热激蛋白的分子生物学研究进展

热激蛋白的分子生物学研究进展费云标,黄涛,舒念红,江勇（中国科学院发育生物研究所,北京１０００８０）ＡＤＶＡＮＣＥＳＯＦＭＯＬＥＣＵＬＡＲＢＩＯＬＯＧＹＯＮＨＥＡＴＳＨＯＣＫＰＲＯＴＥＩＮＳ￥ＦｅｉＹｕｎ－ｂｉａｏ;ＨｕａｎｇＴａｏ;ＳｈｕＮｉａｎ－...     

核糖体灭活蛋白及相关毒素的生物学活性研究进展

核糖体灭活蛋白及相关毒素的生物学活性研究进展奚正德综述马宝骊审阅（上海第二医科大学免疫学教研室,上海市免疫学研究所基础免疫一室２０００２５）核糖体灭活蛋白（ｒｉｂｏｓｏｍｅ－ｉｎａｃｔｉｖａｔｉｎｇｐｒｏｔｅｉｎｓ,ＲＩＰｓ）是一类能抑制蛋白质生物合...     

编码人疱疹病毒－6型核糖核苷酸还原酶和P41蛋白基因的克隆和序列测定

本文报道人疱疹病豢－６型（ＨＨＶ－６）ｐＳＴＹ２８ＤＮＡ片段的序列测定。应用分子克隆、缺损突变体（Ｄｃｌｅｔｉｏｎｍｕｔａｎｔ）制备和序列测定等技术,完成了３．９ｋｂＨＨＶ－６ｐＳＴＹ２８ＤＮＡ片段的全序列测定。经ＤＮＡＳＩＳ核酸蛋白软件分析,该片段含有两个开读框架（ＯＲＦ）核糖核苷酸还原酶（ＲＩＲ）ＯＲＦ有２４１４个核苷酸,可编码８０５个氨基酸;Ｐ４１蛋白由１１００个核苷酸组成。与其他疱疹病毒作氨基酸同源性比较,ＨＨＶ－６ＲｉＲ与人巨细胞病毒（ＨＣＭＶ）有高度同源性,最适记分（Ｏｐｔｉｍｉｚｅｄｓｃｏｒｅ）达４５９。实验结果支持Ｅｓｆｔａｔｈｉｏｕ提出的论点,ＨＨＶ－６属于β－疱疹病毒。     

狂犬病毒G蛋白和N蛋白在痘苗病毒天坛株中共同表达

本文构建了一个能同时表达狂犬病毒糖蛋白（Ｇ）和核蛋白（Ｎ）两种蛋白的重组组痘苗病毒。用Ｓｏｕｔｈｅｒｎ ｂｌｏｔ和免疫荧光等方法证明Ｇ和Ｎ基因已重组到痘苗病毒ＴＫ基因区,而且能良好地表达。并证明该重组病毒在小鼠中具有良好的免疫效果。     

NIDDM发病前后中国地鼠胰岛和肝脏细胞GLUT的变化研究

用胶原酶法分离胰岛细胞、超速离心法提取中国地鼠胰岛和肝脏细胞膜蛋白,ＳＤＳ电泳、ＷｅｓｔｅｒｎＢｌｏｔｔｉｎｇ分离ＧＬＵＴ后,应用ＧＬＵＴ２抗体免疫结合法测定ＧＬＵＴ的含量与分子量,同时测定了动物血糖、尿糖和血浆胰岛素的含量、显微镜下直接计数了胰岛细胞总数。结果表明：ＮＩＤＤＭ发病后,自发ＮＩＤＤＭ中国地鼠胰岛细胞ＧＬＵＴ含量减少,与ＧＬＵＴ２抗体反应明显减弱,但肝脏ＧＬＵＴ无明显变化。胰岛细胞总数发病前后大体一致。而血糖、尿精及血浆胰岛素浓度明显升高。     

