Functional expression of human pyruvate carboxylase for reduced lactic acid formation of Chinese hamster ovary cells (DG44)

To investigate the effect of human pyruvate carboxylase (hPC) on lactate formation in Chinese hamster ovary (CHO) cell lines, FLAG-tagged hPC was introduced into a dihydrofolate-deficient CHO cell line (DG44). Three clones expressing high levels of hPC, determined by Western blotting using an anti-FLAG monoclonal antibody, and a control cell line were established. Immunocytochemistry revealed that a substantial amount of expressed hPC protein was localized in the mitochondria of the cells. hPC expression did not impair cell proliferation. Rather, it improved cell viability at the end of adherent batch cultures with the serum-containing medium probably because of reduced lactate formation. Compared with control cells, specific lactate production rate of the three clones was decreased by 21–39%, which was because of a decreased specific glucose uptake rate and yield of lactate from glucose. Reduced lactate formation by hPC expression was also observed in suspension fed-batch cultures using a serum-free medium. Taken together, these results demonstrate that through the expression of the hPC enzyme, lactate formation in CHO cell culture can be efficiently reduced.     

结球白菜温度敏感细胞质雄性不育系CMS7311育性转换的研究

在人工控温和田间自然变温条件下,研究了结球白菜9Brassica campestris L.ssp.penkinsis)胞质雄性不育系CMS7311育性转换的温度特征。结果表明：随温度变化CMS7311有明显的育性转换,人工恒温和人工变温条件下诱导CMS7311发生育性转换（不育→可育）的温度范围为日均温6－12℃,有效诱导的最短时间为3d,显诱导的温度范围为6－9℃。自然变温条件下,有效诱导的温度低限为日均温3.5-6.8℃,但诱导育性转换的最短时间要适当加长。无论恒温还是变温,在日均温9℃下处理9d育性转换达到最大,接近正常可育（0级或1级）。正常情况下,温度处理后到发生育性转换大约需要10－16d,育性转换发生在孢原细胞形成至花粉分化阶段。由于白菜生长的顶端优势作用,在相同诱导条件下,同一植株侧枝较主枝的育性转换时间晚8－10d,且转换程度较弱。     

不同孵化湿度下的乌龟卵孵化成功率及新生幼体特征

A total of 51 Chinese three-keeled pond turtle Chinemys reevesii eggs were incubated on wet and dry substrates (water potentials of - 12 kPa and - 300 kPa, respectively) at 30℃ to assess the influence of the hydric environments on egg survival and hatchling traits. Eggs incubated in the dry condition lost weight, whereas those incubated in the wet condition did not. The hydric environments did not affect incubation lengths (60.3 vs 60.7 days) as well as hatching successes (69.2% vs 88.0% ). Except for wet body mass and carapace width, which were larger for hatchlings from the -12 kPa treatment than from the -300 kPa treatment, the hydric environments did not affect most hatchling traits. These unaffected traits included dry body mass, carapace length, tail length, limb length, hatehling components (carcass, residual yolk and fat bodies), swimming performance and critical thermal minimum. In conclusion, within the water potential of -12 to -300 kPa, hydric environments have little effect on embryonic development and hatchling traits in Chinese three-keeled pond turtles [Acta Zoologica Sinica 50 (1) : 133 - 136, 2004].     

中国仓鼠卵巢细胞表达新技术

中国仓鼠卵巢细胞（CHO细胞）是基因工程药物生产的最佳表达系统之一,在生物制药中被广泛应用。传统的获得高表达CHO细胞株的方法费时、费力。近年来出现了一些CHO细胞高效表达新技术,它们从克服位置效应,提高基因转录效率、mRNA翻译效率及稳定性、筛选高表达细胞的效率等不同层次调控外源基因在CHO细胞中的高效表达。与MTX加压扩增基因获得高效表达外源基因的方法比较,能够节约时间、减少工作量,不易丢失高表达细胞株。     

白头鹎的代谢率与器官重量在季节驯化中的可塑性变化

动物能量代谢的生理生态特征与物种的分布和丰富度密切相关,基础代谢率(BMR)是恒温动物维持正常生理机能的最小产热速率,是动物在清醒时维持身体各项基本功能所需的最小能量值,是内温动物能量预算的重要组成部分.本研究测定了白头鹎(Pycnonotus sinensis)的BMR、内部器官(肝、心、肌胃、小肠、肾和整体消化道)和肌肉的重量,分析了白头鹎内部器官和肌肉重量的季节性变化及与BMR的关系.方差分析表明,白头鹎的BMR存在明显的季节性变化,冬季较高,夏季最低.其内部器官及肌肉重量的变化同样有明显的季节性.相关分析表明,白头鹎的BMR与肝、心、消化道等内部器官和肌肉重量存在明显的相关性.     

