EB 病毒LMP1 在肿瘤研究中的进展

EB病毒(Epstein-Barr virus,EBV)是具有致瘤潜能的疱疹病毒,与多种恶性肿瘤的发生相关。EB病毒编码的潜伏性膜蛋白1(Latent membrane protein-1,LMP1)作为其主要的致瘤蛋白,能通过细胞内多种信号传导通路,调节和控制细胞的生长、增殖、分化、迁移与凋亡,从而在癌变的发生和发展过程中发挥重要的作用。本文主要就LMP1的结构、生物学功能、介导的信号通路及其与肿瘤关系的相关进展做一阐述。     

重叠PCR 法构建XLRS1 三种不同类型突变体

目的:构建X连锁视网膜劈裂(XLRS)三种不同类型突变体(点突变、缺失突变、插入突变),以便进一步构建不同类型的突变细胞模型。方法:根据NCBI gene数据库中XLRS1基因的CDS设计三对不同类型的引物,使用重叠PCR法获得突变片段,然后克隆入载体pLJM1-EGFP。结果:经测序验证,成功构建了三种不同类型突变体。结论:使用重叠PCR法构建三种不同类型突变体,为进一步研究XLRS1不同类型突变的致病机制奠定了基础。     

Netrin-1 慢病毒表达载体的构建及延缓TGF-β 诱导HK-2 细胞上皮- 间 充质转化的初步研究*

目的:构建netrin-1基因的慢病毒表达载体,初步研究netrin-1在肾小管纤维化的作用.方法:将扩增的netrin-1表达片段克隆入FUW慢病毒表达载体,鉴定重组质粒正确性.利用HEK-293T细胞包装慢病毒,病毒感染人肾小管上皮HK-2细胞,Western blot检测重组病毒netrin-1在真核细胞内表达表达;TGF-β刺激过表达netrin-1的HK-2细胞,利用Westernblot检测其纤维化指标的变化.结果:FUW-netrin-1慢病毒表达载体测序正确,并在感染病毒的细胞中检测出特异性条带,TGF-β刺激感染netrin-1慢病毒HK-2细胞的E-cadherin的下降水平比未感染病毒组低.结论:成功构建了netrin-1的慢病毒表达载体,发现netrin-1可能延缓肾小管内皮细胞发生纤维化.     

双酚A 干扰大鼠生精过程时TJ 渗透性屏障的体外研究

目的:研究体外大鼠睾丸支持细胞紧密连接蛋白(SCJP)在类雌激素-双酚A(BPA)干扰下的损伤机制。方法:对Wistar大鼠睾丸支持细胞(Sertoli细胞)离体原代培养4-5d,通过双室培养模型建立体外紧密连接(TJ)渗透性屏障,并测量其跨上皮电阻值(TER)反应紧密连接结构的形成及BPA对紧密连接的损害程度。设溶剂(DMSO)做阴性对照,以终浓度为25μM、100μM的BPA作用于支持细胞24h,MTT法测不同浓度BPA作用的Sertoli细胞增殖活性。Western bloting观察occludin、ZO-1、Cx43表达的变化。结果:成功分离并培养Wistar大鼠睾丸支持细胞,并建立良好的体外TJ屏障模型。双室培养支持细胞上皮TER值在培养的d4达到顶峰,然后在d4-9维持相对较稳定的状态,d4以200μM,100μM,25μM BPA染毒,分别于染毒后24,48,72,96和120h测TER:与DMSO溶剂对照组相比,200μM,100μM的BPA组TER值明显下降(P<0.05),而25μM的BPA组在染毒后TER值无明显变化(P>0.05)。MTT结果显示:经不同浓度BPA作用24h后,Sertoli细胞的吸光度(OD值)随着染毒剂量的增加而逐渐降低。102、103μM浓度组与溶剂对照组有显著性差异(P<0.05),而10-2、10-1、100、101μM组和溶剂对照组无显著性差异(P>0.05)。Western blot结果显示:occludin、ZO-1、Cx43在各剂量组均有表达,与溶剂对照组相比,occludin、ZO-1表达均分别随作用剂量的增加而降低:25μM组、100μM组与溶剂对照组相比,差异均存在显著性(P<0.05);100μM组与25μM组相比,差异亦存在显著性(P<0.05)。Cx43的表达却随染毒剂量的增加而增加,与溶剂对照组相比,25μM组表达无明显增加(P>0.05),而100μM组则明显增加(P<0.05);与25μM组相比,100μM组表达明显增加(P<0.05)。结论:双酚A可通过损伤支持细胞连接蛋白正常表达,破坏了TJ屏障渗透性,从而影响正常的精子形成过程。     

环境昆虫学报再次入编《中文核心期刊要目总览》

《中文核心期刊要目总览》是北京大学图书馆编委会依据文献计量学的原理和方法,采用定量评价和定性评价相结合的方法,从我国正在出版的中文期刊中评选出了1982种核心期刊。定量评价指标体系包括被索量、被摘量、被引量、他引量、被摘率、影响因子、被国内外重要检索工具收录、基金论文比、Web下载量等9个评价指标;定性评价则采用8200多位学科专家定性评审。《环境昆虫学报》入编《中文核心期刊要目总览》2011年版之植物保护类的核心期刊,这是2008年版《中文核心期刊要目总览》之后再次入选。     

