METTL3介导EZH2 m6A修饰在结直肠癌5-氟尿嘧啶耐药中的作用机制研究

摘要 目的：探讨甲基转移酶样蛋白3（METTL3）在5-氟尿嘧啶耐药中的作用机制。方法：大剂量间歇诱导法建立5-FU耐药细胞株。在耐药组细胞中分别敲减METTL3及EZH2抑制GSK343处理。qPCR及Western blot检测METTL3和EZH2表达。CCK-8检测各组细胞增殖情况。m6A甲基化RNA免疫沉淀技术分析EZH2 mRNA m6A修饰修饰情况。结果：各药物浓度处理下的耐药组细胞增殖活性与未处理细胞无显著差异（P>0.05）而原代细胞组肠癌细胞较未处理细胞在0.5-10 μg/mL处理下细胞增殖活性显著减低（P<0.01）。耐药组细胞与原代细胞组相比,METTL3及EZH2表达水平显著升高（P<0.01）。耐药组细胞METTL3敲减后或GSK343处理后,在0.5 μg/mL-10 μg/mL浓度间下的细胞增殖活性与0 μg/mL处理细胞增殖活性相比显著减低（P<0.05）。耐药组细胞METTL3敲减细胞的EZH2表达与对照细胞比,显著下调（P<0.01）。m6A甲基化RNA免疫沉淀实验显示耐药组细胞METTL3敲减细胞的EZH2 mRNA m6A修饰水平（m6A富集度为6361.95±67.47%）,较未敲减细胞修饰水平（396.30±57.74）显著减低（P<0.01）。结论：METTL3在肠癌细胞5-FU耐药抵抗中起到关键作用,靶向抑制METTL3有望成为缓解肠癌耐药的重要分子靶点。     

内皮特异性miR-342-5p敲除致小鼠内皮损伤和心血管功能紊乱

摘要 目的：我们前期研究发现有氧运动促进内皮细胞等分泌miR-342-5p,miR-342-5p通过外泌体富集至心肌细胞后发挥心脏保护作用。本研究的主要目的是明确内皮来源的miR-342-5p在心血管功能调控中的作用。方法：我们构建了内皮特异性miR-342-5p敲除小鼠,通过心脏超声检测和血管收缩舒张功能检测观察了该小鼠心血管功能的变化;培养血管内皮细胞,通过对细胞存活率检测、相关蛋白的表达检测等方法对miR-342-5p发挥心血管保护作用的机制进行探究。结果：内皮miR-342-5p敲除致小鼠运动能力降低、心脏收缩功能不变,但舒张功能紊乱。且内皮miR-342-5p敲除致小鼠血管口径变小、微血管密度降低和血管内皮功能紊乱。内皮miR-342-5p敲除致小鼠心血管功能紊乱的机制与其引起的内皮细胞损伤有关。敲低miR-342-5p致内皮细胞中caspase 9水平增加,引起内皮细胞活性降低和凋亡增加。结论：这些结果进一步证实了内皮细胞来源的miR-342-5p在心血管功能中的重要作用,提示miR-342-5p在防治心血管疾病中的潜在应用。     

胺碘酮与普罗帕酮在快速性心律失常患者院前急救效果中的对比研究

摘要 目的：对比胺碘酮与普罗帕酮在快速性心律失常患者院前急救中的临床效果。方法：将石家庄市急救中心 2019年 4月~2021年 2月期间院前急救时现场治疗的快速性心律失常患者（n=108）按照随机数字表法分为对照组（n=54）和观察组（n=54）。对照组接受普罗帕酮治疗,观察组接受胺碘酮治疗,比较两组心功能、血压、心率（HR）、炎症因子指标、心肌损伤指标及不良反应发生率。结果：治疗结束后,观察组左心室射血分数（LVEF）、心输血量（CO）、二尖瓣舒张早期 /晚期峰值流速（E/A）均高于对照组（P<0.05）。治疗结束后,观察组收缩压（SBP）、舒张压（DBP）、HR均低于对照组（P<0.05）。治疗结束后,观察组肿瘤坏死因子 -α（TNF-α）和白介素 -6（IL-6）水平均低于对照组（P<0.05）。治疗结束后,观察组心肌肌钙蛋白Ⅰ（cTnI）、脑钠肽（BNP）、肌酸激酶同工酶（CK-MB）水平均低于对照组（P<0.05）。两组不良反应发生率组间对比无统计学差异（P>0.05）。结论：在快速性心律失常患者院前急救中,相比于普罗帕酮,胺碘酮可有效改善患者心功能,减少心肌损伤,恢复血压并改善 HR,减轻炎症反应。     

