杂交兰转录组SSR信息分析及EST-SSR标记开发应用

该研究主要开发筛选适用于杂交兰的EST-SSR引物,为杂交兰种质资源评价和遗传变异研究等提供可靠的分子标记。该研究对杂交兰进行转录组高通量测序,挖掘SSR位点和开发EST-SSR标记,并对不同种质的遗传多样性进行分析。结果表明,从31724条杂交兰Unigene中检测出18603个SSR位点,SSR出现频率为58.64%;SSR位点中的主导类型是单核苷酸重复,占总SSR的65.10%,其次是二核苷酸(23.56%)和三核苷酸(10.76%)重复;优势重复基元为A/T、AG/CT、AT/AT和AAG/CTT,分别占总位点的64.72%、13.74%、8.19%和2.51%。利用Primer Premier 5.0共设计了565对SSR引物,从筛选出的64对有效扩增引物中随机选择28对引物,对40份杂交兰种质进行多态性验证与遗传关系分析,其中16对(占57.14%)引物表现出可重复的高多态性,平均多态信息量(PIC)达0.789。基于扩增的多态性SSR信息,40份种质资源可聚为4类,聚类结果与其遗传背景基本一致。该研究印证了转录组测序获得的Unigene是SSR标记开发的有效来源,开发的EST-SSR引物可为杂交兰及近缘种的良种鉴别、遗传图谱构建、分子标记辅助育种及功能基因挖掘等提供有价值的候选标记。     

建兰水晶艺叶片的超微结构和转录组学分析

水晶艺建兰(Cymbidium ensifolium)因其叶片上呈现出白色透明状,犹如水晶而得名,观赏价值高,但是其形成机理不明确。该研究以建兰‘铁骨水晶’为试验材料,通过对水晶叶片和绿色叶片进行显微结构和超微结构观察,并结合转录组测序等方法,探索建兰水晶艺叶片形成的原因。结果表明:(1)建兰‘铁骨水晶’水晶叶片比绿色叶片薄,叶肉细胞数量减少,形状不规则,且叶绿体含量少;水晶叶片的表皮气孔数量较绿色叶片显著减少;水晶叶片的叶肉细胞中叶绿体结构发育不良,叶绿体双膜和类囊体膜模糊,细胞中存在着大量的嗜锇颗粒。(2)转录组数据分析显示,水晶叶片中与光合作用-天线蛋白、光合作用等代谢途径相关的基因表达量显著下降,而与色素合成代谢途径相关的基因表达量上升。研究推测,建兰水晶艺叶形成的原因可能是由于与光合作用相关的基因表达量降低,导致叶绿体发育不良,叶绿素合成受阻,从而形成白色透明状叶片。     

蕙兰根部内生细菌多样性及季节动态变化

为了研究蕙兰（Cymbidium faberi）根部内生细菌群落结构在不同季节里的变化,于不同季节从蕙兰根部分离出内生细菌207株,采用核糖体DNA扩增片段限制性分析（ARDRA）研究了蕙兰根部内生细菌群落组成的季节动态变化。将内生细菌纯培养物扩增近全长的16SrDNA,并用ARDRA对所分离的菌株进行分型,根据酶切图谱的差异,将其分成25个ARDRA型,并选取代表性菌株进行16SrDNA序列测定。结果表明,分离出来的内生细菌分为9个属,包括芽孢杆菌属（Bacillus）、伯克氏属（Burkholderia）、类芽孢杆菌属（Paenibacillus）、假单胞属（Pseudomonas）、微杆菌属（Microbacterium）、根瘤菌属（Rhizobium）、Lysinibacillus、Cohnella和短杆菌属（Bre—vibacterium）,其中优势种群为Bacillus,次优势种群为Paenibacillus和Burkholderia。秋季分离出的内生细菌种类最多,夏季分离出的种类最少。在不同季节蕙兰内生细菌群落结构差异极显著（P〈O．001）,但在不同季节里蕙兰根部内生细菌优势种群没有差异。     

莲瓣兰DALP遗传多样性研究

采用DALP(Direct amplification of length polymorphism)检测莲瓣兰5个居群的遗传结构.5个引物组合共检测到103个多态位点.和其它具有相似生活史(多年生草本、以动物为媒介的杂交、种子随风散布)的物种相比,莲瓣兰原变种水平(PPB=88.18％,A=1.8818,Ae=1.4880,H=0.2911,I=0.4412)和物种水平(PPB=93.64％,A=1.9364,Ae=1.5262,H=0.3129,I=0.4732)均具有较高的遗传多样性;各居群间(Gst=0.3292)存在较大的遗传分化.基因流的估计值(Nm=1.0186)表明莲瓣兰物种水平上各居群间每代有1.0186个移居个体.地理隔离和选择压力可能是造成莲瓣兰居群间基因流动受到限制的原因.在这些研究的基础上,探讨了野生莲瓣兰资源的保护问题.     

