精氨酸代谢途径抗酸关键基因对乳酸乳球菌Lactococcus lactis NZ9000胁迫抗性的影响

【目的】寻找精氨酸代谢途径中与酸胁迫相关的关键作用因素。【方法】通过在Lactococcus lactis NZ9000中分别过量表达来源于Lactobacillus casei Zhang的精氨酰琥珀酸合成酶(ASS)和精氨酰琥珀酸裂解酶(ASL)改变精氨酸代谢提高酸胁迫抗性。【结果】与对照菌株对比,重组菌株在环境胁迫下表现了较高的生长性能、存活率和发酵性能。生理学分析发现,酸胁迫环境下,重组菌株细胞有较高的胞内NH4+、ATP含量和H+-ATPase活性,并显著提高了精氨酸脱亚胺酶(ADI)途径中的氨基酸浓度。进一步的转录分析发现,天冬氨酸合成、精氨酸代谢相关的基因转录水平上调。【结论】在L.lactis NZ9000中过量表达ASS或ASL可以引发精氨酸代谢流量的上调,进而提高了细胞的多种胁迫抗性。精氨酸合成途径广泛存在于多种微生物中,为微生物,尤其是工业微生物提高胁迫抗性提供了新思路。     

体细胞胚发生的生化基础

在胚性细胞分化和分裂过程中ATP酶活性和分布的动态变化表明,这些胚性细胞进行着旺盛的主动物质吸收和活跃的新陈代谢过程。在多种植物的体细胞胚发生中过氧化物酶的活性与同工酶的种类都高于对照,而且在大麦中发现过氧化物酶、酯酶和酸性磷酸酶同工酶的结合应用可以作为体细胞胚发生的标志酶。胚性愈伤组织中可溶性蛋白质含量与组分远高于或多于非胚性愈伤组织。大多数材料中都存在45kD-55kD的胚胎发生特异性蛋白质组分。而且在体细胞胚发生中蛋白质和核酸代谢动态呈规律性变化,首先是RNA合成速率增加,继而是蛋白质的迅速合成,并在胚性细胞分化和发育过程中一直保持相对较高水平,其中mRNA种类丰富,不同发育时期mRNA种类不同,因此转译形成多种蛋白质。DNA的代谢相对较稳定,但在胚性细胞系中DNA合成量仍高于非胚性细胞系。加入蛋白质或核酸合成抑制剂,不仅抑制了蛋白质和核酸的合成,同时也抑制了体细胞胚的发生与发育,而且抑制剂加和时间愈早,影响愈严重。由此表明,蛋白质与核酸的合成为体细胞胚的分化和发育奠定了分子基础。     

人参毛状根及愈伤组织中ATP动态变化的生物发光法测定

人参 (ＰａｎａｘｇｉｎｓｅｎｇＣ .Ａ .Ｍｅｙ)系五加科 (Ａｒａｌｉａｃｅａｅ)人参属 (ＰａｎａｘＬ .)植物 ,是一种贵重药材。随着植物生物技术的发展 ,Ｒｉ质粒介导产生的植物毛状根培养是植物基因工程和细胞工程相结合的一项新技术[1 ,2 ] 。人参毛状根系统的建立是对人参资源开发和利用的新形式。ＡＴＰ是生物体的能量“通货”及重要的代谢调节物质 ,对生命活动至关重要。随着生物有机体的生长发育 ,ＡＴＰ含量也呈一定的变化趋势 ,并反映出生物体的生长代谢情况。由于ＡＴＰ测定操作复杂 ,仪器试剂昂贵[3 ] ,不便于进行动态监测。…     

酿酒酵母海藻糖合成酶基因的克隆和在大肠村菌中的表达

用PCR方法克隆了1．5kb的酿酒母Sacchromyces cerevisiae海藻糖合成酶基因TPSI,将该片段连接到pUC19载体,通过转化分别引入海藻糖合成酶基因缺失和缺陷的大肠杆菌Escherichia coli FF4169 和FF4050,对转化株的质粒DNA酶切分析表明均含有1．5kb PCR克隆片段,生长曲线实验证明,带有克隆片段的转化株在含0．5mol/L NaCl的高渗透压基础培养基中生长良好;用高效液相色谱（HPLC）结合蒸发散射（ELSD）技术测定细胞内海藻糖实验证明转化株能够合成海藻糖。     

