禽病原性大肠杆菌1型菌毛的分离与鉴定

以旋涡混合法使禽病原性大肠杆菌分离株566、1794和TK3菌毛脱落,经硫酸铵沉淀、透析后进行蔗糖密度梯度离心,收集密度为110至115g/cm3的蛋白带,经SDSPAGE测定,3株菌菌毛蛋白的分子量分别在175、170和170kD;提纯菌毛保留了甘露糖敏感性凝集豚鼠红细胞的能力,证明它们为1型菌毛;从1794株提取的1型菌毛免疫BALB/C小鼠产生的高免血清在Western blot中与3个菌株的相应菌毛蛋白均呈阳性反应。上述结果表明,受检的3株禽病原性大肠杆菌均表达了1型菌毛,其分子量在175～170kD之间,3个菌株的1型菌毛间具有较强的抗原相关性。     

我国首次发现的HIV—1和HIV—2双重感染样品中病毒部分基因的序列特 …

上海市卫生检疫局送检了一例ＨＩＶ－１和ＨＩＶ－２抗体检测均呈阳性的双重感染样品,对其感染的ＨＩＶ前病毒的ｇａｇ和ｅｎｖ基因区进行了序列分析,首次阐明我国发现的ＨＩＶ双重感染样品的ＨＩＶ部分基因特征。从ＨＩＶ感染者淋巴细胞（ｐｅｒｉｐｈｅｒａｌ ｂｌｏｏｄ ｍｏｎｏｎｕｃｌｅａｒ ｃｅｌｌｓ,ＰＢＭＣ）中提取前病毒ＤＮＡ,分别使用ＨＩＶ－１和ＨＩＶ－２特异性引特用套式ＰＣＲ扩增ＨＩＶ－１和ＨＩＶ－２     

缺失宿主Vta1蛋白的MIT结构域对杆状病毒AcMNPV复制的影响

【目的】克隆草地贪夜蛾(Spodoptera frugiperda)Vta1基因,检测Vta1在苜蓿银纹夜蛾核多角体病毒(Autographa californica multiple nucleopolyhedrovirus,AcMNPV)复制中的作用。【方法】利用反转录-PCR与PCR方法筛选草地贪夜蛾Vta1基因及缺失Vta1N-端MIT结构域的突变体并构建其瞬时表达质粒,通过转染Sf9细胞检测表达;构建Vta1及其突变体的双分子荧光互补表达质粒,并通过瞬时转染检测其与Vps4及ESCRT-III亚基Vps46与Vps60的相互作用;共转染gp64与Vta1及其突变体瞬时表达质粒,检测瞬时表达Vta1突变体对AcMNPV出芽型病毒产量及病毒基因启动子指导报告基因表达的影响。【结果】获得了草地贪夜蛾Vta1基因。氨基酸序列相似性分析表明,昆虫、酵母与人类Vta1同源蛋白的相似性分别约为20%与50%。Western blotting分析表明GFP标签的Vta1及其突变体均能在瞬时转染的Sf9细胞中表达。双分子荧光互补分析发现,缺失第1个或第2个MIT结构域显著降低Vta1突变体与Vps4、Vps46或Vps60的相互作用。此外,瞬时表达Vta1突变体显著降低了AcMNPV感染性出芽型病毒的产量,但并未影响AcMNPVie1基因早期启动子和p6.9基因晚期启动子指导的LacZ和GUS报告基因的表达。【结论】Vta1可能参与杆状病毒AcMNPV子代病毒粒子的组装和/或出芽释放过程。     

紫花苜蓿赤霉素受体基因的克隆及表达分析

赤霉素受体(GID)是赤霉素信号转导途径的重要成员,直接影响着赤霉素对植物体效应的发挥。该研究利用同源克隆的方法,首次从紫花苜蓿中克隆得到1个赤霉素受体基因,命名为MsGID1b。序列分析发现,MsGID1b基因开放阅读框长度为1 053bp,编码350个氨基酸,推测其蛋白质分子量为39.839kD,是一个无信号肽和跨膜结构的亲水性蛋白。序列比对结果表明,MsGID1b基因与蒺藜苜蓿MtGID1b基因的核苷酸序列相似性为98%,氨基酸序列相似性为99%,且具有HSL家族典型的HGG和GXSXG保守结构域及GA、DELLA蛋白结合位点。荧光定量PCR分析表明,MsGID1b基因在紫花苜蓿各组织中的表达丰度依次为:根盛花初花茎叶荚果;经GA3、ABA、NaCl、PEG和黑暗诱导后该基因表达上调,尤其是在GA3诱导下,MsGID1b基因的表达量一直维持在较高水平,表明MsGID1b基因可能参与紫花苜蓿的抗逆调控。     

植物富含亮氨酸重复序列型类受体蛋白激酶的生物学功能

介绍了植物富含亮氨酸重复序列(leucine-rich repeat,LRR)型类受体蛋白激酶概念、最近发现的这类蛋白激酶的亚结构域特征;总结了目前已确定其功能的LRR型类受体蛋白激酶,并分别阐述了它们在参与植物抗逆性反应、发育调控及激素的信号转导等过程中的生物学功能;着重介绍和讨论了LRR型类受体蛋白激酶复合物之间及其与下游成分KAPP之间互作而产生信号传递的分子机理.最后展望了LRR型类受体蛋白激酶生物学功能、信号转导机制、以及应用于生产实践的研究前景.     

