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951.
大肠埃希菌Mn-SOD基因的克隆、表达及多克隆抗体制备 总被引:1,自引:0,他引:1
目的实现Mn-SOD基因在大肠埃希菌中的高可溶性表达,制备Mn-SOD的多克隆抗体。方法用PCR方法从一株野生型大肠埃希菌(E.coli)基因组中扩增Mn-SOD基因编码区.将它克隆到原核表达载体上进行大量表达和纯化,再用纯化的蛋白对新西兰大白兔进行背部多点注射,40d后取其血清,用Western-blot印迹实验测定抗体效果。结果SDS-PAGE分析表明SOD的表达量约为细菌总蛋白的50%;黄嘌呤氧化酶法测定表达蛋白活性,结果表明每毫克菌体可溶性总蛋白中表达产物酶比活为3921.77U/mg,是对照BL21的276.77倍;并制备了高效价的多克隆抗体。结论该研究成功地构建了大肠埃希菌Mn-SOD基因高效原核表达系统,所表达的Mn-SOD具有良好的免疫原性和免疫反应性。 相似文献
952.
双歧杆菌缓解DSS诱导的溃疡性结肠炎作用机制的研究 总被引:4,自引:1,他引:3
目的通过RT—PCR检测IECs中TLR2与TLR4的表达,通过荧光定量PCR检测IECs中IL-1和TNF-α的表达,以对双歧杆菌预防与辅助治疗UC作用机制加以探讨。方法将36只Babl/c小鼠随即分为3组,即正常对照组(N)、DSS诱导组(D)、双歧杆菌喂养组(B)。N组不施加作用,D组生理盐水灌肠2周,并在第2周给以2%的DSS自由饮用;双歧杆菌组双歧杆菌灌肠2周,并在第2周再给以2%的DSS自由饮用。2周后处死小鼠做组织切片和分离IECs并提取IECs中的总RNA,用RT—PCR检测TLR2、TLR4的表达,用Real time RT—PCR检测IL-1和TNF-α表达。结果双歧杆菌组IECs表达TLR2远远高于单纯的DSS诱导组,结果具有统计学意义,而双歧杆菌组IECs表达TLR4、IL-1和TNF-α则远远低于单纯的DSS诱导组,结果具有统计学意义。结论双歧杆菌通过与诱导IECs中TLR2的表达而抑制其TLR4、IL-1和TNF一Ⅸ的表达,从而达到预防与辅助性治疗DSS诱导的UC作用。 相似文献
953.
从大肠杆菌中表达、纯化宁乡猪N-乙酰谷氨酸合成酶并制备其多克隆抗体 总被引:1,自引:0,他引:1
N-乙酰谷氨酸合成酶催化生成的N-乙酰谷氨酸(NAGS)对于哺乳动物尿素循环第一个酶—氨基甲酰磷酸合成酶I变象异构激活是必需的。N-乙酰谷氨酸合成酶定位于肝脏和小肠线粒体基质中,通过提供N-乙酰谷氨酸调节氨基甲酰磷酸合成酶I的活性来调节尿素合成。我们用RT-PCR方法从宁乡猪肝脏中扩增了N-乙酰谷氨酸合成酶的开发阅读框,并将此基因连接到原核表达载体上,构建了pET-NAGS质粒。将重组质粒转化到Ec.oliBL21(DE3),在IPTG诱导下表达His-NAGS融合蛋白。通过SDS-PAGE,得出NAGS分子量约为40kDa。一步亲和层析纯化后,我们将纯化后的NAGS蛋白注射到新西兰大白兔中制备多克隆抗体。通过免疫组化和免疫印迹测试抗体,结果表明此抗体有较好的抗原性和特异性。据我们所知,这是第一次在大肠杆菌中表达来源于宁乡猪的NAGS。 相似文献
954.
为了进一步从蛋白水平上检测Ndfip1(Nedd4 family interacting protein 1)和Nedd4(Neuronal precursor cell-expressed developmentally down-resulated 4)在肢带型肌营养不良(Limb-girdle muscular dystrophy,LGMD)患者的肌肉组织中的表达及功能,以正常人的脑和肾脏组织的总RNA为模板,RT-PCR扩增Ndfip1和Nedd4部分编码序列,构建原核表达重组质粒pET28b-hNdfip1和pET28b-hNedd4,转化大肠杆菌BL21后,加IPTG诱导蛋白表达,Ni-NTA层析柱纯化蛋白,免疫BALB/c小鼠制备抗体.Western blot检测显示抗体能识别人和小鼠的Ndfip1和Nedd4,小鼠各组织中Ndfip1的蛋白表达谱与文献报道的Ndrip1 mRNA表达谱不一致,暗示Ndfip1具有转录和翻译水平的调控. 相似文献
955.
