用干血纸片扩增人雄激素受体基因

雄激素不敏感综合征(AIS)为一类主要与雄激素受体(AR)基因缺陷密切相关的X-连锁隐性遗传病.为进一步阐明AIS的发病机制,建立了用干血纸片直接PCR扩增或将干血纸片中的血细胞洗脱裂解后进行PCR扩增雄激素受体(AR)基因的方法,结合已建立的SSCP分析及DNA直接测序等方法,可对AR基因进行突变分析.干血纸片取样及保存容易,便于邮寄,适用于外地,特别是边远地区患者的取样.该法不仅为AIS患者的AR基因突变分析和家系调查提供简便易行的方法,也适用于PCR基础上的其他各种基因的突变分析.     

布氏菌通过prpA依赖的方式改变免疫应答

<正>布氏菌病是由革兰氏阴性布氏菌属细菌引起的一种分布广泛、人畜共患的疾病,特别是在发展中国家,这种病使人和动物的健康受到严重威胁。布氏菌感染的一个显著特征就是病程长且反复发作,在其众多的致病因素中,免疫调节蛋白如prp A发挥重要作用,使其表现为慢性病的发病特征。Prp A是编码脯氨酸消旋酶蛋白A或羟脯氨酸-2-差向异构酶蛋白的基因。我们发现,在体内,流产布氏菌prp A可     

2012酶工程专刊序言

酶工程是酶学与工程科学融合的综合性科学技术,是现代生物技术与未来生物经济的支柱。近年来,随着在合成生物学研究上的突破,作为合成生物学重要核心内容的酶工程研究受到重视与关注,为促进国内酶工程研究的发展,本期"酶工程专刊"介绍了我国酶工程专家与青年学者在新酶的发掘、酶的作用机制及酶的生产与应用方面所取得的最新进展。     

特异性检测胰腺组织表达Cre重组酶转基因小鼠的方法

利用组织特异性分子标志物启动子调控Cre重组酶,研制了6种在不同组织中特异性表达Cre重组酶的转基因小鼠.这些转基因小鼠的基因型鉴定均使用设计在Cre基因编码区的通用引物.为了特异性检测胰腺组织表达Cre重组酶的转基因小鼠,在大鼠胰岛素RIP启动子上和Cre基因上设计1对引物进行PCR扩增,并通过凝胶电泳进行分析.PCR结果显示,设计在Cre基因上的通用引物可以从6种不同组织特异性Cre重组酶转基因小鼠基因组DNA中扩增获得480 bp产物;利用本研究设计的特异性引物可以从胰腺组织表达Cre重组酶转基因小鼠基因组DNA中扩增200 bp的目的条带.这一结果表明,利用特异性引物进行PCR反应,可有效地将胰腺组织表达Cre重组酶转基因小鼠与其他多种组织的Cm重组酶转基因小鼠鉴别开来.     

真菌漆酶异源表达研究进展

由于漆酶能够氧化芳香类化合物和其它一些非芳香类有机物,具有广泛的底物特异性,因此在纸浆漂白、纺织品染料脱色、有毒废弃物的去除、生物修复和生物传感器等方面具有巨大的应用潜力。但是缺少大量廉价的酶源供应阻碍了漆酶商业化的应用,解决这个问题的一个主要方法就是通过漆酶的异源表达来获得大量的漆酶。综述了真菌漆酶在酵母表达系统和丝状真菌表达系统中表达的研究结果,着重总结了影响漆酶异源表达的因素和提高漆酶表达的策略。     

内耳淋巴液的来源、性质和成分

内耳淋巴液中外淋巴液的来源有2种说法:①来源于脑脊液;②来自毛细血管的血液超滤液。内淋巴可能是以分泌方式产生的,二者性质与成分存在一定的差异     

L-天冬酰胺酶工程菌株培养条件及稳定性

L-天冬酰胺酶工程菌株的酶活和表达水平受菌体生物量和诱导时间的影响。在生物量Ａ６００03×１０左右,热诱导4h酶活力和表达水平可达到较高水平。葡萄糖对酶的生成有阻遏作用,当葡萄糖浓度大于025%时,对工程菌酶的合成造成阻遏。确定了工程菌培养的培养基、pH值、接种量等因素。重组质粒pASN在\%E.coli\% JM105,TG1和AS1357等宿主菌中具有很好的稳定性,工程菌培养50代以上重组质粒保留90%以上,在LB和M\|3培养基中也较稳定。     

汉坦病毒H8205部分核壳蛋白基因在E.coli中的表达

根据汉坦病毒Ｈ８２０５株ＮＰ基因的序列,设计一对引物,扩增ＮＰ前２９２个氨基酸多肽基因片段,克隆于表达载体ｐＧＥＸ３Ｘ,与载体中２６ｋＤ的谷胱苷肽巯基转移酶（ＧＳＴ）融合表达。ＳＤＳＰＡＧＥ显示表达产物（ＧＳＴＮＰ）主要以包涵体形式存在。Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔｉｎｇ表明此融合蛋白有抗原性。包涵体经分离、洗涤、溶解后,Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ６Ｂ层析纯化,用此融合蛋白作抗原,进行ＥＬＩＳＡ法检测临床ＨＦＲＳ病人标本的ＩｇＧ和ＩｇＭ,有很好的特异性和敏感性。有生物活性的汉坦病毒Ｈ８２０５ＮＰ的体外表达成功,为汉坦病毒基因工程抗原的大量制备奠定了基础,也为汉坦病毒的临床检测和流行病学调查提供了一种廉价、安全、可靠的抗原。     

抗大肠埃希氏菌F41粘附素特异单克隆抗体的研制及其初步应用

应用杂交瘤技术获得7株能稳定分泌F41特异单克隆抗体的杂交瘤细胞系,分别命名为Ll0、B10、C32、B1、E7、E40和B49。在直接凝集试验、酶联免疫吸附试验和间接荧光试验中,这7株单克隆抗体对所试的31株肠道菌中所有F41阳性菌株都发生反应,与F41阴性菌株则无反应性。抗原竞争ELISA试验结果发现,这些单克隆抗体是针对F41粘附素上相同或十分相近的抗原决定簇。采用肢体金标记技术和免疫电镜证实,这些抗原决定簇在F41粘附素的每条纤毛上多次重复出现。体外肠吸附抑制试验表明,7株F41l特异单克隆抗体对B41M菌株具有很强的抑制能力,对B41菌株则必须用F41和K99单克隆抗体同时作用才具有完全的肠吸附抑制效果。本文用直接酶标单克隆抗体建立的酶联免疫斑点试验具有高度的特异性和灵敏性,可广泛用于现场快速诊断。