用改良的MTT法测定rhG-CSF活性

ＭＴＴ测定法是根据线粒体脱氢酶催化ＭＴＴ形成蓝色甲■的多少来检测活细胞数和功能状态的,但原始方法中存在着一些问题,如敏感性偏低、有机溶剂产生蛋白质沉淀以及产物的溶解度偏低等。为了摸索测定 ｒｈＧ－ＣＳＦ活性的最适条件,我们以 ＮＦＳ－６０细胞为对象,比较了多种溶解缓冲液,并且对细胞数、ＭＴＴ浓度及保留时间、溶解液用量等条件进行了选择。结果表明,ＤＭＦ－２０％ＳＤＳ和 ２０％ＳＤＳ的效果最好,测定时细胞数为每孔 １０００个细胞,所加 ＭＴＴ浓度为 １ｍｇ／ｍｌ,保留时间为 ４ ｈ,溶解液的用量为每孔 １００μｌ。     

NF-κB p65的敲减加重结肠上皮HCT116细胞氧化损伤

炎症细胞诱导的活性氧类生成和肠道氧化应激与慢性炎症性肠疾病以及结直肠肿瘤的发病密切相关。NF-κB信号通路参与氧化应激反应以及在结直肠炎症和肿瘤发生中的作用还并不完全清楚。本研究将化学合成一对编码小干扰RNA 序列、靶向人NF-κB 基因的长60 bp寡核苷酸链定向克隆至pSUPER小干扰RNA表达载体中,通过单酶切、双酶切及测序证实重组RNA干扰载体构建成功. 将构建成功的质粒转染至结肠上皮细胞HCT116中敲减p65,分别采用Western blot方法检测NF-κB p65蛋白表达水平,（3-(4,5-二甲基噻唑-2)-3,5-二苯基四氮唑溴盐（MTT）方法检测细胞存活情况. 结果显示,pSUPER-NF-κB p65载体可特异性下调NF-κB p65蛋白表达;下调p65表达可导致过氧化氢诱导的HCT116内活性氧类物质生成增高,存活细胞数目显著减少,氧化损伤加重。研究表明,在人结肠上皮细胞内NF-κB p65通路的抑制显著加重了结肠上皮细胞氧化损伤情况.     

葡萄Alfin like转录因子家族的鉴定和表达分析

Alfin like (AL) 转录因子家族对高盐、低温、干旱等非生物胁迫反应具有重要的调控作用。该研究采用同源比对的方法检索鉴定葡萄AL转录因子家族基因、分析其生物信息学特性,并采用qRT PCR方法分析非生物胁迫下AL基因的表达特征,以探究葡萄AL基因在非生物逆境胁迫中的功能。 结果表明：(1)在葡萄中共鉴定出6个AL基因家族成员,分别命名为VvAL1~VvAL6,且6个成员分别分布在6条染色体上。(2)葡萄中AL转录因子具有高度保守的DUF3594结构域和PHD结构域,各家族成员均含有5个外显子和4个内含子;上游启动子区域分析发现大量植物激素与非生物胁迫响应相关的顺式作用元件。(3)基因芯片表达模式分析显示,盐、干旱、ABA胁迫以及低温(5 ℃)处理均显著影响葡萄AL家族基因(VvAL1~VvAL6)的表达。(4)qRT PCR检测显示,不同胁迫处理下AL基因在葡萄叶片中的表达水平不同;ABA处理下葡萄AL转录因子家族基因表达量较对照均显著下调,但在PEG处理下差异不显著;在盐胁迫处理下,VvAL2、VvAL4、VvAL5基因的表达量均显著上调,分别是对照的23倍、8.5倍和10.5倍,而VvAL1和VvAL6基因的表达量均显著下调,分别是对照的33倍和25倍。研究发现,葡萄AL转录因子家族与植物激素和非生物胁迫密切相关,尤其是该家族基因强烈响应高盐胁迫。     

异槲皮苷对Aβ25-35导致的PC12细胞损伤的保护作用及机制研究

探讨异槲皮苷对β-淀粉样蛋白(Aβ25-35)导致的PC12细胞氧化损伤的保护作用.首先通过分子对接技术分析异槲皮苷与AMPK的结合情况.采用Aβ25-35(20 μmol/L)损伤PC12细胞建立细胞氧化损伤模型,采用甲基噻唑蓝(MTT)法检测细胞活力,通过试剂盒检测乳酸脱氢酶(LDH)漏出量、活性氧(ROS)含量、...     

春小麦对不同灌水处理的气孔反应及其影响因子

选用3个春小麦品种（系）,采用大田试验方法,在冬灌1800 m³·hm^-2的基础上,在生育期设3次灌水处理（T₁）、2次灌水处理（T₂）和1次灌水处理（T₃）,每次灌水1050 m³·hm^-2,研究土壤水分对春小麦生育期气孔导度的影响及气孔导度与相关环境因素的关系.结果表明：灌水处理对春小麦生育期气孔导度的影响较大,气孔导度随着灌溉次数的减少逐渐降低,同时不同基因型间存在差异.从拔节期到开花期,不同处理春小麦气孔导度变化一致,都呈先升高后降低趋势, 在抽穗期达到峰值;开花期之后各处理出现差异,T₁各品种气孔导度先下降后上升,T₂品种间表现不同,T₃一直呈下降趋势.各环境因子中,大气相对湿度对春小麦气孔导度的影响最大,两者的相关系数在T₂和T₃中分别达显著(0.82^*)和极显著水平(0.92^**).春小麦适应水分亏缺的气孔调节机理为反馈式调节.     