BLIMP-1:B细胞分化为浆细胞的开关? 总被引:1,自引:0,他引:1
浆细胞是B细胞来源的终末分化细胞,主要参与体液免疫.成熟B细胞在初次和再次遇到抗原时,可通过一系列机制,分化为可分泌抗体的浆细胞.这一过程主要受一些转录因子的调控,目前已发现有七种参与其中,即BCL-6、BLIMP-1、IRF-4、MITF、MTA3、PAX5和XBP-1,近期研究表明,B-lymphocyte-induced maturation pro-tein 1(BLIMP-1)在正常浆细胞上表达,且其表达增加可促进向浆细胞分化,而BLIMP-1缺陷小鼠则出现浆细胞成熟障碍;同时,这一转录因子还是B-1细胞分泌正常免疫球蛋白所必需,虽然并不参与B-1细胞自我更新,这些都提示BLIMP-1可能为B细胞分化为浆细胞的开关,在B细胞(B-1、B-2细胞)向浆细胞分化的过程中扮演主导角色. 相似文献
956.
957.
拟南芥LFR原核重组蛋白纯化和多克隆抗体制备 总被引:1,自引:0,他引:1
拟南芥中有一类含ARM结构域的蛋白质,研究表明它们中的一些在植物的生长发育和激素应答等方面发挥着重要的作用.在拟南芥突变体筛选中,获得了一个推测编码蛋白含ARM重复序列的新基因突变体lfr(leaf and flower related mumnt),它在叶子和花的发育过程中表现出较明显的表型.为进一步研究该基因编码蛋白的生物学功能及其分子作用机制,构建了pGEX-2TGST:LFR融合蛋白重组表达载体,将重组质粒转化到工程菌中诱导表达菌体蛋白,经SDS.聚内烯酰胺凝胶电泳检测,结果表明,融合重组蛋白成功获得了高效表达,分子质量在77 ku左右.重组蛋白经谷胱甘肽S.转移酶(GST)标签蛋白亲和层析法纯化,SDS-PAGE制备胶割胶富集,电洗脱法纯化后得到纯度较高的抗原.经对新西兰兔进行5次免疫,获得了多克隆抗血清.采用免疫吸附方法对抗血清进行了纯化,结果得到只识别LFR重组蛋白的抗血清.进一步提取拟南芥野生型及突变体的核蛋白,经蛋白质印迹检测,结果显示,在分子质量50ku左右处出现特异的蛋白质条带,证明所制备的抗血清可以与拟南芥LFR蛋白特异性结合. 相似文献
958.
为了探索通过血液系统利用重组腺病毒载体的方法,以中国猕猴为动物模型,以复制缺陷型人5型腺病毒(human adenovirus serotype 5,HAd5)为载体携带报告基因在体外直接感染外周血单个核细胞(peripheral bloodmononuclear cells,PBMC).首先对HAd5在体外感染PBMC的条件进行优化,证实离心力可提高HAd5的感染效率;细胞分群结果表明HAd5特异感染PBMC中的CD14 单核细胞,仅感染小部分自然杀伤细胞,但几乎不感染T淋巴细胞和B淋巴细胞.首次发现:猕猴体内预先存在的抗HAd5中和抗体滴度越高,其单核细胞在体外对HAd5的易感性越强.这种现象将拓宽基于腺病毒载体的基因治疗和疫苗的临床应用范围,尤其是对预先存在腺病毒中和抗体的人群更具意义,为探索更方便有效的基因治疗和疫苗研究带来新的思考. 相似文献
959.
960.
用纯化的鸡抗禽流感病毒(AIV)IgG作免疫原,通过单克隆抗体技术制备出1株分泌针对鸡抗AIV和兔抗AIV共有独特型抗体的杂交瘤细胞。竞争抑制试验、特异性检验和诱导产生血凝抑制抗体的功能实验证明,此抗体具有AIV血凝素分子的内影象。 相似文献