地衣芽孢杆菌2709碱性蛋白酶编码序列的PCR扩增、克隆及序列测定

在地衣芽孢杆菌NCIB 6816菌株碱性蛋白酶基因已知序列的基础上,通过设计合适的引物,利用PCR(Polymerase Chain Reaction)技术从地衣芽孢杆菌2709菌株的柒色体DNA中扩增了2709碱性蛋白酶的编码序列。对两个克隆的PCR片段的全序列分析结果显示,2709碱性蛋白酶的编码序列同相应的NCIB 6816序列相比有3％左右的碱基组成差异。由此推定的2709碱性蛋白酶的氨基酸序列肯定了2709碱性蛋白酶属典型的subtilisin Carlsberg类,同时还表明来源于不同地衣芽孢杆菌菌株的subtilisin Carlsberg存在着若干氨基酸组成上的差异。     

苏芸金杆菌MS07A的Cry Ⅰ基因在大肠杆菌中的克隆及表达

分离了苏芸金杆菌库斯塔克变种MS07A(Bacillus thuringiensis var.kurstaki MS07A)的质粒,经HindⅢ酶解、凝胶电泳和Southern转移后,用DIGdUTP标记的质粒pES1的EcoR Ⅰ—F片段作探针进行DNA分子杂交,发现5.3、6.6和7kb左右的DNA片段含Cry Ⅰ基因。用Glass milk合并回收这些片段,克隆到pUC18的HindⅢ位点上并转化大肠杆菌JM109。通过菌落原位杂交、重组质粒的限制性消解等分析方法,选出带有Cry Ⅰ基因并能在大肠杆菌中表达其毒蛋白的转化子。初步生物测定结果表明。转化子TM48和TM76对松毛虫和菜青虫有毒杀活性。     

Injury and repair in biocide-treated spores of Bacillus subtilis

Abstract Bacillus subtilis NCTC 8236 spores exposed to appropriate concentrations of test biocides (glutaraldehyde, two iodine and two chlorine preparations) were able to repair injury if subsequently held in nutrient broth at 37°C but not in broth at 22°C, sterile filtered water at 4, 22 or 37°C or germination medium at 37°C. Repair appeared to occur primarily during outgrowth and was initiated soonest for iodine-treated spores and latest for glutaraldehyde-treated ones.     

枯草芽孢杆菌聚谷氨酸合成途径相关基因功能研究

聚谷氨酸(polyglutamic acid, PGA)作为一种天然多功能的聚合物,近年来成为研究的热点。由于很难通过化学方法合成,微生物发酵是目前生产聚谷氨酸的有效途径。【目的】从基因水平探究枯草芽孢杆菌聚谷氨酸合成途径中degS、degQ、degU、swrA、rocA、putM基因的功能,通过分子改造实现对代谢途径的调控。【方法】以枯草芽孢杆菌为出发菌株,通过对代谢途径中相关基因进行敲除或过表达,分别构建degS、degQ和degU基因缺失的重组菌,swrA、rocA和putM基因过表达的重组菌,借助菌株胞外聚谷氨酸积累的变化分析影响途径的关键节点。【结果】在摇瓶发酵条件下,重组菌Bacillus subtilis 168-swrA、Bacillus subtilis 168-rocA、Bacillus subtilis 168-putM的胞外聚谷氨酸含量分别是原始菌株的1.28倍、1.47倍和1.37倍。重组菌Bacillus subtilis 168-ΔdegS、Bacillus subtilis 168-ΔdegQ、Bacillus subtilis 168-ΔdegU的胞外...     

Occurrence ofBacillus popilliae and two nematode pathogens in populations ofAmphimallon solstitialis (Col.: Scarabaeidae) near darmstadt,Germany

Populations of the June beetle,Amphimallon solstitialis (Coleoptera: Scarabaeidae), were sampled from grasslands near Darmstadt, Germany, and found to be infected by a number of diseases and parasitic nematodes. Several milky diseased larvac were found, andBacillus popilliae type A 1 isolated as the causative agent. The bacterium readily infected healthy larvae ofA. solstitialis when administeredper os in the laboratory, but was not infective to larvae ofMelolontha hippocastani by this route. A large mermithid nematode was found parasitising 10% of theA. solstitialis larvae at one site andHeterorhabditis bacteriophora was found infecting larvae at the other.

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Résumé Des populations deAmphimallon solstitialis (Col.: Scarabaeidae) ont été échantillonnées dans deux prairies distinctes près de Darmstadt (Allemagne) et se sont révélées infestées par des maladies et des nématodes parasites. Plusieurs larves dans chaque site étaient infectées par la maladie laiteuse etBacillus popillae, type A1 a été isolé comme étant l'agent responsable. La bactérie infeste facilement des larves saines deA. solstitialis quand elle est administrée par voie orale au laboratoire mais n'a pas d'effet infectieux pour les larves deMelolontha hippocastani par cette même voie. Un grand nématode mermithide a été trouvé parasite de 10% des larves deA. solstitialis sur un seul site, mais comme seuls les jeunes ont été trouvés, la détermination à l'espèce n'a pu être faite.Heterorhabditis bacteriophora était responsable de l'infection de 1,5% des larves sur seulement un site. Plusieurs larves deA. solstitialis présentaient une couleur ambrée, identique à celle trouvée sur le scarabéeCostelytra zealandica infecté parSerratia spp., et ne se nourrissaient pas de carotte au laboratoire. Les bactéries isolées à partir de ces larves ne provoquent aucun effet visible quand elles sont données en nourriture à des larves saines.

     

解淀粉芽胞杆菌hemX基因缺失对血红素合成的影响

血红素是一种广泛存在于生物体中的卟啉类化合物,具有多种生理功能。解淀粉芽胞杆菌(Bacillus amyloliquefaciens)具有易于培养、分泌表达能力较强等特点,是一种重要的工业菌株。为了筛选血红素合成的最优出发菌株,以不添加和添加5-氨基乙酰丙酸(5-aminolevulinic acid, ALA)的方式,对实验室保藏菌株进行筛选,发现不添加ALA时,菌株BA、BAΔ6、BAΔ6ΔsigF的血红素产量无明显差别;然而添加ALA后,BAΔ6ΔsigF的血红素产量和比生产能力均为最高,分别达到200.77μmol/L和615.70μmol/(L·g DCW)。因此,以BAΔ6ΔsigF为出发菌株,敲除编码细胞色素组装蛋白HemX的hemX基因,探究其在血红素合成途径中的作用,发现敲除菌株发酵液明显变红,且生长未受到明显影响;摇瓶发酵12 h时ALA浓度最高,为82.13 mg/L,略高于对照的75.11 mg/L;不添加ALA时,血红素产量和比生产能力分别为对照的1.99倍和1.45倍;添加ALA后,血红素产量和比生产能力分别为对照的2.08倍和1.72倍;实时定量荧光PCR...     

Algae in mosquito breeding sites and the effectiveness of the mosquito larvicide Bacillus thuringiensis H-14

The presence of cyanobacteria generally decreased the effectiveness of Bacillus thuringiensis H-14 (BTI) as a mosquito larvicide. The effect was more pronounced when the mosquito larvae were exposed to BTI in the presence of several cyanobacterial strains. No synergistic or antagonistic effect between the -endotoxin from BTI and the hepatotoxin from cyanobacteria was seen. Neurotoxic cyanobacterial strains caused very fast paralysis in mosquito larvae; the decreases in the effectiveness of BTI when tested in combination with a neurotoxic strain might be due to the effect of this paralytic action on the feeding rate of the mosquito larvae.