黄芩愈伤组织诱导条件的研究

为寻求诱导黄芩愈伤组织的最佳培养条件和激素配比,以黄芩的子叶、真叶和下胚轴为外植体,利用不同激素组合的MS培养基分别在黑暗和光照条件下诱导愈伤组织。结果表明：①在黑暗条件下各激素处理的愈伤组织诱导率和愈伤组织增重均高于光照条件下,而褐化率低于各处理,并且诱导出的愈伤组织较光照下松散,适合于细胞培养;②M6培养基其褐化率为0,诱导率高达100％,愈伤组织增重2．22g,明显优于其它激素配比,是黄芩愈伤组织诱导的最佳激素配比;③各种激素配比处理下,黄芩真叶愈伤组织的愈伤组织增重明显高于子叶和下胚轴。而褐化率却明显低于它们,因此真叶是黄芩诱导愈伤组织的最佳外植体。     

产黄芩苷内生真菌的筛选与鉴定

从药用植物黄芩根、茎、叶和花中分离得到17株内生真菌,其发酵液对10种指示菌进行抑菌活性测定,并通过薄层色谱(TLC)和高效液相色谱(HPLC)对所分离到的内生真菌代谢产物进行分析。结果显示,所分离到的内生真菌中12株至少对一种指示菌有抑菌活性,其中3株(G2、J4和J5)具有较广的抑菌作用。从黄芩茎和花中分离得到的2株内生真菌J1、H3可以在人工培养基中产生黄芩活性成分——黄芩苷,结合菌落形态特征、显微观察及ITS序列分析,初步鉴定这2株菌株均属于青霉菌属。     

黄芩苷镧(Ⅲ)、钇(Ⅲ)配合物的合成及生物活性研究

改进以往反应条件,合成了黄芩苷镧(Ⅲ)、黄芩苷钇(Ⅲ)配合物,利用IR、UV、LC-MS和金属元素含量测定对配合物进行了表征。采用MTT法分别考察了两种新化合物的抑菌活性(金黄色葡萄球菌、大肠杆菌、枯草芽孢杆菌、沙门氏菌、白色念珠菌)和抗肿瘤活性(A549、HepG2),采用灌胃法考察化合物对小鼠的急性毒性。结果表明:黄芩苷在与金属配合后,结构表征发生了一定的变化,配合物无金属离子毒性反应,并且其抑菌、抗肿瘤作用均显示出黄芩苷镧>黄芩苷钇>黄芩苷。     

滇黄芩毛状根的诱导及其黄芩苷含量测定

本文利用发根农杆菌A grobacterizum rhizogenes1.2556感染滇黄芩再生苗的茎段和叶片,建立了毛状根培养及其植株再生体系。毛状根可直接从受伤的茎、叶外植体表面产生,在无外源激素的MS固体和液体培养基上自主生长,表现出典型的发根特征。毛状根茎段的诱导率较叶片高,最高可达到14.44%;经rolB基因PCR分析和甘露碱纸电泳检测,证明Ri质粒T-DNA已整合到滇黄芩基因组中并表达;毛状根在附加6-BA2mg/L和NAA0.2mg/L的MS固体培养基上直接诱导不定芽,并在MS培养基上生根,形成再生植株。获得的毛状根系经MS液体培养基培养30d后通过HPLC都能检测到黄芩苷,其中1个转化系黄芩苷含量为2.59%,是药材黄芩的0.20倍,而从3年单位时间黄芩苷生成量计算,毛状根是药材黄芩的7.18倍。本研究建立的毛状根培养体系,将对滇黄芩转基因技术的完善和利用毛状根生产黄芩苷的生物转化提供了实验基础。     