胞外ATP的作用,来源和命运

胞外ＡＴＰ（三磷酸腺苷）浓度的改变,影响许多重要的生理功能,诸如神经递质作用、上板凝聚、篾这紧张、心脏功能肉收缩等。胞外ＡＴＰ作为递质直接影响神经效应器接点和／调制其它神经递质以及通过第二信使调节细胞活动,都是由膜上不同的ＡＴＰ受体或激活的离子通道介导的。本文从胞外ＡＴＰ的递质作用的发现与确证,胞外ＡＴＰ的来源、ＡＴＰ的受体、ＡＴＰ介导的反应及包外ＡＴＰ的降解等几方面对胞外ＡＴＰ研究的进展作一综述     

氮源对钝齿棒杆菌谷氨酰胺合成酶的调节作用及溶菌酶对破壁作用…

钝齿棒杆菌６２８２谷氨酰胺合成酶的合成显著受氮源性质的影响,以５０ｍｍｏｌ／Ｌ谷氨酸钠为唯一氮源时,谷氨酰胺合成酶活力最高;ＮＨ４＾＋对谷氨酰合成酶的合成有阻遏作用,谷氨酸钠则具有解阻遏作用,蛋清溶菌酶对于菌株６２８２的细胞超声波破碎具有良好的辅助作用,适宜的细胞破碎条件为０．８ｍｇ／ｍｌ溶菌酶,３７℃保温４￣５ｈ,超声波１２０Ｗ处理１２ｍｉｎ。     

靶向肿瘤酸性微环境的抗肿瘤新策略

越来越多的体内体外实验及临床检测都证明了肿瘤酸性微环境对肿瘤的发生、发展和迁移起着重要作用。在肿瘤酸性微环境的重要调节因子中,V型ATP酶（V-ATPases）的作用至关重要。这些蛋白能将离子泵出膜外,在正常细胞和肿瘤细胞中都有着多种功能。本文回顾和总结了该领域的最新研究成果：在异种移植人肿瘤细胞的动物模型中,体内实验显示,采用小分子干扰RNA（siRNA）可抑制V．ATPaseS的功能,加入药物性质子泵抑制剂可显著地抑制人肿瘤细胞的生长。这些结果提示V-ATPases可作为癌症治疗中一个重要的新选择靶标。     

超干贮藏榆树种子萌发过程中ATP和可溶性糖含量的变化

经过超干(种子含水量3.73%)贮藏(普通室温下2个月)的榆树种子萌发过程中ATP与可溶性糖含量和ATP酶、淀粉酶、抗氧化酶的活性都高于对照(种子含水量9.34%,普通室温下贮臧),说明适度的超干贮藏有利于保持种子活力.     

氟代糖在糖苷酶研究中的应用

近年来,氟代糖应用于糖苷酶反应研究,显示出越来越重要的作用。氟代糖可以作为糖苷酶及其突变酶的水解底物研究酶学性质;氟代糖抑制剂可以标记糖苷酶催化中心,鉴定亲核体氨基酸。尤为重要的是,氟代糖可作为糖苷酶的糖基供体来合成糖类。糖苷酶突变后,可生成糖苷合成酶和硫代糖苷合成酶,可以用与正常底物构型相反的氟代糖作为糖基供体高效合成糖类,收率一般为60%~90%,有的可达100%。糖苷酶及其突变酶以氟代糖为底物高效合成糖类的研究,必将促进生物学、糖生物学和纳米生物材料的发展。     

甘草过表达HMGR、SQS1、β-AS基因再生植株的诱导

目的:诱导过表达3-羟基-3-甲基戊二酰CoA还原酶(HMGR)、鲨烯合成酶1(SQS1)和β-香树脂醇合成酶(β-AS)基因的甘草再生植株。方法:以植物双元表达载体pCAMBIA1305.1为载体骨架,HMGR、SQS1、β-AS基因为目的基因,利用基因重组试剂盒eFusion CloningKit分别构建含有3个外源基因的重组载体,并将其转入根癌农杆菌EHA105,采用根癌农杆菌介导法将目的基因转入甘草外植体。结果与结论:获得了过表达HMGR、SQS1和β-AS基因的甘草愈伤组织及试管苗,为进一步研究这3个功能基因过表达对甘草酸合成的影响奠定了基础。