不同化疗方案对晚期非小细胞肺癌患者骨髓抑制及免疫功能的影响

目的:探讨不同化疗方案对晚期非小细胞肺癌患者骨髓抑制及免疫功能的影响。方法:选取2011年1月至2013年12月收治的130例晚期非小细胞肺癌患者,按照知情同意原则随机分为三组:NP(长春瑞滨+顺铂)组45例、GP(吉西他滨+顺铂)组43例、TP(紫杉醇+顺铂)组42例,分别于化疗前及化疗2个周期后检测患者的骨髓抑制及免疫水平。结果:三种化疗方案进行治疗后骨髓抑制水平由高到低排列为GP组、TP组、NP组,差异有统计学意义(P0.05);GP组血小板减少发生率高于其他两组,TP组白细胞下降发生率高于其他两组,差异有统计学意义(P0.05);三组患者化疗后的免疫功能指标均较化疗前低,差异有统计学意义(P0.05)。三种化疗方案进行治疗后免疫功能抑制水平由高到低排列为GP组、TP组、NP组,差异有统计学意义(P0.05)。结论:GP组患者血小板下降更明显,TP组白细胞下降更为明显,NP组对骨髓抑制及免疫功能抑制较缓和,更适于老年人,因此临床选择化疗方案时要综合考虑患者骨髓状况、免疫功能情况及年龄等。     

间充质干细胞联合铂类对肝癌大鼠抗癌效果及对免疫功能、细胞凋亡的影响

摘要 目的：探讨骨髓间充质干细胞（bone marrow mesenchymal stem cells,BMSCs）联合顺铂（cis-diamminodichloroplatinum Ⅱ dichloride,DDP）对肝癌大鼠抗癌效果及其免疫功能和细胞凋亡水平的影响。方法：将40只雄性Wistar大鼠随机分为空白对照组、模型组、DDP组和联合组,各10只。除空白对照组外,其余均采用二乙基亚硝胺饲喂法建立肝癌模型。造模成功后,空白对照组和模型组大鼠静腹腔注射生理盐水并经尾静脉注射DMEM培养液,DDP组大鼠经腹腔注射DDP溶液并经尾静脉注射DMEM培养液,联合组大鼠经腹腔注射DDP溶液并经尾静脉注射BMSCs悬液。移植BMSCs两周后处死大鼠,称量肝脏质量和体质量,采用酶联免疫吸附法检测各组大鼠外周血中白细胞介素-2（interleukin-2,IL-2）、IL-8、肿瘤坏死因子α（tumor necrosis factor α,TNF-α）、血管内皮生长因子（vascular endothelial growth factor,VEGF）和低氧诱导因子-1α（hypoxia-inducible factor-1α,HIF-1α）水平,采用TUNEL技术检测肝细胞凋亡指数。结果：（1）模型组肝脏质量、肝脏质量/体质量均显著大于其他各组,体质量显著小于其他各组（P<0.05）。联合组肝脏质量、肝脏质量/体质量均显著显著小于模型组和DDP组,体质量显著大于模型组和DDP组（P<0.05）。（2）DDP组和联合组大鼠治疗后血清IL-2水平显著升高,IL-8和TNF-α水平显著降低（P<0.05）。联合组大鼠治疗后血清IL-2水平显著高于DDP组,IL-8和TNF-α水平显著低于DDP组（P<0.05）。（3）DDP组和联合组大鼠治疗后血清VEGF和HIF-1α水平显著降低,且显著低于模型组（P<0.05）。联合组大鼠治疗后血清VEGF和HIF-1α水平显著低于DDP组（P<0.05）。（4）联合组和DDP组肝癌细胞凋亡指数显著高于模型组,且联合组也显著高于DDP组（P<0.05）。结论：BMSCs联合DDP能够显著改善肝癌大鼠免疫功能,抑制肿瘤血管生成,促进肝癌细胞凋亡,效果优于DDP单药。     

