分子生物学研究的好材料──大肠杆菌（下）（分裂繁殖和染色体复制）

由于大肠杆菌生长迅速,操作方便,使之成为分子生物学研究的好材料。大肠杆菌的分裂、复制、基因表达及调控、遗传重组等已研究得十分清楚,并已成为原核生物的模式。本文简要介绍大肠杆菌的分裂繁殖,染色体ＤＮＡ的双向复制及染色体复制与细胞分裂的关系。     

促葡萄糖转运蛋白基因家族的分子进化研究

葡萄糖转运蛋白是一个在结构上相似功能上不同的多基因家族（ＧＬＵＴ１－ＧＬＵＴ５）。由于这一组蛋白和体内的葡萄糖利用有关,因此被认为是糖尿病胰岛素抵抗（抗性）的一个候选基因。本文比较了不同种生物这一基因家族的氨基酸和核苷酸顺序;推测了亲水性和疏水性分布;计算了蛋白质和核苷酸的进化距离,并在此基础上构建了分子进化树。研究表明：这一基因家族具有高度的同源性、极为相似的亲水性和疏水性分布以及结构的对称性。提示这一基因家族起源于一个共同的祖先并可能通过基因的重复而形成。这一进化机制可能有利于氨基酸结构的稳定及抵抗突变的作用。由于邻元法构建的进化树其分支长度存在差异,提示在这一基因家族的进化过程中,各分支上的进化速率并不相同。蛋白质进化距离和核苷酸进化距离所构建进化树的差异提示了在基因组中可能存在隐匿替换。两种方法构建的进化树都提示了ＧＬＵＴ１、３、４在结构和功能上要更为保守。     

昆虫核酸分子系统学研究进展

本文从研究对象、方法、类群、内容等方面综述了近十年来昆虫核酸分子系统学研究进展概况。文中首先介绍了ＲＦＬＰＡ、探针杂交及ＤＮＡ指纹、ＰＣＲ与ＲＡＰＤ－ＰＣＲ、顺序分析方法及应用情况,列举了在双翅目、膜翅目、同翅目、直翅目等目昆虫中的研究进展,并从居群遗传结构、分类学研究、系统发育和分子进化４个方面总结了昆虫核酸分子系统学的研究内容和主要成果,最后指出ＲＡＰＤ－ＰＣＲ与ＲＦＬＰ联合用于测序是近期昆虫分子系统学上最有应用价值的方法。     

Chromosomal localization of ribosomal DNA sequences in an apple rootstock using a digoxygenin detection system

A 6kb rDNA probe comprising the 18S coding plus spacer sequences has been hybridized to the metaphase chromosomes of apple rootstock cultivar MM106 demonstrating the localization of ribosomal gene arrays in the vicinity of the telomeric regions of the short arms of chromosomes 6 and 14.The in situ results using digoxygenin labelling coupled to an alkaline phosphatase immunoassay were confirmed by silver staining for NORs and nucleoli.This study demonstrates the feasibility of molecular cytogenetic analysis of very small chromosomes(1.0-2.7μm） of apple.     

Affinity chromatography—dependent selection （ACDS） of genomic DNA fragments bound specifically to bacterial synthesized Myc／Myn proteins

This paper describes an approach to seek for mouse c-Myc/Myn proteins-bound specific sequences among genomic DNA.cDNA fragment of myn gene was obtained through RT-PCR technique from RNA of NIH3T3 cells.DNA fragments encoding BR/HLH/LZ structure of Myc and Myn proteins were cloned in frame into pGEX-2T vector respectively.Fusion GST-Myc and GST-Myn synthesized in E.coli hosts showed affinity to CACGTG E-box DNA and subsequently interacted with genomic fragments prepared through whole-genome-PCR.A PCR-assisted procedure which combines protein-DNA interaction and affinity chromatography was designed to enrich Myc/Myn bound DNA.At least two genomic DNA fragments obtained exhibit specifical binding capacity to Myc/Myn complex but not to GST alone.Significance of the work and of the technique itself as well asidentification of the DNAs are discussed.     

非洲紫罗兰叶片脱分化过程中核酸蛋白质和滨粉含量动态的研究

本文测定了非洲紫罗兰（Ｓａｉｎｔｐａｕｌｔａｉｏｎａｎｔｈａ）叶片脱分化过程中核酸、蛋白质和波粉的含量。结果表明：发生脱分化的叶片中的蛋白质和淀粉含量均低于对照,而ＲＮＡ含量则高于对照,ＤＮＡ含量无明显差异。叶片培养的第一天内,发生脱分化的叶片中的蛋白质含量明显下降,对照中的蛋白质含量上升。脱分化过程中,淀粉含量有一个上升、下降、再上升的变化过程,对照中淀粉含量一直上升。     

原位分子杂交研究肾综合征出血热尸检组织中汉坦病毒M和SRNA的分布

本文以核酸原位分子杂交法研究了国内不同地区ＨＦＲＳ尸检病例组织中病毒ＲＮＡ的分布和定位。结果在１９例病例组织中均可检测到病毒ＲＮＡ。陕西及沈阳地区病例,阳性部位主要是各脏器上皮及实质细胞。江西地区病例,病毒ＲＮＡ主要出现于各脏器组织内血管壁及毛细血管内皮细胞。广州一例,病毒ＲＮＡ主要分布于肝脏灶性溶解性坏死区域,肺泡壁和肾间质血管等部位。病毒ＲＮＡ主要定位于细胞胞浆,呈颗粒状或全浆阳性,也出现于部     

酪氨酸羟化酶基因载体－pCMVTH 质粒的构建及在大鼠骨骼肌内的表达

为用转基因方法治疗巴金森氏病大鼠模型,本研究采用分子克隆技术,将合成多巴胺的关键酶－酪氨酸羟化酶（ＴＨ）的基因,克隆进入以巨细胞病毒ＣＭＶ为启动子的载体质粒内,经限制性内切酶定位分析证实该重组的ＤＮＡ质粒的可靠性。携带ＴＨ基因的ＰＣＭＶＴＨ质粒以ＬＩＰＯ－ＦＥＣＴＩＮ介导,在培养的原代骨骼肌细胞中高效表达。本研究为进一步用转基因的细胞植入脑内以治疗巴金森氏病打下一定基础。