枯草芽胞杆菌基因组删减对异源酶表达影响的研究进展

枯草芽胞杆菌作为一种遗传背景清晰、基因编辑成熟的革兰氏阳性菌,是多种重要工业酶的生产宿主.随着转录组、蛋白质组、代谢组等多组学测序和分析技术的发展,通过合理设计简化枯草芽胞杆菌基因组,减少细胞内冗余的调控和代谢网络,使得细胞更精简且便于控制,展现出了枯草芽胞杆菌作为异源酶表达宿主细胞的应用潜力.本文简要综述了枯草芽胞杆...     

细胞因子人MK基因的克隆及在大肠杆菌中的高效表达(简报)

细胞因子Midkine(简称MK)是新发现的一类肝素结合因子家族中的一员。1988年,Kadamatsu等利用差异杂交法在经维甲酸诱导分化的小鼠畸胎瘤细胞株HM-1中首先克隆到小鼠MK基因。人MK基因则最早是从λgt10人胚肾(20-24周)cDNA库和EMBL-3人胎盘基因组库获得。成熟     

tPA突变体在哺乳动物细胞中的表达

利用携带有二氢叶酸还原酶(dhfr)基因的pCI载体,实现tPA突变体(FrGGI)在CHO-dhfr^-细胞中的高效表达,获得高表达细胞株。采用分子克隆常规技术,将去除3’端非蛋白编码区的tPA突变体cDNA与pCI载体连接,构建真核表达载体pCI—tPA;采用阳离子脂质体转染法转染CHO-dhfr^-胞。经酶切及测序鉴定,证明所构建的质粒正确,转染CHO—dhfr细胞后,经过MTX加压筛选,得到了10株表达水平较高的细胞株,其活性可达每106细胞4000U／24h。以上结果为进行tPA突变体工程细胞株的筛选奠定了基础。     

共表达SHMT和TPase载体的构建及双酶法合成L-色氨酸

利用重组大肠杆菌表达丝氨酸羟甲基转移酶(SHMT)和色氨酸酶(TPase),并利用双酶法合成L-色氨酸。采用PCR从大肠杆菌K12基因组中扩增上述两种酶的基因,利用pET-28a载体,构建单表达重组质粒pET-SHMT、pET-TPase和共表达重组质粒pET-ST。将上述3种重组质粒转入大肠杆菌BL21(DE3)进行表达。SDS-PAGE结果表明,单表达基因工程菌BL21(DE3)/pET-SHMT和BL21(DE3)/pET-TPase分别在47kDa(SHMT)和50kDa(TPase)处有蛋白表达带;共表达基因工程菌BL21(DE3)/pET-ST在上述两处均有蛋白表达带。与宿主菌相比,单表达SHMT基因工程菌产酶活性提高了6.4倍;单表达TPase基因工程菌产酶活性提高了8.4倍;共表达SHMT和TPase基因工程菌产酶活性分别提高了6.1和6.9倍。利用工程菌所产酶进行双菌双酶法和单菌双酶法合成L-色氨酸。两菌双酶合成L-色氨酸的累积量达到41.5g/L,甘氨酸转化率为83.3%,吲哚转化率为92.5%;单菌双酶合成L-色氨酸的累积量达到28.9g/L,甘氨酸转化率为82.7%,吲哚转化率为82.9%。     

Soybean ferritin: isolation, characterization, and free radical generation

The main aim of this work was to assess the multi-task role of ferritin(Ft)in the oxidative metabolism of soybean(Glycine max).Soybean seeds incubated for 24 h yielded 41 ± 5 μg Ft/g fresh weight.The rate of in vitro incorporation of iron(Fe)into Ft was tested by supplementing the reaction medium with physiological Fe chelators.The control rate,observed in the presence of 100 μM Fe,was not significantly different from the values observed in the presence of 100 μM Fe-his.However,it was significantly higher in the presence of 100 μM Fe-citrate(approximately 4.5-fold)or of 100 μM Fe-ATP(approximately 14-fold).Moreover,a substantial decrease in the Trp-dependent fluorescence of the Ft protein was determined during Fe uptake from Fe-citrate,as compared with the control.On the other hand,Ft addition to homogenates from soybean embryonic axes reduced endogenously generated ascorbyl radical,according to its capacity for Fe uptake.The data presented here suggest that Ft could be involved in the generation of free radicals,such as hydroxyl radical,by Fe-catalyzed reactions.Moreover,the scavenging of these radicals by Ft itself could then lead to protein damage.However,Ft could also prevent cellular damage by the uptake of catalytically active Fe.     

