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71.
利用两种不相容质粒在大肠杆菌中共表达DFF45和DFF40 总被引:1,自引:0,他引:1
DNA断裂因子(DNA fragmentation factor,DFF)是细胞凋亡过程中起重要作用的蛋白质之一,它由分子量为45kD和40kD的两个亚基构成,分别称为DFF45和DFF40。利用RT-PCR技术从人宫颈癌细胞系HeLa的总RNA中扩增了DFF45和DFF40的cDNA,分别克隆到到卡那霉素抗性表达载体pET-28a( )中,构建了pET28a-DFF45和pET28a-DFF40。用它们单独转化大肠杆菌BL21(DE3)后,经IPTG诱导都可获得高效表达。表达的重组蛋白质各自约占菌体总蛋白质的56%和22%。再将DFF45的cDNA克隆到氨苄青霉素抗性表达载体pET-21a( )中,得到了pET21a-DFF45。利用二者的不同抗性,将pET28a-DFF40和pET21a-DFF45共同转化大肠杆菌BL21(DE3),工程菌经IPTG诱导后实现了DFF45和DFF40的共表达,表达产物各约占菌体总蛋白质的30%和17%。为了研究这两种不相容质粒在细菌中共存的稳定性,我们将共转化子在同时含有卡那霉素和氨苄青霉素的液体培养基中连续培养14h,发现此时仍有75%以上的细菌可同时耐受两种抗生素,即同时含有pET28a-DFF45和pET28a-DFF40,说明利用两个具有不同抗性的不相容载体进行蛋白质共表达的方法是可行的。 相似文献
72.
人胃及其癌组织的RAPD多态性分析 总被引:1,自引:0,他引:1
为了研究细胞癌变后DNA结构的改变,探讨这种改变和肿瘤发生、发展 的关系,用AP-PCR扩增胃癌及其癌旁和正常组织DNA。结果表明,引物P1(5′CGGCCCCGGT3′)对上述三种组织的扩增产物的电泳图谱表现出多态性;然而,引物P2(5′TTTGCCCGGT3′)对上述三种组织的扩增产物的电泳带型一样,没有表现出多态性。这说明,细胞癌变后DNA结构在引物PI顺序处发生了突变;这些突变可能和细胞的癌变有关。 相似文献
73.
真核生物基因组DNA多态性 总被引:2,自引:0,他引:2
对真核生物基因组中小卫星DNA多态性,微卫星DNA多态性,限制性酶切片段长度多态性,随机扩增多态DNA以及单链构象多态性的形式机理和表现形式进行了概述。 相似文献
74.
75.
华中五味子干燥材料DNA提取方法的研究 总被引:1,自引:2,他引:1
目的:建立一套适合从华中五味子硅胶干燥的幼芽中提取高质量DNA的方法,为进一步开展分子生物学研究奠定基础。方法:比较SDS法、SIX-CTAB法、SDS-CTAB法以及经过作者改进的CTAB法,运用紫外光谱和电泳分析方法测定所得DNA样品的纯度与完整性。结果:四种方法中改进CTAB法所得DNA纯度最高,完整性好,其A260/A280值为1.81,A260/A230值为2.13,经稳定性试验证明该方法稳定。结论:改进CTAB法是一套适合从华中五味子硅胶干燥的幼芽中提取高质量DNA的方法。 相似文献
76.
DNA生物传感器研究进展 总被引:1,自引:0,他引:1
李月娟 《国外医学:分子生物学分册》1998,20(2):83-87
本根据作用机理不同将DNA生物传感器分为DNA光化学传感器,DNA电化学传感器和压电晶体传感器,并就几种方面的研究进展进行了综述。 相似文献
77.
单链环状DNA基因组的发现关键词单链环状DNA常有学生问我:您是如何着手寻找单链DNA病毒的?您怎么一下子就找到了头绪?寻找单链DNA并不是我最初的目标,发现它们完全是偶然机遇,或者说是因为敢于相信自己的试验数据。实际上,一开始我是想弄清楚某一病毒结... 相似文献
78.
《现代生物医学进展》2007,7(12):I0001-I0004
PCR是80年代中期发展起来的体外核酸扩增技术。它具有特异、敏感、产率高、快速、简便、重复性好、易自动化等突出的优点;能在一个试管内将所要研究的目的基因或某一DNA片段于数小时内扩增至十万乃至百万倍,使肉眼能直接观察和判断;可从一根毛发、一滴血、甚至一个细胞中扩增出足量的DNA供分析研究和检测鉴定。过去几天几星期才能做到的事情,用PCR几小时便可完成。PCR技术是生物医学领域中的一项革命性创举和里程碑。 相似文献
79.
《现代生物医学进展》2007,7(7):I0003-I0003
新华网北京6月1日电:记者1日从中国科学院上海应用物理研究所获悉,研究人员利用自主研发的特殊纳米操纵技术——“动态组合纳米蘸笔”,向DNA分子手术实际应用迈出了关键一步。[编者按] 相似文献
80.