哺乳动物细胞分泌的乙型肝炎病毒表面S+PreS1融合抗原的理化和生物学性状

研究了哺乳动物细胞(转基因GdSS1-18细胞系)分泌的乙型肝炎(乙肝)病毒表面S+PreS1融合抗原(SS1)纯品的理化及生物学性状,结果表明:经HPLC柱层析呈现一个对称峰,证明HBsAg颗粒所带电荷的均一性;SDS-PAGE出现P24及P27条带,未出现Gp30的条带,凝胶扫描分析其各条带分别各占22 3%、77 7%、0%;West ernblot试验证实,P27和Gp30能与S及S1抗体结合,而P24条带仅能与S抗体结合,表明S、PreS1是特异性条带;N-末端的氨基酸序列与所用目的基因编码的序列相同;乙肝SS1融合抗原在4℃储存较稳定。动物实验结果表明:与单纯含S基因的参比疫苗相比,含SS1融合基因疫苗免疫Balb/c小鼠既产生S抗体,又产生S1抗体,S抗体的ED50滴度与参比疫苗相似,S1抗体产生早于S抗体。     

不同的抗原修复方法和染色条件对P53蛋白免疫组织化学方法结果的影响

用免疫组织化学技术检测肿瘤组织中Ｐ53 基因蛋白产物的表达 ,是探讨Ｐ53 基因与多种肿瘤的相关性研究的主要手段之一。在免疫组织化学检测中 ,不同的抗原修复方法对Ｐ53 蛋白检测结果的阳性率和染色强度有不同的影响。本文在免疫组织化学检测Ｐ53 蛋白时对不同的抗原修复方法和染色条件进行了探讨 ,摸索出能较佳地显示Ｐ53 蛋白的免疫组织化学方法条件。介绍如下 :1.材料和方法1 1材料 :经临床病理诊断为恶性肿瘤如肺癌、乳腺癌、宫颈癌、卵巢癌和大肠癌等福尔马林固定、石蜡包埋的组织 ;单克隆抗体Ｐ53 ＤＯ - 7和ＬＳＡＢ试剂盒为ＤＡＫ…     

基因重组戊肝病毒多价复合抗原的表达及初步应用

目的：利用基因工程技术体外表达高效HEV多价复合抗原,建立一套敏感和特异的抗HEV检测体系,方法：将前期构建的基因重组戊肝病毒多价复合抗原表达质粒转化大肠埃希菌JM109。筛选鉴定阳性克隆并进行诱导表达,表达产物经分子筛层析纯化后,利用western blot作抗原特异性鉴定,以此抗原建立ELISA检测卫生部生物药品检定所HEV血清参比品及临床血清标本,同时以Genelab公司抗HEVELISA试剂盒作为对照进行对比研究。结果：重组质粒转化大肠埃希菌JM109株后的阳性克隆,经诱导在SDS-PAGE中出现一条分子量大小约为31.5kD的蛋白条带,该蛋白纯化后经Western Blotting检测证实为HEV特异性抗原,以此抗原包被酶联板建立ELISA检测53份国家卫生部标准HEV参比血清,灵敏度达100%（38/38）,特异度达93.3%(14/15)。用此方法检测68份临床标本,并与Gene4labELISA试剂盒结果比较,两者阴阳性相符的有64份,总符合率为94.1%。结论：本实验克隆表达的基因重组戊肝病毒多价复合抗原具有良好抗原性,以此抗原建立的抗HEVELISA具有灵敏度高,特异性强的特点,可望为戊型肝炎的血清学诊断和流行病学调查提供一种更为有效的检测手段。     

超抗原及其应用前景

本文对超抗原的研究现状及其应用前景作了概要的介绍,可供有关工作者参考。     

恶性疟原虫红内期Pf332抗原基因未知序列的测定及分析

测定恶性疟原虫红内期Pf332抗原 (Ag332 )基因的未知序列 ,并进行序列分析 .根据非洲恶性疟原虫Palo alto株Pf332基因的G1片段序列 ,设计 1对引物 ,从中国恶性疟原虫海南株 (FCC1 HN)基因组DNA中扩增出P332 1片段 .Pf332基因中经常出现SVTEEI短肽的编码序列 ,据此分别设计非特异的正、反义寡核苷酸引物 (NSP1、NSP2 ) ,应用低严谨PCR(LSPCR)分别扩增出P332 1邻近的未知序列片段P332 up1和P332 dow1.根据恶性疟原虫Palo alto株Pf332基因G1片段上、下游的G9和C1片段序列以及测定的P332 up1和P332 dow1序列 ,分别设计 2对特异引物继续扩增邻近的未知序列片段P332 up2和P332 dow2 .根据P332 dow2片段的 3'端序列 ,设计 2条特异引物分别与非特异引物NSP2行LSPCR和巢式PCR ,扩增出P332 dow2邻近的未知序列片段P332 dow3.对获得的Pf332基因片段进行序列测定 ,并用分子生物学软件辅助进行序列分析 .序列测定和拼接结果显示 ,共获得了连续 6 14 4bp的恶性疟原虫FCC1 HN株Pf332基因序列 .序列分析表明 ,所获得的 614 4bp序列位于Pf332基因的编码区内 ,不含内含子 ,编码 2 0 4 8个氨基酸残基 ,包含 5个氨基酸残基重复区 .对恶性疟原虫FCC1 HN株Pf332基因 6 14 4bp序列的测定和分析 ,为获得Pf332全基因     