涎液化糖链抗原、基质金属蛋白酶-7和透明质酸联合诊断结缔组织病合并间质性肺疾病的临床价值

摘要 目的：探讨涎液化糖链抗原（KL-6）、基质金属蛋白酶-7（MMP-7）和透明质酸（HA）联合诊断结缔组织病合并间质性肺疾病（ILD）的价值。方法：选取2017年12月至2019年12月本院收治的69例结缔组织病合并ILD患者作为本文研究对象（合并ILD组）,以单纯结缔组织病患者67例,同期体检的60例健康受试者分别作为单纯结缔组织病组和对照组。比较三组受试者血清KL-6、MMP-7和HA,Logistic回归分析确定结缔组织病发生ILD的独立影响因素,通过受试者工作特征（ROC）曲线分析诊断效能。结果：三组血清KL-6、MMP-7和HA水平有差异（P<0.05）,合并ILD组患者血清KL-6、MMP-7和HA水平明显高于单纯结缔组织病组和对照组（P<0.05）,单纯结缔组织病组患者血清KL-6、MMP-7和HA水平明显高于对照组（P<0.05）。Logistic回归分析结果表明,血清KL-6、MMP-7、HA等三指标及粉尘接触史均是结缔组织病发生ILD的显著影响因素（P<0.05）。 ROC分析显示： 血清KL-6、MMP-7和HA等三指标诊断结缔组织病发生ILD的AUC（0.95CI）分别为0.715（0.439～0.988）、0.702（0.440～0.959）、0.711（0.500～0.919）,三指标联合应用的AUC（0.95CI）为0.811（0.705～0.913）,诊断效能较高。结论：结缔组织病合并ILD患者血清KL-6、MMP-7及HA升高,联合应用诊断可提高对ILD的诊断效能,为早期诊断ILD提供一定的参考。     

海藻酸钙对骨质疏松症大鼠骨骼肌SDF-1含量和骨密度的影响

摘要 目的：探讨海藻酸钙对骨质疏松症大鼠骨骼肌基质细胞衍生因子-1（Stromal Cell-derived Factor-1,SDF-1）含量和骨密度的影响。方法：骨质疏松症大鼠（n=48）随机平分为三组-模型组、尼尔雌醇组与海藻酸钙组,在建模后1周后三组分别给予双蒸水、0.1 mg/100 g尼尔雌醇与37.5 mg/mL海藻酸钙/枸杞多糖凝胶微球水溶液灌胃治疗,1 次/d,检测大鼠骨骼肌SDF-1含量和骨密度变化情况。结果：（1）尼尔雌醇组与海藻酸钙组给药第4周与第8周的血清钙离子含量高于模型组（P<0.05）,磷离子含量低于模型组（P<0.05）,尼尔雌醇组与海藻酸钙组对比差异有统计学意义（P<0.05）;（2）尼尔雌醇组与海藻酸钙组给药第4周与第8周的骨骼肌SDF-1含量低于模型组（P<0.05）,海藻酸钙组低于尼尔雌醇组（P<0.05）;（3）尼尔雌醇组与海藻酸钙组给药第4周与第8周的腰椎和股骨骨密度高于模型组（P<0.05）,海藻酸钙组低于尼尔雌醇组（P<0.05）;（4）尼尔雌醇组与海藻酸钙组给药第4周与第8周的股骨最大载荷、最大应力高于模型组(P<0.05),海藻酸钙组高于尼尔雌醇组（P<0.05）;（5）海藻酸钙组造血细胞数量较多,骨皮质结构较完整,致密均匀粗壮,小梁数目明显增多,骨髓腔变小。结论：海藻酸钙在骨质疏松症大鼠的应用能抑制骨骼肌SDF-1的释放,有助于提高骨密度,改善骨生物力学指标,提高血清钙离子含量,降低磷离子含量。     