黄芩黄酮对硒性白内障晶状体抗氧化酶表达的影响

为探讨黄芩黄酮防治白内障的作用机理 ,采用半定量RT PCR方法比较正常组、白内障组和中药防治组大鼠晶状体中GSH Px、GR和Cu ZnSOD的mRNA水平 .白内障组GSH Px、GR和Cu ZnSOD的mRNA水平在 15d龄时显著高于正常 ,然后下降 ;在 2 7d和 31d龄 ,GR和Cu ZnSOD的mRNA水平下降至与正常无显著差异 ,GSH PxmRNA水平仍略高于正常 .中药防治组晶状体中 ,3种抗氧化酶的mRNA水平在各实验取样点无明显变化 ;其中 ,GR和Cu ZnSOD的mRNA水平一直与正常无显著差异 ,GSH PxmRNA水平略高于正常 .黄芩黄酮可能通过有效清除亚硒酸钠间接产生的活性氧来防止白内障的发生 ,并使亚硒酸钠对晶状体抗氧化酶表达的影响得以消除     

流感病毒神经氨酸酶的表达及其在药物筛选中的应用

A型流感病毒H5N1神经氨酸酶奥司他韦敏感型及耐药突变型基因经优化后,克隆于pcDNA4/TO 表达载体,并转染T-REx293 建立稳定细胞株,经四环素诱导能特异表达神经氨酸酶,其活性被特异性抑制剂奥司他韦所抑制。利用该稳定细胞株制备的神经氨酸酶,对3000多种天然产物和中药提取物进行了筛选,结果显示黄芩甙和黄芩素对奥司他韦敏感型神经氨酸酶和耐药型神经氨酸酶具有相似的抑制作用。该神经氨酸酶制备方法安全、简便、稳定,有利于建立神经氨酸酶抑制剂的高通量筛选方法。A型流感病毒H5N1神经氨酸酶奥司他韦敏感型及耐药突变型基因经优化后,克隆于pcDNA4/TO 表达载体,并转染T-REx293 建立稳定细胞株,经四环素诱导能特异表达神经氨酸酶,其活性被特异性抑制剂奥司他韦所抑制。利用该稳定细胞株制备的神经氨酸酶,对3000多种天然产物和中药提取物进行了筛选,结果显示黄芩甙和黄芩素对奥司他韦敏感型神经氨酸酶和耐药型神经氨酸酶具有相似的抑制作用。该神经氨酸酶制备方法安全、简便、稳定,有利于建立神经氨酸酶抑制剂的高通量筛选方法。     

黄芩素磺化物的合成、抗氧化活性及其与DNA作用的研究

以黄芩素为先导化合物利用磺化反应首次合成水溶性黄酮——黄芩素-8-磺酸钠,采用IR、1HNMR和元素分析对黄芩素-8-磺酸钠结构进行了表征;同时,对磺化反应条件进行了优化。通过DPPH(1,1-二苯基-2-苦肼基自由基)法对黄芩素-8-磺酸钠清除自由基作用进行了研究;以溴化乙錠(EB)为荧光探针,研究了黄芩素-8-磺酸钠与CT-DNA的相互作用。实验结果表明:最佳的磺化反应条件为:黄芩素与浓硫酸比例1∶8(g/mL),100℃时反应12h。黄芩素-8-磺酸钠具有强抗氧化活性,与DNA结合作用显著。     

不同花色黄芩中dfr基因的克隆及时空表达分析

二氢黄酮醇-4-还原酶(Dihydroflavonol-4-reductase,Dfr)是类黄酮生物合成途径中调控花青素和原花青素合成的关键酶.为探究dfr基因在同一生态环境下不同花色黄芩中的差异,以白色、紫红色和紫色3种花色的黄芩花瓣cDNA为模板,基于同源克隆和RACE技术从中克隆得到3个完整的dfr基因全长序列,...     

黄芩甙对痢疾杆菌R质粒体外消除作用的实验研究

以携带R质粒的痢疾杆菌F_(13)株为靶细菌,以黄芩甙作为R质粒消除剂,进行R质粒体外消除试验。实验组R质粒的消除率为0.3%,对照组中SDS的消除率为0.6%,吖啶橙的消除率0.42%。琼脂糖凝胶电泳结果显示,消除子都丢失了相应的质粒带。