全文获取类型
收费全文 | 7548篇 |
免费 | 277篇 |
国内免费 | 2993篇 |
出版年
2024年 | 35篇 |
2023年 | 112篇 |
2022年 | 165篇 |
2021年 | 180篇 |
2020年 | 155篇 |
2019年 | 150篇 |
2018年 | 119篇 |
2017年 | 163篇 |
2016年 | 172篇 |
2015年 | 225篇 |
2014年 | 449篇 |
2013年 | 378篇 |
2012年 | 378篇 |
2011年 | 440篇 |
2010年 | 394篇 |
2009年 | 465篇 |
2008年 | 575篇 |
2007年 | 470篇 |
2006年 | 498篇 |
2005年 | 511篇 |
2004年 | 503篇 |
2003年 | 436篇 |
2002年 | 454篇 |
2001年 | 414篇 |
2000年 | 381篇 |
1999年 | 337篇 |
1998年 | 273篇 |
1997年 | 245篇 |
1996年 | 231篇 |
1995年 | 196篇 |
1994年 | 205篇 |
1993年 | 166篇 |
1992年 | 142篇 |
1991年 | 151篇 |
1990年 | 161篇 |
1989年 | 152篇 |
1988年 | 52篇 |
1987年 | 60篇 |
1986年 | 63篇 |
1985年 | 70篇 |
1984年 | 45篇 |
1983年 | 19篇 |
1982年 | 13篇 |
1981年 | 12篇 |
1980年 | 2篇 |
1963年 | 1篇 |
排序方式: 共有10000条查询结果,搜索用时 15 毫秒
91.
92.
单纯疱疹病毒(HSV)Ⅰ型及Ⅱ型之间有很多共同抗原,能引起血清学交叉反应,鉴别诊断比较困难。本实验利用重组DNA技术,将部分HSV-2DNA的PstI片段克隆到载体质粒PSK中,并筛选出两个重组质粒(P和P)只与HSV-2反应,与HSV-1不反应,这两个重组质粒中所含的HSV-2DNA片段大小分别是3.1和4.3kb,另外,还筛选了一个重组质粒(PHSV2-1,含5.8kbHSV-2DNA片段)与HSV-1和HSV-2均反应。将4.3kb的片段用光生物素标记后作为探针检测了159份人阴道拭子,其中23份样品呈阳性反应,其余均为阴性,从23份阳性样品中挑选12价涂片用间接荧光抗体法检测也都呈阳性反应,随机挑选的几份杂交反应阴性样品在间接荧光试验中也是阴性。本实验制备的HSV通用及HSV-2型特异性探针将比常规的血清学方法诊断和鉴别HSV-1和HSV-2感染更为可靠。 相似文献
93.
PCR和生物素探针对HFRSV的检测和分型的探讨 总被引:2,自引:0,他引:2
分析比较肾综合征出血热病毒(HFRSV)76/118株和R_(22)株的核苷酸序列,根据引物设计原则及检测分型的目的,设计并合成了3对引物。1对引物取于两毒株间的高同源区段,作为共同引物和外引物;另两对引物取于两毒株间的低同源区段,分别作为野鼠型引物、家鼠型引物和内引物。建立了DNA聚合酶链反应(PCR)和NestPCR方法,并用NcstPCR合成了两种型特异的生物素探针。PCR检测76/118、A_9、陈、R_2、R_225个毒株,用外引物时均扩增出1条约300bp的条带;用内引物的野鼠型引物时,除R_(22)株之外,其余4株均扩增出1条约70bp的条带。斑点杂交试验证实了PCR检测分型的准确性。NestPCR和生物素探针斑点杂交试验可以测出1-10bg的目的cDNA。 相似文献
94.
双裂解法提取血清HBV DNA技术的建立 总被引:1,自引:1,他引:0
为进行PCR实验建立了一种两步裂解血清HBV提取其DNA的方法。该法首先用SDS及蛋白酶消化裂解病毒,随后再进行碱裂解,操作较酚提取法大为简化,而PCR实验进行的两法的灵敏性比较,说明双裂解法至少不低于酚法。 相似文献
95.
96.
我们设计了一种高效的专一位点诱变方法,可从混合体中清除野生型DNA。并将所需突变DNA转入被转化细胞中,如此合成了与一种DNA分子目标序列一致的并带有能产生限制性内切酶位点的插入突变的两条互补的寡核苷酸链。利用野生型DNA分子中的两端各有两个限制性位点的一段目标DNA片段作为模板,上述合成的两种寡核苷酸引物被延伸、富集并分离。被延伸的产物在聚合酶链式反应中又反过来被用作模板,以获得突变的双链DNA片段,此片段通过其两端的限制性位点能很方便地用侧面限制性内切位点克隆到质粒中去。用这些质粒转化的大肠杆菌(Escherichiacoli)细胞可进行大量的分析。通过集落杂交试验、限制性内切酶分析和DNA序列分析,得知这些转化体百分之百含有突变型的DNA序列。 相似文献
97.
98.
99.
RecA蛋白在原核生物DNA损伤的修复和同源重组中起关键怍用。近年来人们对其生物学特性.分子结构与功能以及从真核生物探索其结构或功能类似物的研究方面,都有很大的突破。本文就RecA的结构与功能,RecA的分子生物学研究进展以及真核细胞中的RecA类似物的研究现状作一简要综述。 相似文献
100.
莱氏衣原体膜上Mg~(2+)-ATPase用DOC溶解后,经Sepharose-6B和DEAE-CelluloseDE-52离子交换柱,得到了部分纯化的Mg~(2+)ATPase,并将此ATPase与不同极性头部的磷脂和膜糖脂重组,研究了不同的极性头部的磷脂和膜糖脂对ATPase活性的影响。此酶的活性不依赖酸性磷脂,PG、DPG、大豆磷脂等明显抑制酶活性,中性磷脂DMPC、PE、PC则能增加酶活性,其中尤以非双层脂PE的作用最为明显。从莱氏衣原体膜上提取的糖脂(MGDG,DGDG)单独和ATPase重组时,酶活性增加并不明显,当MGDG和DGDG以等比例混合时,能大大地增加酶活性。这表明Mg~(2+)-ATPase的活性很大程度上与磷脂的表面电荷及磷脂的组成相关。 相似文献