

入侵害虫西花蓟马及其他8种常见蓟马的分子鉴定

用PCR产物直接测序法对入侵害虫西花蓟马和其他8种蓟马的线粒体 COⅠ基因433 bp片段测序，获得62个个体的序列。分子数据分析显示： 种内个体间平均遗传距离在0～0.005之间，2003年在北京发现的西花蓟马与欧洲等地区报导的西花蓟马不存在明显的遗传差异； 9种蓟马种间平均遗传距离为0.213。构建的NJ树可以很好的显示蓟马的聚类，物种各单元型最初分支自展值均达到100%。结果表明，基于PCR及直接测序技术的分子鉴定可以达到准确鉴定蓟马物种之目的。     

北京鸭apoA－Ⅰ溴化氰裂解片段的分离纯化、性质及其与鸭肝HDL受体结合研究

本文对北京鸭ａｐｏＡ－Ⅰ溴化氰裂解片段的理化性质、部分结构和抗原性以及其与鸭肝细胞膜ＨＤＬ受体的结合进行了研究。ａｐｏＡ－Ⅰ用溴化氰裂解后经ＨＰＬＣ分离得两个纯的肽段Ｐ５和Ｐ６,对二肽段作了氨基酸组成分析,并分别测定了Ｐ５,Ｐ６Ｎ端的１４和９个氨基酸残基序列。通过与鸡ａｐｏＡ－Ⅰ的比较,根据同源性及肽段大小,定出Ｐ５、Ｐ６分别位于鸭ａｐｏＡ－Ⅰ的第１３８－１７０ａａ和第７５－１３６ａａ的区域。Ｉｍｍｕｎｏ－ｂｌｏｔｔｉｎｇ法测定结果表明,Ｐ５、Ｐ６都含有鸭ａｐｏＡ－Ⅰ的抗原决定簇;用Ｗｅｓｔｅｒｎ－ｂｌｏｔｔｉｎｇ免疫检测,发现鸭ａｐｏＡ－Ⅰ的Ｐ５、Ｐ６二片段都能与鸭肝细胞膜ＨＤＬ受体结合,提示鸭ａｐｏＡ－Ⅰ的中间区域即第７５－１７０ａａ区域可能参予鸭ａｐｏＡ－Ⅰ与鸭肝ＨＤＬ受体的结合。