短双歧杆菌和嗜酸性乳杆菌对小鼠抗肿瘤活性的激活作用

用活的短双歧杆菌,嗜酸性乳杆菌和BCG给昆明小鼠腹腔注射,在原位激活后,由肝脏分离的非实质性细胞(NPC)对YAC-1,P815和L929的细胞毒性作用,以及NPC和Kupffer(KC)培养上清中所显示出对三株瘤细胞的肿瘤坏死因子(TNF)活性都比对照组明显增强。其次,胸腺细胞和脾细胞对ConA刺激的增殖反应也明显增强。实验结果表明双歧杆菌和乳杆菌在小鼠体内诱发抗肿瘤活性的启动能力与BCG几乎相等。     

酪酸梭菌与双歧杆菌对肠道致病菌的体外生物拮抗作用

目的：探讨酪酸梭菌和婴儿型双歧杆菌对某些肠道致病菌的拮抗作用,方法：将酪酸梭菌和婴和型双歧杆菌单株菌及两株菌混合后分别与几株肠道致病菌混合接种于GAM液体培养其中进行厌氧培养,通过平板菌落计数法计算肠道致病菌的菌数,结果：经混合培养后肠道致病菌的菌数明显下降,结论：酪酸梭菌LCL166株和婴儿型双歧杆菌LCL172株在体外能明显抑制几株肠道致病菌的生长繁殖。     

中草药对小鼠肠道菌群影响的实验研究

目的研究党参、茯苓、白术、白芍和陈皮五味中药制成的复方合剂对肠道菌群调节作用。方法将小鼠分为正常对照组、低剂量组、中剂量组和高剂量组。对照组灌服蒸馏水14 d,低剂量组、中剂量组和高剂量组灌服不同剂量的复方合剂14 d,检测实验前后肠道菌群数量。结果灌服后小鼠肠道菌群与灌服前比较,乳杆菌、双歧杆菌数量明显增加,肠球菌数量明显减少,肠杆菌数量差异无统计学意义。结论党参、茯苓、白术、白芍和陈皮五味中药制成的复方合剂对小鼠肠道菌群具有一定的调节作用。     

一种含双歧杆菌种属特异性复制子的新型大肠杆菌-双歧杆菌穿梭质粒的构建

目前,双歧杆菌的转化是一个技术难题,与大肠杆菌等宿主菌的高转化效率不同,采用普通的原核质粒无法转化双歧杆菌.为此,本文提出双歧杆菌转化对质粒复制子具有"种属特异性"要求,并通过构建含有双歧杆菌特异复制子的新型穿梭质粒,以求解决这一难题.首先从GenBank获取长双歧杆菌隐性质粒pMB1的序列信息,采用Overlap-PCR方法获得其全长DNA,作为拟构建质粒的复制子;继而采用重组技术,将其与pMK4质粒片段(含大肠杆菌复制子pUC和抗氯霉素基因Cat)重组,构建大肠杆菌-双歧杆菌穿梭质粒;用电穿孔法将重组质粒转化双歧杆菌,通过观察不同电转参数下的转化效率,选择双歧杆菌转化的最佳条件.结果,成功获得全长1899bp的pMB1复制子并构建成功含有pMB1和pUC双复制子的原核重组质粒,经酶切和测序鉴定正确,命名为pCMB1.以重组质粒成功转化了长双歧杆菌NCC2705和NQ1501,而其它3种野生型双歧杆菌(包括1株长双歧杆菌)未能转化成功.结论:质粒中含有双歧杆菌种属特异的复制子是实现双歧杆菌转化的必要条件;即使是含有特异复制子的质粒也只能转化有限数量种型甚至有限数量种株的双歧杆菌;选择最佳电转化条件能显著提高转化效率.     

双歧杆菌预防重症胰腺炎患者肠道菌群失调的临床研究

目的探讨双歧杆菌及早期肠内营养对急性重症胰腺炎（SAP）患者出现肠道菌群失调的预防及治疗作用。方法对2010年在成都市第五人民医院消化内科住院的99例SAP患者,随机分为3组：全胃肠外营养治疗组（TPN）;普通肠内营养（GEN）;生态营养组（EEN）（肠内营养加双歧杆菌管饲）,每组33例。分别观察3组患者腹痛缓解时间、血淀粉酶下降时间、肠道菌群失调症的发生率、平均住院日的差异。结果 SAP发病7～10 d时GEN及EEN组较TPN组相比,腹痛缓解时间、血淀粉酶恢复时间及并发症发生率均有显著降低（χ2=11.943,P〈0.01）。平均住院日（t=5.496,P〈0.01）明显缩短。SAP患者肠道菌群失调症总发生率是36.7%,TPN组肠道菌群失调发生率57.1%,GEN组肠道菌群发生率42.8%,EEN组肠道菌群发生率14.3%。结论生态营养组EEN较普通肠内营养组GEN和肠外营养组TPN能减少SAP肠道菌群失调的发生,并能缩短其病程,改善预后。     

1株新分离的人两歧双歧杆菌耐药性研究

目的研究新分离的人两歧双歧杆菌对11种抗生素的耐药性。方法采用琼脂扩散纸片法测定人两歧双歧杆菌对11种抗生索的敏感性,通过在双歧杆菌培养基中添加不同浓度的抗生素来确定MIC值。结果该菌株对β-内酰胺类、大环内脂类和利福平非常敏感．对氨基糖苷类、黄胺类表现出较强抗性。结论该菌株对11种抗生索的药物敏感性与国内外其他文献所报道的结果一致。但该菌株带有一22kb大小的天然质粒。需进一步研究质粒与其耐药性的关系。     

