内皮素—1预处理大鼠心脏Gaq／11和Gia蛋白含量的变化

The present study was undertaken to explore the mechanism of G protein-mediated signal transduction pathway during endothelin-1 (ET-1) pre-treatment and ischemic preconditioning (IP). Rats were divided into four groups: ET-1, IP, ischaemia-reperfusion (IR) and control groups. ET-1 pre-treatment model was prepared by administrating 0.5 nmol/(L.kg) ET-1 into rat left ventricle, whereas IP model was prepared by ligating the left coronary artery for 5 min followed by 30 min reperfusion. All the animals were subjected to 60 min regional ischaemia and 30 min reperfusion alternately and then parameters of ventricular arrhythmia and expression of cardiac Galphaq/11 and Gialpha2 were measured. The results showed that the scores of ventricular arrhythmia decreased significantly in both ET-1 and IP treated groups as compared with IR group. In comparison with control group, Galphaq/11 increased by 77.8% (P<0.05) and 110.6% (P<0.01) in IP and ET-1 group respectively. Gialpha2 showed no significant difference in IP group, while it decreased by 31.0% (P<0.01) in ET-1 group. In conclusion, activation of G alphaq/11 may be related to the protecting mechanism of ET-1 pre-treatment and IP, whereas Gialpha2 may only play a role in ET-1 pre-treatment.     

用重组大肠杆菌JM109(pKST11)转化苯生产顺-1,2-二羟基-3,5-环己二烯

顺-1,2-二羟基-3,5-环己二烯（简称DHCD）是航天业、电子工业、医药业以及精细化工业上重要的手性化合物。利用重组E. coli JM109 (pKST11),采用适时监测发酵过程中全细胞甲苯双加氧酶（Toluene dioxygenase,TDO）活性的方法,研究了发酵生产DHCD工艺中的重要影响因子IPTG以及底物苯的供给方式对DHCD产量的影响。研究结果表明：（1）发酵初期利用IPTG诱导TDO的表达,不利于细胞生长,在对数生长中期（6或8h）,采用0.5mmol/L IPTG即可诱导出TDO的最高表达。（2）发酵液中的苯对全细胞甲苯双加氧酶(TDO)的活性有抑制作用,而利用液体石蜡作为缓释剂进行两相法发酵则降低了苯的毒害,明显提高了DHCD的产量。当采用传统的通气供苯方法,DHCD的产量仅有75 g/L;批式添加液体石蜡与苯的混溶物使DHCD的产量提高到226 g/L,是通气供苯法的3倍;而采用流加的方式添加液体石蜡与苯的混溶物使DHCD的产量进一步提高到368 g/L,是通气供苯法的5倍。证明通过发酵工艺的优化可以解决苯的毒害与苯作为反应底物在水相中需要有一定浓度之间的矛盾,获得较好的转化结果。     

苏云金芽孢杆菌Cry1Ac杀虫晶体蛋白及其分子设计

cry1Ac编码的杀虫晶体蛋白是苏云金芽孢杆菌(Bt)产生的多种杀虫晶体蛋白中对鳞翅目昆虫有很高毒性的蛋白.第一个Cry1Ac杀虫晶体蛋白最早在库斯塔克亚种HD73中以伴胞晶体形式分离获得,其编码区为3 534 bp,编码蛋白分子量为133 kD,含1 178个氨基酸,等电点为4.84.自此以来,Cry1Ac杀虫晶体蛋白结构、功能以及应用研究一直是Bt杀虫晶体蛋白研究的重要方向.本文介绍了苏云金芽孢杆菌中应用最广泛的Cry1Ac杀虫晶体蛋白家族的结构、功能及其基因分类,并进一步就基于苏云金芽孢杆菌Cry1Ac杀虫晶体蛋白的基因工程研究做了分析,提出了持续利用BtCry1Ac杀虫晶体蛋白的一些见解.     

虎纹捕鸟蛛毒素-Ⅰ突变体K3A-HWTX-Ⅰ的化学合成与生理活性分析

采用固相Ｆｍｏｃ法在自制自动蛋白质化学工作站上合成了其第３位赖氨酸（Ｋ３）被丙氨酸（Ａ）取代的虎纹捕鸟蛛毒素－Ⅰ的突变体Ｋ３Ａ－ＨＷＴＸ－Ⅰ．合成的突变体用Ｅｄｍａｎ降解和电喷雾质谱进行鉴定．Ｋ３Ａ－ＨＷＴＸ－Ⅰ经谷胱甘肽系统进行氧化复性后通过离子交换和反相ＨＰＬＣ纯化．活性分析结果表明,Ｋ３被Ａ取代后ＨＷＴＸ－Ⅰ的生物活性下降了８０％,提示Ｋ３与ＨＷＴＸ－Ⅰ的生物活性有一定的相关性     