低温胁迫对建兰叶片内源多胺含量的影响

以素心建兰为材料,研究低温胁迫(5℃)对建兰内源多胺含量的影响。结果表明,在低温胁迫下建兰生长期的叶片多胺(PAs)总量和亚精胺(Spd)、腐胺(Put)含量都表现为先升后降的变化,精胺(Spm)含量则是下降然后上升最后稳定在比原来含量更高的水平上,说明有可能在低温胁迫下建兰通过调节内源多胺的总量和不同多胺种类的比例来抵御低温对生理的破坏作用;开花期的建兰叶片因受低温胁迫的影响未能合成足够的亚精胺(Spd),从而抑制了建兰的开花。     

野生碧玉兰组培快繁技术

以云南野生碧玉兰（Cymbidium lowianum）种子无菌萌发的试管苗为试验材料,进行其丛生芽诱导增殖、生根的组培快繁技术体系研究。结果表明：适宜的增殖培养基配方为1/2MS＋6-BA 2.0 mg/L＋KT 0.5 mg/L＋NAA 0.2 mg/L,增殖率可达300%;生根培养基的配方为1/2MS＋NAA 1.5 mg/L＋6-BA 0.3 mg/L,其根数多,健壮。     

不同培养基和激素水平对大花蕙兰原球茎诱导的影响

以添加1.5%活性碳及3%的蔗糖的花宝1号和MS培养基为基础,加入不同浓度的BA和IBA,用外植体诱导的第1代组培苗基部以下连根1.1～1.2 cm为材料诱导原球茎.结果表明,花宝1号培养基优于MS培养基,BA1 mg/L IBA0.1 mg/L最合适,诱导率可达90.1%;光照以10 h/d左右为宜,培养温度以25～27℃最佳,其诱导率最高,生长状况最好.     

兰属中若干分类群的订正

基于对许多活植物的观察,对兰科中兰属的若干种类进行了分类学考订,结果承认菅草兰Cymbidium　tortisepalum与峨眉春蕙C. omeiense为独立的种,将春剑C. longibracteatum移至菅草兰之下作为变种,送春C. szechuanicum移至莎叶兰C. cyperifolium之下作为变种。由于春剑、峨眉春蕙和送春的模式标本及引证标本已在30多年前全部丢失,本文指定了新模式。     

不同预冷方式及保鲜液配比对荷兰鸢尾切花采后保鲜的影响

对荷兰鸢尾‘罗萨里奥’(Iris xiphium L．var．hybridum cv．Rosarlo)切花的预冷处理方式以及保鲜液中蔗糖和6-BA适宜浓度进行了筛选。结果表明：选用直接预冷的花材,在以0．3g／L8-HQC(8-羟基喹啉柠檬酸盐) 0．05g／L CCC(矮壮素)为基本液并添加50g／L蔗糖和10mg／L 6-BA的瓶插液中,单朵花瓶插寿命达10d,分别比在对照、基本液以及基本液 50g／L蔗糖的瓶插液中的延长了5．5、5．0和2．0d;同时在延缓花瓣褪色、阻止叶片黄化方面也有很好的效果。     

切花荷兰鸢尾(Iris xiphium L. var. hybridum)低温处理与保鲜

在不同条件下,对荷兰鸢尾金皇后（Iris xiphium L.var.hybridum cv.Yellow Queen）和罗萨里奥（Iris xiphium L.var.hybridum cv.Rosarlo）品种的鲜切花材料进行了预冷和冷藏处理试验。结果表明：相同预冷和冷藏处理条件下,这2个品种切花的保鲜效果基本无差别。在不添加任何化学试剂且处理温度为2-4℃条件下,预冷处理以花蕾初现色期、相对湿度20％-30％且处理时间12-24h的保鲜效果为佳,其保鲜期比对照平均延长3-4d;冷藏处理以花蕾未现色或刚现色的切花材料,装入不完全密封的塑料薄膜袋中,袋中相对湿度为95％-98％的处理条件效果最佳,保鲜期可达7-10d。