布地奈德混悬液对哮喘幼鼠上皮-间充质转化和气道重塑的影响及机制

摘要 目的：探讨布地奈德混悬液对哮喘幼鼠上皮-间充质转化和气道重塑的影响及机制。方法：将哮喘幼鼠(n=36)随机平分为三组-模型组、布地奈德1组、布地奈德2组,三组分别给予雾化吸入生理盐水、布地奈德混悬液0.1 mg与布地奈德混悬液0.2 mg,1次/d,共14d,检测与观察幼鼠上皮-间充质转化和气道重塑变化情况。结果：布地奈德1组、布地奈德2组的支气管肺泡灌洗液白细胞总数与嗜酸性粒细胞总数都低于模型组(P<0.05),布地奈德2组低于布地奈德1组(P<0.05)。布地奈德1组、布地奈德2组的血清肿瘤坏死因子(Tumor necrosis factor,TNF)-α、血红素加氧酶(heme oxygenase,HO)-1含量低于模型组(P<0.05),布地奈德2组低于布地奈德1组(P<0.05)。布地奈德1组、布地奈德2组的支气管壁厚度(WAt/Pi)、支气管壁平滑肌细胞核数量(N/Pi)、支气管壁平滑肌厚度(WAm/Pi)都高于模型组,布地奈德2组高于布地奈德1组(P<0.05)。布地奈德1组、布地奈德2组的肺组织E-cadherin、NF-κB蛋白相对表达水平低于模型组(P<0.05),布地奈德2组低于布地奈德1组(P<0.05)。结论：布地奈德混悬液在哮喘幼鼠的应用能抑制上皮-间充质转化和气道重塑,也可抑制TNF-α、HO-1的释放,减轻嗜酸性粒细胞与白细胞的浸润,从而发挥肺保护作用,且存在剂量依赖性。     

睡眠障碍通过下丘脑-垂体-卵巢轴影响女性生育能力的临床研究

摘要 目的：探究睡眠障碍是如何通过下丘脑-垂体-卵巢轴影响女性生育能力的。方法：选择2018年10月至2021年10月于我院妇科内分泌科就诊的育龄期女性80例作为研究对象,根据匹兹堡睡眠质量指数量表（PSQI）评估结果,将所有研究对象按照是否存在睡眠障碍分为睡眠障碍组（n=34例）和非睡眠障碍组（n=46例）。对比分析两组PSQI评分,血清性激素水平,月经周期,生育能力,通过Pearson法分析睡眠障碍与女性生育能力的相关性。结果：（1）睡眠障碍组PSQI总分以及睡眠质量、入睡时间、睡眠时间、睡眠效率、睡眠障碍和日间功能障碍各方面得分均显著高于对照组（P<0.05）;（2）睡眠障碍组卵泡刺激素（FSH）、黄体生成素（LH）较非睡眠障碍组升高,而雌二醇（E₂）水平低于非睡眠障碍组（P<0.05）;（3）两组月经周期比较,睡眠障碍组月经紊乱比例显著高于对照组（P<0.05）;（4）两组生育能力比较,睡眠障碍组生育能力显著低于对照组（P<0.05）。（5）睡眠障碍与FSH和LH均存在负相关性,和E₂存在正相关（P<0.05）。结论：睡眠障碍可减弱下丘脑-垂体-卵巢轴的驱动,导致卵泡刺激素释放缓慢,延长了月经周期,并导致黄体功能下降,增加了未受孕或者再次异位妊娠的发生率。     