核因子增强雌激素受体与雌激素效应元件的结合

利用体外翻译系统,翻译了能与雌激素效应元件（ＥＲＥ）结合的全长的人雌激素受体（ｈＥＲ）。制备了切除卵巢的雌性大鼠子宫核抽提物,在雌激素存在下,此核抽提物能增强ｈＥＲ与ＥＲＥ的结合。此核抽提物在５０℃保温１５ｍｉｎ后,明显减弱了增强ｈＥＲ－ＥＲＥ结合的作用。提示了核抽提物中存在着能增强ｈＥＲ－ＥＲＥ结合的雌激素依赖的热敏感性的辅助因子。在大肠杆菌中表达了谷胱甘肽转硫酶（ＧＳＴ）融合的雌激素受体的ＤＮ     

旱区排水沟植被空间分布格局与土壤因子的关系

揭示旱区排水沟植被空间分布格局与土壤因子间的关系,可为旱区农田排水沟渠湿地的生态环境修复与生态灌区构建提供理论依据和技术指导。以陕西富平卤泊滩盐碱地的排水干沟和斗沟为例,采用野外调查、方差分析、相关性分析、典型相关分析和RDA分析方法,研究了排水沟边坡植被和土壤因子(含水率、电导率和pH)的时空分布特征以及植被和土壤因子间的相关关系。结果表明：(1)排水沟边坡植被分区明显(芦苇区、过渡区和共生区),干沟物种多样性高于斗沟、物种优势度低于斗沟;干沟和斗沟不同分区的植被Simpson优势度指数均随距排水沟距离的增大而减小,物种丰富度指数、Shannon多样性指数和Pielou均匀度指数随着距排水沟距离的增大而增大;(2)3月土壤含水率(均值23.7%)最高,9月土壤电导率(均值576.97μS·cm^-1)和pH(均值8.95)最高,但不同时期间差异不显著;干沟芦苇区的土壤含水率、电导率和pH最大,斗沟芦苇区的土壤含水率最高、过渡区的土壤电导率和pH最大,且不同分区间差异显著;(3)决定旱区排水沟植被空间分布和物种丰富度的关键土壤因子是含水率与电导率。根据研究结果,本文...     

不同群落类型柔毛淫羊藿总黄酮和淫羊藿苷含量及其与土壤因子的关系

2009年8月,采用高效液相色谱法和紫外分光光度法测定了唐家河自然保护区次生落叶阔叶林红桦群落(群落Ⅰ)、常绿落叶阔叶混交林细叶青冈群落(群落Ⅱ)和常绿阔叶林油樟群落(群落Ⅲ)下生长的柔毛淫羊藿各器官的总黄酮和淫羊藿苷含量,分析其与土壤因子的关系结果表明：柔毛淫羊藿叶片中总黄酮和淫羊藿苷含量最高、茎中最低;群落Ⅰ的柔毛淫羊藿总黄酮和淫羊藿苷含量［(5.32±0.23)%和(0.47±0.05)%］均显著高于群落Ⅱ［(4.06±0.03)%和(0.32±0.01)%］和群落Ⅲ［(4.15±0.07)%和(0.28±0.09)%］;土壤氮含量和pH值对柔毛淫羊藿的总黄酮和淫羊藿苷含量影响较大,柔毛淫羊藿总黄酮和淫羊藿苷含量与土壤全氮和碱解氮呈显著负相关(P<0.05),与土壤pH值呈极显著正相关(P<0.01).土壤较低的氮供应水平和较高的土壤酸度可能使群落Ⅰ柔毛淫羊藿的总黄酮和淫羊藿苷含量增加.     

β－甘露聚糖酶酶解植物胶及其产物对双歧杆菌的促生长作用

由地衣芽孢杆菌ＮＫ－２７获得的β－甘露聚糖酶在４０℃、酶液终浓度１ｕ／ｍｌ时,经１２ｈ水解魔芋粉、角豆胶、瓜儿豆胶和田菁胶所生成的酶解产物,经薄层层析检测表明为单糖和低聚糖。在ＰＹＧ和ＧＡＭ液体培养基中,添加不同量的四种植物胶酶解产物对青春双歧杆菌（Ｂｉｆｉｄｏｂａｃｔｅｒｉｕｍａｄｏｌｅ－ｓｃｅｎｔｉｓ）具有明显的促生长作用,菌体增殖数从１０^７提高到１０^８个／ｍｌ。     

粒系集落刺激因子联合促红细胞生成素治疗慢粒白血病伴贫血的疗效及对营养状况的影响

目的：探讨粒系集落刺激因子联合促红细胞生成素治疗慢性粒细胞白血病（以下简称慢粒白血病）伴贫血的疗效及对营养状况的影响。方法：选取我院在2019年3月—2020年6月确诊并治疗的慢粒白血病伴贫血患者82例,依据治疗方式分成两组,对照组应用促红细胞生成素（rHuEPO）,研究组联合应用粒系集落刺激因子（G-CSF）。观察比较两组的疗效;两组治疗前、治疗后不同时间节点下的营养状况量化评分水平差异;两组治疗前、治疗后的相关实验室指标：红细胞（RBC）计数、红细胞比容（Hct）及血红蛋白（HGB）水平变化差异。结果：研究组缓解比率水平高于对照组（P＜0.05）,提示研究组疗效更高。研究组治疗后不同时间节点下的营养状况量化评分水平均比对照组更高（P均＜0.05）。治疗后研究组相关实验室指标：RBC、Hct及HGB水平均比对照组更高（P均＜0.05）。结论：给予慢粒白血病患者联合使用G-CSF及rHuEPO治疗,可显著提高患者的临床疗效,提高RBC、Hct、HGB水平,改善患者的营养状况。