高效液相色谱法测定降糖1号胶囊中淫羊藿苷的含量

目的:建立测定降糖1号胶囊中淫羊藿苷含量的方法。方法:室温条件下超声提取降糖1号胶囊中的淫羊藿苷,用D101大孔吸附树脂柱纯化提取物,高效液相色谱法(HPLC)测定含量,色谱柱:Hypersil ODS2(4.6mm×200mm,5μm);流动相:乙腈-水(30:70);流速:1ml/min,检测波长270nm;柱温:30℃。结果:淫羊藿苷的进样量在0.08μg-0.28μg范围内线性关系良好(r=0.9999),平均加样回收率(n=6)为96.66%,RSD为2.14%。结论:该方法简便、准确、重复性好,可用于降糖1号胶囊的质量控制。     

雄性Fmr1基因敲除小鼠血液生理生化指标及性激素水平的比较研究

目的比较雄性Fmr1基因敲除小鼠和FVB小鼠血液生理生化值和血清性激素水平,探讨Fmr1基因对动物生长发育和生殖生理等方面的影响。方法分别测定血液生理指标、血清生化指标、血清电解质和血清E2、LH、FSH、T和PRL的含量,并进行统计学处理和分析。结果雄性Fmr1基因敲除小鼠与FVB小鼠比较,血液生理指标中MCV和PCT有显著差异（P〈0．05）,而RBC、HCT、HGB、MCH和WBC等无显著差异（P〉0．05）;血清生化指标中除TBIL、[IP^3＋]、[Mg^2＋]（P〈0．05）和AIP、BUN（P〈0．01）外,TPROT、GLB、A／G、BUN、CREAT、[K^＋]、[Na^＋]等项均无显著差异（P〉0．05）。性激素水平E2、LH值差异无显著性（P〉0．05）,FSH、T、PRL差异极显著（P〈0．01）。结论Fmr1基因可影响动物的某些生理生化及激素水平。     

蜂胶黄酮对大鼠脑缺血再灌注损伤后IL-1β、IL-6和TNF-α含量的影响

目的探讨蜂胶黄酮对脑缺血再灌注损伤的保护作用。方法采用大鼠大脑中动脉栓塞模型（MCAO）,研究蜂胶黄酮对脑缺血再灌注脑梗死体积和行为学评分的影响,对脑组织内IL-1β、IL-6和TNF-α含量的影响。结果蜂胶黄酮能够减少MCAO脑梗死体积和行为学评分,降低脑组织中IL-1β、IL-6和TNF-α的含量（P〈0．05）。结论蜂胶黄酮对大鼠脑缺血再灌注损伤有一定保护作用,其作用机制与降低脑组织中IL-1β、IL-6和TNF-α含量有关。     

人胰高糖素样肽-1及其突变体在大肠杆菌BL21中的表达与生物活性研究

以人胰高糖素样肽-1（human glucagons-like peptide-1,GLP-1））为研究对象,以克隆载体pPblu2SKP/（GLP-1A2G）2基因为模板,利用PCR扩增获得GLP-1与其突变体GLP-1A2G的编码基因,并将其插入原核表达质粒pGEX-4T-1中,利用氯化钙法将其转入表达宿主大肠杆菌（Escherichia coli）BL21（DE3）中诱导表达,经IPTG诱导后,收集菌体。菌体经超声破碎后,裂解液用GST亲和层析纯化得到融合蛋白,经凝血酶酶解,用Superdex G-75凝胶层析,得到GLP-1及其突变体GLP-1A2G的样品,经SDS-PAGE电泳测定,样品纯度〉90%。小鼠糖耐量试验表明,相对于空白对照组而言,GLP-1及其突变体GLP-1A2G可以明显地控制血糖的水平,两者的生物活性并无明显差异。由于突变体GLP-1A2G较GLP-1可以更加有效的抵制DPPⅣ的降解,提示突变体GLP-1A2G较GLP-1在白蛋白融合或PEG修饰等方面具有更大的优势。     

假单胞菌DLL-E4尿黑酸降解基因的克隆与功能的初步分析

通过接合转移将质粒pSC123上的转座子Tn5随机插入到DLL-E4基因组DNA中,从大约8,000个突变子中筛选到1株在LB培养基上积累红褐色物质的突变株M18,该突变株不能以L-苯丙氨酸(L-Phenylalanine, Phe)为唯一碳源生长。SEFA-PCR扩增转座子侧翼序列发现其与已报道的尿黑酸1,2-双加氧酶基因hmgA的同源性为92%。将hmgA定向克隆至表达载体pET-29a中,转化至Escherichia coli BL21,经IPTG诱导后可表达分子量约为48kD的蛋白;诱导后转化子粗酶液对尿黑酸有很好的降解效果。将hmgA连入自杀性载体pEX19Gm,通过同源重组整合至M18染色体中,使其恢复了DLL-E4利用Phe的能力,证实了HmgA是尿黑酸苯环裂解酶。