工程化外泌体介导巨噬细胞清除肿瘤外泌体*

目的:通过膜表面修饰改造技术构建工程化外泌体(engineered exosomes,enExos),并以此介导巨噬细胞特异性清除膜表面富含表皮生长因子受体(epidermal growth factor receptor,EGFR)的肿瘤外泌体。方法:利用表面展示技术获得膜表面展示趋化因子(chemokine 8,CXCL8)的外泌体,同时在其磷脂双分子层上修饰EGFR核酸适配体制备工程化外泌体;纳米颗粒跟踪和纳米粒度电位分析enExos的尺寸、电位;CCK-8试剂盒检测细胞活力;透射电子显微镜观察enExos与高表达EGFR的肿瘤外泌体的特异性结合;荧光成像技术及流式细胞术分析探究enExos靶向趋化巨噬细胞吞噬高表达EGFR的肿瘤外泌体。结果:成功构建膜表面展示EGFR与CXCL8的工程化外泌体,enExos可以特异性识别并捕获高表达EGFR的肿瘤外泌体,同时利用其趋化因子CXCL8特异性靶向巨噬细胞膜表面趋化因子受体CXCR1/CXCR2,刺激巨噬细胞对肿瘤外泌体的捕获及清除。结论:工程化外泌体促进了特定肿瘤外泌体的清除,为后续深入研究工程化外泌体抑制癌症转移的作用奠定基础,并期望为癌症转移治疗提供新的研究方向。     

小麦TabHLH123-6A基因克隆与功能标记开发北大核心CSCD

根系是植物吸收水分与养分的重要器官,挖掘利用小麦根系相关调控基因对于粮食生产具有重要意义。b HLH(basic Helix-Loop-Helix)是植物中广泛存在的一类转录因子,参与调节植物的生长发育。本研究克隆了小麦基因Tab HLH123-6A,其开放阅读框1386 bp,编码461个氨基酸,含有保守的HLH结构域,具有典型的b HLH家族成员特性。对其互作蛋白预测分析发现,Tab HLH123-6A与HLH家族的其他蛋白以及锌指蛋白存在相互作用。组织表达模式分析表明,Tab HLH123-6A在小麦不同生育时期的各个组织中均有表达,在根和根基中表达量较高。启动子序列分析显示Tab HLH123-6A启动子区含有多种顺式作用元件,包括生长素、脱落酸和茉莉酸甲酯等激素应答元件。q RT-PCR检测结果表明在生长素、脱落酸和茉莉酸甲酯的处理下Tab HLH123-6A表达均上调,但是在PEG模拟的干旱处理下其表达受到抑制。利用小麦多态性群体材料检测到Tab HLH123-6A基因25 bp处有1个核苷酸变异位点(C/T),表示为Tab HLH123,根据该位点开发了功能标记d CAPS-Kpn I。关联分析发现Tab HLH123与小麦深根比显著相关,且等位变异类型为Tab HLH123的小麦深根比高于Tab HLH12325-T,Tab HLH123在小麦育种历史中受到了正向选择。本研究结果为小麦根系构型改良提供了理论依据和基因资源。     

灰树花多糖对乳腺癌细胞MCF-7的凋亡作用

采用MTT法测定不同给药浓度的灰树花多糖(PGF) (1、10、20、50、100和200 μg/mL)在24、48和72 h对乳腺癌细胞(MCF-7)增殖的抑制率,并采用Hoechst染色与流式细胞技术观察20、50和100 μg/mL PGF给药24 h后MCF-7的凋亡情况,同时采用Western blotting对20、50、100 μg/mL PGF给药24 h后MCF-7细胞中Bax、Bcl-2、Pro-Caspase-3以及Cleaved Caspase-3的蛋白表达水平进行检测。研究发现PGF给药24、48和72 h后对MCF-7的增殖均有显著的抑制作用。随着PGF给药浓度增加,MCF-7细胞核裂解增多,细胞凋亡数量增多。PGF 20、50和100 μg/mL给药对MCF-7细胞Bax、Bcl-2、Pro-Caspase-3以及Cleaved Caspase-3的蛋白表达水平可见显著性差异。