奈瑟氏脑膜炎球菌铁调蛋白性质的研究

由于Ｂ群脑膜炎奈瑟氏球菌的荚膜多糖成份不能提供有效的免疫保护力,人们把希望寄托在脑膜炎球菌的蛋白成份上。目前人们对该菌在限铁环境中表达的一类新的蛋白成份—铁调蛋白研究较多。铁调蛋白已知有６类：ＦｅＲＰ－７０铁结合蛋白,转铁结合蛋白１（ＴＢＰ１）,转铁结合蛋白２（ＴＢＰ２）,乳铁结合蛋白及血红素结合蛋白。其中研究比较清楚的是ＦｅＲＰ－７０及ＴＢＰ１、ＴＢＰ２。ＴＢＰ１是跨膜蛋白,部分暴露于细胞表面。ＴＢＰ２是外膜蛋白,由Ｎ末端的类脂尾巴锚合在膜上。二者均为脑膜炎球菌铁吸收所必需。ＴＢＦ１及ＴＢＰ２在分离层析时往往以复合体的形式一同被纯化,该复合体能诱导保护性抗体的产生,并能提供一定的保护力。进一步的实验证实了ＴＢＰ２的免疫原性。ＦｅＲＰ－７０也为铁吸收所必需,并有菌株特异的抗原保护性。ＴＢＰ１、ＴＢＰ２、ＦｅＲｐ－７０及其它一些胞内蛋白有机组成了脑膜炎球菌的一条吸收铁的路径,而ＴＢＰ２则有希望成为脑膜炎球菌的新型菌苗抗原成份。     

凤凰木种子蛋白的分离提纯和生化性质

研究了植物凤凰木种子中的蛋白质成分,试图分离出新的核糖体失活蛋白凤凰木种子经磷酸盐缓冲液抽提,硫酸铵分级盐析,分子筛和阴离子交换剂等多次柱层析,分离出三种组分ＤｒⅠ、ＤｒⅡ和ＤｒⅢ．ＳＤＳ－ＰＡＧＥ和ＩＥＦ实验表明这三种蛋白质均达到单一纯,而ＨＰＬＣ实验则表明它们的纯度不低于９０％。它们的分子量据ＳＤＳ－ＰＡＧＥ和ＨＰＬＣ实验分别约２３５００、２６０００、２８５００．ＩＥＦ实验测得三者的等电点均为５．２左右。测定了组分ＤｒⅠ的蛙卵泡裂解活性,其毒性约为天花粉蛋白的１／４０．分析了它们的氨基酸组成。估算了三种蛋白质的二级结构含量,结果表明三者均富含β折叠结构。已有的实验事实表明这三种蛋白质的生化行为明显异于核糖体失活蛋白,因而很可能不属于这一蛋白质家族。     

人类免疫缺陷病毒Ⅰ型核心蛋白(p24)在大肠杆菌中的表达、纯化及鉴定

在大肠杆菌中,利用新构建的含T7g-10L RBS以及λ-PR启动子的新型原核表达载体,通过表达gag-pol基因片段,获得了具有天然序列的人类免疫缺陷病毒1型(HIV-1)核心蛋白p24的高效表达。克隆的gag-pol基因片段在其阅读框架移位区域插入了4bp碱基,其表达的病毒蛋白酶在阅读框架上与gag一致,从而实现了对gag-pol融合蛋白的有效加工,产生成熟的核心蛋白p24及其它产物。重组p24以可溶形式存在,可以被抗p24的单克隆抗体特异识别。测定的N端8个氨基酸序列与从病毒纯化的p24完全一致。在使用硫酸铵沉淀后,采用两步离子柱层析,可将重组蛋白纯化到95％以上的纯度。结果表明,纯化的p24可以作为特异性很强的试剂而用于HIV感染的诊断及病情的预后,并可用于p24的生化及结构分析。     

以融合蛋白形式在大肠杆菌中表达人MCP－1

将编码人单核细胞趋化蛋白－１（ＭＣＰ－１）的基因亚克隆到大肠杆菌表达载体ｐＥＸ３１Ａ中,在大肠杆菌中表达出ＭＳ２／ＭＣＰ－１融合蛋０白,该表达产物约占菌体总蛋白的１５％左右,Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔ检测表明,表达产物可与ＭＣＰ－１抗体特异反应。采用琼脂糖平板法进行活性测定表明,表达产物具有明显的单核细胞趋化活性,说明Ｎ端融合一段细菌蛋白对ＭＣＰ－１有无趋化活性可能没有影响。     

昆虫杆状病毒晚期启动子在大肠杆菌中启动CAT基因表达

将油桐尺蠖（Ｂｕｚｕｒａｓｕｐｐｒｅｓｓａｒｉａ）核多角体病毒晚期基因──多角体蛋白基因启动子及５′端编码区,以两种不同方式置于缺乏启动子的氯霉素乙酰基转移酶（ＣＡＴ）基因上游,使其分别终止在不同翻译终止位点,其宿主菌具有明显不同的氯霉素抗性,最高达２００ｍｇ／Ｌ　ＬＢ培养基以上,表明昆虫病毒启动子能启动原核基因表达。对多角体蛋白基因启动子能在大肠杆菌中有效工作的原因进行了讨论。