新疆维吾尔族妇女宫颈癌组织中乳头瘤病毒16型E6基因的克隆和序列分析

为了分析新疆南部地区维吾尔族妇女宫颈癌组织中HPV16型E6基因结构特点，从中国新疆南部地区维吾尔族妇女宫颈癌活检组织标本中提取DNA，以宫颈癌活检组织标本DNA为模板进行PCR扩增，获得HPV16 E6基因，将其克隆到pUCm-T载体上，并对其进行基因全序列分析.PCR检测结果显示宫颈癌组织中HPV16 E6阳性率为82.35%（14/17）；测序结果显示，新疆株HPV16 E6基因全长456 bp，大小与德国标准株一致.E6基因的第247位碱基发生T→G突变，并由此引起所编码的氨基酸亦发生改变.上述结果表明，中国新疆南部地区维吾尔族妇女宫颈癌患者组织中HPV16 E6的基因结构与德国标准株HPV16 E6基因之间存在差异.     

研究报告：阿尔茨海默病发生发展中关键E3泛素连接酶的筛选

目的 探索阿尔茨海默病（Alzheimer’s disease,AD）发病中的关键E3泛素连接酶及其表达特征。方法 通过生物信息学方法分析筛选AD发生发展过程中的差异基因,行基因本体（GO）分析,并构建蛋白质互作网络（PPI）。继而,通过The Human Protein Atlas和Alzdata数据库,分别查找泛素-蛋白酶体系统（ubiquitin-proteasome system,UPS）中的E3泛素连接酶的组织细胞学定位和AD患者/对照不同脑区中的表达值,并通过qPCR方法在AD小鼠脑组织中验证。结果 我们发现UPS和泛素结合酶结构域UBCc分别在参与AD发生进程的生物学功能和结构域中位居首列;PPI互作网络中多个UPS分子位居关键节点;神经元中特异性高表达的E3泛素连接酶（MKRN2、NEDD4L、LNX1、RNF41、TRIM36、RNF8和DTX4）在AD患者和AD小鼠脑组织中表达量下调。结论 这7个E3泛素连接酶可能作为驱动因子参与AD进展,这对进一步寻找诊断和治疗AD的新靶点以及深入的机制探索提供了重要线索。     

苹果酸-乳酸发酵相关基因克隆及其在酵母中的表达

苹果酸乳酸发酵是不同葡萄酒酿造过程中至关重要的降酸步骤。近20年来,围绕苹果酸乳酸发酵相关基因的克隆以及在酿酒酵母中表达的研究取得了一些进展,就该研究进展和存在的问题进行了综述。此外,也论及了苹果酸-乙醇发酵相关基因的研究,这对于一些不适合苹果酸-乳酸发酵的葡萄酒具有重要意义 。     

叶子花花瓣状苞片和叶片的比较转录组学研究

叶子花(Bougainvillea spectabilis Willd.)的苞片色彩鲜艳,呈花瓣状,在景观园艺和环境美化有着广泛应用。为了进一步了解花瓣状苞片的演化机制,该研究采用RNA-seq技术分别对苞片和叶片进行测序,比较苞片和叶片在基因表达水平的差异。最终获得54.48 M对长度为150bp的双向clean reads,从头拼接出55 782条Unigenes,平均长度为1 003.79bp,N50为1 402bp。共有30 874条Unigenes能被注释到公共数据库,其中有12 631条Unigenes能被注释到基因本体。差异化表达分析确定苞片和叶片差异表达的基因共有456个。该研究分别对不同组织差异表达的基因进行GO富集分析和KEGG富集分析,结果表明,在苞片中高表达的差异化基因有黄酮类合成相关的基因,花色合成关键酶多巴双加氧酶(DODA)以及发现与花瓣发育相关的基因,在叶片中高表达的差异化基因主要是参与光合作用。     

防御素基因工程制备研究进展

本文综述了防御素在重组表达与制备方面的主要进展, 包括在原核细胞表达时宿主菌、载体、表达策略的选择, 在酵母等真核细胞中进行重组表达的优缺点, 以及重组防御素纯化研究的现状。本文还概括了当前防御素研发与临床应用面临的主要问题, 将来的研究方向和开发前景。