苏云金芽孢杆菌S1478-1分离株的特性鉴定及cry1Ac同源基因克隆

本研究对从海南岛尖峰岭热带雨林自然保护区的土壤样品中分离出的Bt菌株S1478-1进行了特性鉴定,研究表明S1478-1分离株菌落形态和生长特征和Bt参照菌株HD73极其相似.16S rDNA序列分析表明,S1478-1分离株与其它B.thuringiensis、B.cereus和B.anthracis的16S rDNA序列相似性达到99%.分离株能产菱形伴胞晶体,SDS-PAGE蛋白电泳分析表明,菌株在生长后期,形成芽孢同时分泌130 kD大小的晶体蛋白.生物测定表明S1478-1分离株对小菜蛾具有很高的毒杀活性,LC50卯值高达5.159 ×108cfu/mL.初步显示S1478-1分离株可作为防治鳞翅目害虫的生物农药菌株.利用PCR-RFLP方法鉴定S1478-1分离株含有cry1Ac同源基因,以PCR粘性端克隆方法扩增全长基因,序列测定表明该基因ORF为3 537bp,编码1178个氨基酸,推定的编码蛋白分子量为133.3 kD,与其它cry1Ac基因序列最高达到99%同源,因此,该基因可作为杀虫工程菌及培育转基因抗虫作物的候选基因.     

基于"经筋理论"针刀治疗对早中期膝骨关节炎患者骨代谢指标和血清TIMP-1、MMP-3、MMP-13的影响

摘要 目的：探讨基于"经筋理论"针刀治疗对早中期膝骨关节炎（KOA）患者骨代谢指标和血清金属蛋白酶抑制物-1（TIMP-1）、基质金属蛋白酶（MMP）-3、MMP-13的影响。方法：根据随机数字表法,将2021年1月至2023年1月期间就诊于新疆医科大学附属第一医院的120例早中期KOA患者分为对照组（n=60,常规治疗）和研究组（n=60,对照组的基础上接受"经筋理论"针刀治疗）。对比两组疗效、量表评分[疼痛视觉模拟评分（VAS）、西安大略和麦克马斯特大学骨关节炎调查表（WOMAC）]、骨代谢指标[抗酒石酸盐酸性磷酸酶异构体（TRACP-5b）、骨特异性碱性磷酸酶（BALP）、骨钙素（BGP）]和血清TIMP-1、MMP-3、MMP-13。结果：与对照组相比,研究组的临床总有效率更高（P<0.05）。与对照组相比,研究组治疗后WOMAC、VAS评分和血清MMP-3、MMP-13、TRACP-5b水平更低,TIMP-1、BALP、BGP水平更高（P<0.05）。结论：基于"经筋理论"针刀治疗早中期KOA患者,可有效减轻疼痛症状,提高临床治疗效果,可能与改善骨代谢指标和血清TIMP-1、MMP-3、MMP-13水平有关。     

血清VEGF、HPSE、HIF-1α与视网膜中央静脉阻塞患者雷珠单抗治疗后视力预后的关系

摘要 目的：研究血清血管内皮生长因子（VEGF）、乙酰肝素酶（HPSE）、低氧诱导因子1α（HIF-1α）与视网膜中央静脉阻塞（CRVO）患者雷珠单抗治疗后视力预后的关系。方法：选取2020年1月-2022年8月贵州医科大学附属医院眼科收治的145例CRVO患者,根据雷珠单抗治疗后视力预后状况分为预后良好组（n=104）和预后不良组（n=41）。比较预后良好组和预后不良组临床资料及血清VEGF、HPSE、HIF-1α水平。采用多因素Logistic回归模型分析CRVO患者雷珠单抗治疗后视力预后的影响因素,采用受试者工作特征（ROC）曲线分析血清VEGF、HPSE、HIF-1α对CRVO患者雷珠单抗治疗后视力预后的预测价值。结果：与预后良好组相比,预后不良组的年龄、缺血型CRVO占比、合并高血压占比、合并高脂血症占比、持续黄斑水肿占比及血清VEGF、HPSE、HIF-1α水平更高,同时CRVO病程更长,初诊最佳矫正视力更低（均P＜0.05）;多因素Logistic回归分析显示初诊最佳矫正视力低、持续黄斑水肿、缺血型CRVO及血清VEGF、HPSE、HIF-1α升高是CRVO患者雷珠单抗治疗后视力预后不良的危险因素（P＜0.05）;血清VEGF、HPSE、HIF-1α单独和联合预测CRVO患者雷珠单抗治疗后视力预后的曲线下面积（AUC）分别为0.726、0.777、0.836、0.891,联合预测的效能显著优于单项检测（P＜0.05）。结论：CRVO患者血清VEGF、HPSE、HIF-1α水平越高,雷珠单抗治疗后视力预后状况越差。三项指标联合预测CRVO患者雷珠单抗治疗后视力预后的价值较高,有望作为CRVO预后评估指标。     