利用CRISPRi技术沉默MRP1基因增强A549/DDP细胞对顺铂的敏感性*

目的: 采用CRISPRi技术沉默人肺癌A549/DDP细胞MRP1基因表达,观察细胞对顺铂敏感性的变化。方法: 采用生物信息学软件分析MRP1启动子序列,设计合成3对sgRNA干扰片段,定向克隆到pSPgRNA载体中,构建靶向MRP1的干扰表达载体,分别与dCas9表达载体共转染A549/DDP细胞。实验共分为5组,分别为A549/DDP细胞组,Scrambled组,sgRNA-MRP1-1组,sgRNA-MRP1-2组和sgRNA-MRP1-3组,每组设置3个复孔,处理48 h后进行后续实验。通过qRT-PCR和Western blot检测MRP1 mRNA和蛋白表达水平,MTT法检测细胞对药物的敏感性,激光共聚焦显微镜下观察细胞的形态变化。结果: 成功构建了sgRNA-MRP1-1、sgRNA-MRP1-2和sgRNA-MRP1-3 3种干扰载体,分别与dCas9表达载体共转染A549/DDP细胞后,均能显著降低细胞MRP1基因表达(P<0.01),其中sgRNA-MRP1-2干扰效果最好,MRP1 mRNA水平降低了72%,蛋白水平降低了53%。将sgRNA-MRP1-2转染细胞后,细胞对顺铂的敏感性显著增加,IC₅₀值由74.26±3.71降低至34.29±2.51,细胞形态由梭形变为椭圆形,染色质高度凝聚、边缘化,产生凋亡小体。结论: 成功构建3种靶向MRP1的干扰表达载体,均能有效沉默A549/DDP细胞中MRP1基因表达,可增强细胞对顺铂的敏感性。     

Cytotoxic mechanism of novel compound jiangxienone from Cordyceps jiangxiensis against cancer cells involving DNA damage response pathway

Jiangxienone is a novel compound recently purified from the traditional Chinese medicinal mushroom Cordyceps jiangxiensis and was reported to show potent cytotoxicity against cancer cells. However, its mechanism of action remains unclear. In this work, the underlying mechanism of jiangxienone against human gastric cancer cells HGC-27 was investigated using whole-genome microarray. The results demonstrated that jiangxienone significantly decreased cell population of various human cancer cell lines, while slightly inhibited the colony formation of stromal cells from murine marrow even at a high concentration. Differential gene expression profiling indicated that the cytotoxic action of jiangxienone against HGC-27 is closely related to the DNA damage response pathway, which was evident by the identification of 23 DNA damage response-associated genes, such as XRCC4/5/6, NBS1, RAD51, and BRCA1/2. By using gel retardation assays, UV absorption spectrometry and single-cell gel electrophoresis, it was found that jiangxienone could bind to DNA and inhibit cancer cell growth. The above results indicated that the cytotoxic mechanism of jiangxienone against cancer cells was involved in the DNA damage response pathway. The findings will be helpful to the development of useful cancer chemopreventive compounds from C. jiangxiensis.     

化疗药物对人胃癌SGC-7901细胞系端粒酶活性影响

目的　研究常见化疗药物对人胃癌SGC 790 1细胞系端粒酶活性影响。方法　MTT (噻唑蓝 )法测定化疗药物顺铂、丝裂霉素、阿霉素、 5 氟尿嘧啶、氟铁龙 (脱氧氟尿苷 )对人胃癌SGC 790 1细胞系毒性作用的半数抑制(IC5 0 )浓度 ;用TRAP ELISA法测定 4 0×IC5 0浓度化疗药物作用于SGC 790 1细胞 4h、 2 8h端粒酶活性及IC5 0浓度IC5 0化疗药物作用于SGC 790 1细胞 2 4h、 72h、 12 0h细胞端粒酶活性。结果　高浓度 ,低浓度顺铂、丝裂霉素对SGC 790 1细胞端粒酶活性有完全抑制作用 ;而阿霉素、 5 氟尿嘧啶、氟铁龙对SGC 790 1细胞端粒酶活性有部分抑制作用。结论　阿霉素、 5 氟尿嘧啶、氟铁龙对SGC 790 1细胞端粒酶活性有轻度抑制作用 ;顺铂、丝裂霉素能完全抑制端粒酶活性 ,呈时间浓度效应