人肠组织特异抗原A33基因5′调控区的克隆及其功能分析

用基因组步行法 (genomewalker)克隆了人A33抗原基因的 5′调控区 94 0bp片段 ,并用PCR法鉴定了这一克隆的正确性 .将该序列提交GenBank ,登录号为AF2 0 0 6 2 6 .用引物延伸法 (primerex tension)确定了A33基因的转录起始位点 ,发现该位点位于一个TATA盒下游 10个碱基处 .以增强型绿色荧光蛋白为报告基因构建了不同长度的A33启动子 5′缺失载体 ,用脂质体介导的方法将这些载体转染LoVo、HeLa、2 93等细胞 ,比较了EGFP的表达水平 .研究发现 ,A33启动子上主要转录调控元件以及与组织特异性表达相关的转录调控元件位于A33启动子的 - 10 4～ + 2 5bp区域     

肿瘤相关抗原基因HCA519在昆虫细胞中的表达和纯化

为进行肿瘤细胞免疫应答的研究及制备肿瘤诊断用抗体 ,利用昆虫细胞表达系统表达了肿瘤相关性抗原HCA5 19的重组蛋白 ,并进行了纯化 .所表达的重组蛋白分子量约 10 0kD ,含 75 5个氨基酸残基 ,在HCA5 19cDNA3′端接入FLAG序列 ,则在重组蛋白C端接入 1个 8肽的FLAG尾 .利用其特异性抗体可以有效地纯化重组蛋白 .该FLAGTAG不影响整个重组蛋白的免疫反应性 .纯化的重组蛋白与天然蛋白具有相同或相似的免疫反应性 .它可与识别天然蛋白的血清抗体发生同样的阳性反应 .HCA5 19的足量提供 ,可以免疫动物 ,制备抗体 ;可作为抗原 ,分析其诱导肿瘤病人CTL的特异应答 ,从而评估其作为临床肿瘤疫苗的可能性     

前列腺特异膜抗原在Pichia pastoris酵母中的表达及鉴定

前列腺特异膜抗原是一种具有高度前列腺特异性的糖蛋白 ,其表达的增高与肿瘤的术后复发、激素抵抗及较差的预后正相关 ,在前列腺癌的诊断和治疗中有广泛的应用前景 .从前列腺癌组织提取总RNA ,利用RT PCR技术获得PSMA基因的全长序列 ,构建了重组酵母表达载体pPIC3.5K PSMA .电击法转化Pichiapastoris酵母 ,通过表型筛选和PCR鉴定证实该基因已稳定整合入Pichiapastoris酵母基因组中 .SDS PAGE显示 ,获得的PSMA蛋白分子量约 10 0kD ,表达产物经West ern印迹证实可特异地与PSMA单克隆抗体 4G5结合 .结果表明 ,成功地获得PSMA编码的cDNA并在酵母细胞中获得表达 .     

自噬作用引起自身耐受

一个对自身组织耐受且功能完整的T细胞库的建立离不开对胸腺上皮细胞（thymic epithelial cells,TECs）提呈的主要组织相容性复合体Ⅱ（major histocompatibility complex class II,MHC Ⅱ）-自身抗原肽表位复合物的识别过程。已知在骨髓造血系统的抗原提呈细胞产生MHCⅡ-自身抗原肽复合物主要是通过细胞的内吞作用。TECs是非造血细胞中唯一能够持续表达MHCⅡ的细胞,属于专职的抗原提呈细胞（antigenpresenting cell,APC）。     

噬菌体展示技术及其在寄生虫研究中的应用

噬菌体展示技术是将外源蛋白或多肽的编码基因或DNA序列插入到噬菌体外壳蛋白结构基因的适当位置,使外源基因随外壳蛋白的表达而表达,并随噬菌体的重新组装而展示到噬菌体表面的生物技术.在研究蛋白质识别或蛋白质与核酸相互作用的生物学过程、蛋白质定向改造、研制新型多肽药物、疫苗和抗体等多领域具有重要作用.就噬菌体展示技术基本原理及特点,以及噬菌体展示技术在寄生虫研究中的应用做一简要综述.