双歧杆菌完整肽聚糖对脐血来源树突状细胞分化成熟的影响

目的研究两歧双歧杆菌完整肽聚糖（WPG）对脐血来源树突状细胞（DC）形态及分泌细胞因子的影响,了解双歧杆菌WPG对DC分化、成熟及免疫调节功能的作用;并为益生菌及其生物活性成分的进一步开发提供依据。方法分离正常孕妇脐血单个核细胞诱导生成未成熟树突状细胞（Dendritic cells,DCs）,实验组在培养的第7天分别加入两歧双歧杆菌WPG（5μg／ml）、两歧双歧杆菌全菌（100μg/ml）,阳性对照组加入脂多糖（LPS）,阴性对照组仅加入培养基。倒置显微镜在培养各期形态学观察,流式细胞术检测表面标志物CD83及CD1a的表达,NLR检测DCs刺激同种异体T淋巴细胞能力,ELISA法测定DCs培养上清中IL-12p70、IL-10的分泌。结果脐血单核细胞在双歧杆菌WPG与GM-CSF、IL-4协同诱导作用下,能成为形态上具有典型树突状突起的DCs;诱导后的CB-MDDCs刺激同种异体T细胞的增殖能力及分泌IL-12：p70、IL-10的水平显著高于阴性对照组（P〈0．01）且细胞表面标志物CD83及CD1a的表达增加。结论（1）双歧杆菌WPG能影响CB-MDDCs的成熟状态。（2）双歧杆菌WPG对CB-MDDCs成熟程度及分泌细胞因子水平的影响强于双歧杆菌全菌,说明WPG是双歧杆菌主要免疫活性成分。     

双歧杆菌与乳杆菌原生质体的融合及筛选

目的：通过双歧杆菌与乳杆菌的原生质体融合构建耐氧双岐杆菌,以解决双岐杆菌制剂开发中始终存在的“活菌数低”和存活时间短等问题。方法：采用不同浓度的Mutanolysin分别制备长岐杆菌和保加利亚乳杆菌的原生质体,在电场作用下诱导长双岐杆菌原生质体和经56℃热灭活30min的保加利亚乳杆菌原生质体融合,并在双层再生培养基上筛选融合菌株。结果：成功地构建出几种较为稳定的兼具长双岐杆菌和保加利亚乳杆菌生物学特性的融合菌株;其中融合株F2具有良好的耐氧性;且能在有氧、CO2条件下良好生长。结论：通过原生质体融合技术能改良双歧杆菌的严格厌氧特性,有利于对双岐杆菌的开发和应用。     

Influence of fermentation time, cryoprotectant and neutralization of cell concentrate on freeze-drying survival, storage stability, and acid and bile exposure of Bifidobacterium animalis ssp. lactis cells produced without milk-based ingredients

AIMS: To investigate the stability of Bifidobacterium animalis ssp. lactis VTT E-012010 (=Bb-12) during freeze-drying, storage and acid and bile exposure. The effect of harvesting time and composition and pH of the cryoprotectant on the survival was evaluated. The procedure was performed by using a milk-free culture medium and cryoprotectants to produce cells for nonmilk-based applications. METHODS AND RESULTS: Bifidobacterial cells were grown in fermenters in general edible medium for 15 or 22 h. The cell mass was freeze-dried either as non-neutralized or neutralized using sucrose, betaine or reconstituted skim milk (control) as cryoprotectants. For stability studies freeze-dried powders were stored at 37, 5 and -20 degrees C for 2-6 months. In addition, acid and bile tolerance of the powders was tested. Sucrose-formulated B. animalis ssp. lactis preparations had an excellent stability during storage at refrigerated and frozen temperatures for 5-6 months. They also had a good survival during storage at 37 degrees C for 2 months as well as during exposure to pH 3 and 1% bile acids. No difference was observed between 15 and 22 h grown cells or between non-neutralized and neutralized cells. Betaine proved to be a poor cryoprotectant compared with sucrose. CONCLUSIONS: Fermentation time and neutralization of cell concentrate before freeze-drying had no impact on the storage stability and bile and acid tolerance of freeze-dried bifidobacterial cells. The nonmilk-based production protocol using sucrose as a cryoprotectant yielded powdery preparations with excellent stability in adverse conditions (storage at elevated temperatures and during acid and bile exposure). SIGNIFICANCE AND IMPACT OF THE STUDY: The results indicate that it is feasible to develop nonmilk-based production technologies for probiotic cultures. This provides new possibilities for the development of nondairy-based probiotic products.     

对双歧杆菌DM9227株的实验研究——Ⅰ.双歧杆菌DM9227株的试管内生物拮抗作用的研究

本文对由健康婴儿分离的双歧杆菌DM9227株进行了试管内的生物拮抗试验。将双歧杆菌DM9227株分别与金黄色葡萄球菌、产毒性大肠杆菌及侵袭性大肠杆菌以一定的比例等量混合接种于PYG液体培养基中进行厌氧培养。试验证明双歧杆菌DM9227株能明显抑制上述3种细菌的生长繁殖,显示出较强的生物拮抗作用。拮抗机制可能与双歧杆菌DM9227株能产生一定量的醋酸和乳酸,降低培养基的pH,从而抑制该3种菌的生长有关。