圈养獐分娩的初步观察

2004年的5~7月,在浙江省嵊州市河麂种源繁育基地对34只獐(Hydropotes inermis)的分娩活动进行了观察。结果表明,母獐通常选择安全的地点进行分娩。獐集中分娩的时间为6月3日到6月19日,占分娩母獐总数的73.53%(n=34),并且分娩多在白天进行。产程(从胎膜露出到胎盘娩出)平均为(302.20±15.27)min(n=15)。胎儿娩出的姿势多为前躯前置(前足、头先露出),占83.78%;少数为后躯前置(后足先露出),占16.22%。幼仔首次吮乳时间在单胎和多胎间无显著差异,平均为出生后(44.97±2.73)min(n=35)。幼仔出生后首次平均站立时间在双胞胎、三胞胎和四胞胎分别为(32.25±2.49)min(n=16)(、29.42±2.52)min(n=12)和(65.00±7.39)min(n=6)。每胎幼仔数越多,初生幼仔的平均体重越轻。     

从肝论治糖尿病的探讨

糖尿病属中医学＂消渴＂范畴,以多饮、多食、多尿、身体消瘦或尿有甜味为特征。中医认为糖尿病的发生发展与肝的生理功能、病理变化密切相关,现代医学的相关研究也证实了这一点。本文综合分析古今文献,探讨从肝论治糖尿病的理论基础和临床疗效,并总结前人的用药规律以指导今后的临床应用。     

抗调亡基因bcl-xl过表达提高工程细胞IVCC及目的蛋白表达的研究

用无血清培养基或化学成分明确的培养基生产治疗用重组蛋白已成为趋势。然而,在此条件下凝血因子、糖蛋白激素等微量糖蛋白的表达十分困难,其主要原因之一是在细胞培养过程中工程细胞大量凋亡造成的细胞密度低和生存期短。通过将早期抗凋亡基因导入工程细胞并进行过表达可改善工程细胞的活细胞密度积分（integral viable cell concentration,IVCC）,提高表达量。该研究将bcl-xl基因导入工程细胞,筛选其高表达细胞株,并验证工程细胞的抗凋亡能力,获得了稳定表达抗凋亡蛋白和目的蛋白的工程细胞株。与母细胞相比,稳定表达Bcl－xL的工程细胞的IVCC提高了50％,最终目的蛋白表达增加超过200％,显示抗凋亡基因bcl-xl的过表达可改善工程细胞在无血清悬浮培养过程中的细胞凋亡,提高表达量,为表达人凝血因子、糖蛋白激素等微量糖蛋白奠定了基础。     

菟丝子三种提取工艺对心血管活性的影响

目的 观察菟丝子不同提取工艺对实验犬血流动力学药效学的影响。方法 16只成年杂种犬随机分成四组,给药组剂量为20mg／kg静脉注射。结果 经初步筛选实验结果表明,三个不同提取工艺样品均能增加心肌冠脉血流量,但3个样品对心肌耗氧量具有不同的影响,其中3号制剂心肌耗氧量降低;而1、2号制剂则增加心肌耗氧量。结论 3个样品各有特点,综合效应3号最佳。     

小麂、黑麂、赤麂精母细胞联会复合体的比较研究

本工作以界面铺张——硝酸银染色技术,对小麂(Muntiacus reeuesi)、黑麂(M.crinifrons)和赤麂(M.muntjak)的精母细胞联会复合体(Syna ptonemal complex,SC)进行亚显微结构的比较研究。结果表明: 1.SC的平均相对长度和臂比指数同有丝分裂细胞相应染色体的数值有很好的一致性。根据SC的相对长度和臂比指数绘制了三种麂的SC组型图。雄性黑麂减数分裂前期形成一个复杂的易位多价体,意味着其核型的演化过程涉及两次染色体易位和一次臂间倒位。 2.在减数分裂前期,性染色体的形态和行为同常染色体的有明显差异,如性染色体嗜银性较强,配对延迟等。XY的配对起始于早粗线期,在中粗线期,Y的全长均同X配对;XY-SC开始解体于晚粗线期。 3.在粗线期,X染色体未配对区域出现自身折叠,形成“发夹”状结构。这种“发夹”结构的形成,可能是在性染色体的进化过程中,X染色体通过不对称易位得到的重复片段在减数分裂前期同源配对的一种细胞学表现。