健脾益肾活血方联合达格列净对糖尿病肾病患者炎症因子、氧化应激和血清AGEs、NGAL、MCP-1的影响

摘要 目的：观察健脾益肾活血方联合达格列净对糖尿病肾病（DN）患者炎症因子、氧化应激和血清中性粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋白（NGAL）、晚期糖基化终末产物（AGEs）、单核细胞趋化蛋白1（MCP-1）的影响。方法：根据随机数字表法将如皋市中医院2021年6月~2023年3月期间收治的120例DN患者分为对照组（60例,常规治疗基础上接受达格列净治疗）和研究组（60例,对照组基础上接受健脾益肾活血方治疗）。对比两组疗效、炎症因子[白细胞介素-1β（IL-1β）、肿瘤坏死因子-α（TNF-α）、C反应蛋白（CRP）]、肾功能[血肌酐（Scr）、血尿素氮（BUN）、尿微量白蛋白/肌酐比值（UACR）]、氧化应激[丙二醛（MDA）、超氧化物歧化酶（SOD）]和血清AGEs、NGAL、MCP-1水平,同时观察两组治疗期间不良反应发生情况。结果：研究组的临床总有效率高于对照组（P<0.05）。两组治疗2个疗程后Scr、BUN、UACR下降,且研究组低于对照组（P<0.05）。两组治疗2个疗程后CRP、TNF-α、IL-1β下降,且研究组低于对照组（P<0.05）。两组治疗2个疗程后MDA下降,且研究组低于对照组;SOD升高,且研究组高于对照组（P<0.05）。两组治疗2个疗程后NGAL、AGEs、MCP-1下降,且研究组低于对照组（P<0.05）。两组不良反应发生率对比未见差异（P>0.05）。结论：健脾益肾活血方联合达格列净可有效减轻DN患者氧化应激和炎症反应,调节血清AGEs、NGAL、MCP-1水平。     

基于NF-κB/HIF-1α信号通路探讨慢性脑低灌注与神经炎症的相关性研究

摘要 目的：探究NF-κB/HIF-1α信号通路在慢性脑低灌注引起神经炎症过程中的作用及机制。方法：采用单侧颈总动脉永久性结扎（Unilateral Common Carotid Artery Occlusion,UCCAO）方法建立慢性脑低灌注小鼠模型,随机分为3大组,每组50只,分别为正常对照组,假手术组和UCCAO组,每大组按1 d、3 d、7 d、14 d、21 d分为5小组。采用Morris水迷宫评定学习记忆能力。采用RT-PCR法检测小鼠脑组织HIF-1α mRNA和NF-κB p65 mRNA相对表达水平。采用ElISA 方法检测小鼠脑组织炎症指标TNF-α、IL-1β。结果：与假手术组比较,UCCAO组学习记忆明显下降（P<0.01）。与假手术组比较,UCCAO组小鼠脑组织HIF-1α mRNA和NF-κB p65 mRNA相对表达水平明显增加（P<0.01）,HIF-1α mRNA和NF-κB p65 mRNA相对表达水平均于术后3 d开始明显增加,7 d出现高峰,且21 d后相对表达水平仍然明显增加（P<0.01）。与假手术组比较,UCCAO组小鼠脑组织匀浆液中TNF-α和IL-1β的含量明显增加（P<0.01）。结论：1.慢性持续性脑低灌注可导致小鼠出现进行性认知功能障碍。2.CCH后缺血缺氧既可以激活HIF-1α信号通路,又是NF-κB信号转导途径的刺激因子,这两条信号通路存在着诸多交叉,NF-κB活化对HIF-1α调控和炎症反应的形成正反馈。     

甲状腺乳头状癌组织YAP、SATB1、ROR2与临床病理特征和复发的关系研究

摘要 目的：探讨甲状腺乳头状癌组织Yes相关蛋白（YAP）、核基质结合区结合蛋白1（SATB1）、受体酪氨酸激酶样孤儿素受体2（ROR2）与临床病理特征和复发的关系。方法：选择2019年6月至2021年6月广东省中医院收治的198例行手术治疗的甲状腺乳头状癌患者,取手术切除的癌组织和癌旁组织,免疫组化法检测YAP、SATB1、ROR2蛋白表达情况。术后随访2年,统计复发情况,根据复发情况将患者分为复发组和未复发组。比较甲状腺乳头状癌患者不同临床病理特征之间YAP、SATB1、ROR2蛋白表达差异,多因素Cox回归分析影响甲状腺乳头状癌术后复发的因素。结果：癌组织中YAP、SATB1、ROR2阳性表达率高于癌旁组织（P＜0.05）。低度分化、TNM分期Ⅲ期、淋巴结转移患者癌组织中YAP、SATB1、ROR2阳性表达率高于中高度分化、TNM分期Ⅰ～Ⅱ期、无淋巴结转移患者（P＜0.05）。198例患者随访2年失访1例,复发21例,复发率为10.66%。复发组癌组织中YAP、SATB1、ROR2阳性表达率高于未复发组癌组织（P＜0.05）。多因素Cox回归分析显示低分化、TNM分期Ⅲ期、未淋巴结清扫、YAP阳性表达、SATB1阳性表达、ROR2阳性表达比是甲状腺乳头状癌术后复发的危险因素（P＜0.05）。结论：甲状腺乳头状癌组织中YAP、SATB1、ROR2阳性表达率显著增高,YAP、SATB1、ROR2阳性表达与低分化、淋巴结转移、晚TNM分期以及术后复发有关。