MRP1活性与其NBDs结构域构象变化的相关性

用专一性标记蛋白分子中半胱氨酸(Cys)的荧光探针MIANS标记MRP1(multidrug resistance protein)的实验结果表明, MIANS与MRP1中的2个Cys结合, 结合后不仅荧光强度增加, 而且发射波长蓝移, 表明所标记的位点处于相对疏水的环境. 荧光共振能量转移实验进一步表明, MIANS标记的Cys与MRP1核苷酸结合结构域(NBDs)很接近, 其中１分子MIANS标记在NBD1附近, 另一分子标记在NBD2附近. ATP, ADP以及化疗药物能阻止MIANS对MRP1的标记. 猝灭剂丙烯酰胺、Cs⁺和I^−对MIANS-MRP1荧光猝灭实验又表明, MIANS标记的Cys位点处于一个带正点电荷的区域. 同时, 巯基结合试剂MIANS和NEM对MRP1 ATP酶的活性具有明显的抑制, 而化疗药物却有明显的激活作用. 上述实验结果提示, 核苷酸和化疗药物都能引起MRP1的NBDs的构象变化, 核苷酸可直接与NBDs结合, 而化疗药物可能通过改变MRP1的跨膜结构域(TMDs)的构象进而影响NBDs的构象, 从而调控MRP1 ATP酶的活性并影响对化疗药物的转运. 结果对于深入揭示MRP1的ATP的结合和水解与其转运化疗药物之间的偶联提供了较直接的实验证据.     

鸡减蛋综合征病毒(EDSV)基因组右末端结构的分析

从中国发病鸡中分离的鸡减蛋综合征病毒（ＥｇｇＤｒｏｐＳｙｎｄｒｏｍＶｉｒｕｓ,ＥＤＳＶ）弱毒株（ＡＡ－２）,其基因组全长约为３３ｋｂ。用限制性内切酶ＨｉｎｄⅢ水解ＥＤＳＶ全基因组,构建了以ｐＢｌｕｅｓｃｒｉｐｔⅡ（ＫＳ＋）为载体的右末端片段的克隆（约４．２ｋｂ）,对其进行了序列测定和结构分析。该片段全长４１８３个碱基对（ｂｐ）,位于基因组右末端８７．３ｍ．ｕ．－１００ｍ．ｕ．。结果显示,该片段与哺乳动物腺病毒右末端Ｅ４区结构不同,与禽Ⅰ型腺病毒代表株ＣＥＬＯ右末端片段亦无同源性。本文为深入了解ＥＤＳＶ基因组结构特点,ＥＤＳＶ与其他腺病毒基因结构与功能的进化关系和ＥＤＳＶ载体的构建奠定了分子生物学基础     

C1—抑制物缺乏的分子生物学

C1－抑制物（C1－INH）是含478个氨基酸的单链糖蛋白,为补体经典激活途径主要调节因子,C1－INH与靶酶相互作用时,反应中心关键的P1和P11位点为Arg^444-Thr445,C1－INH遗传性和获得性缺乏可引起血管神经性水肿,其分子发病机制各不相同,其它多种疾病包括系统性红班狼疮（SLE）,遗传性C4缺乏症等也与C1－INH缺乏或功能障碍有关,IFN－γ,TNF＜L-6,M-CSF,糖皮质激素有增强C1－INH基因表达的作用。     

中华蜜蜂mrjp1 cDNA的克隆及其序列分析

构建中华蜜蜂(Apis cerana cerana)8日龄工蜂头部cDNA文库,利用中蜂基因组的mrjp3部分基因片段作为杂交探针,采用DIG标记筛选cDNA文库,获得mrjps阳性克隆120个;对阳性克隆进行PCR扩增和测序,通过NCBI的BLAST序列比对,获得12个与印度蜂(Apis cerana india)、西方蜜蜂(Apis mellifera L.)mrjp1基因同源的中蜂mtjp1 cDNA片段,并进一步对中华蜜蜂mrjp1的cDNA全序列进行测定和分析。序列比对分析表明,东方蜜蜂(Apis cerana)与西方蜜蜂mrjp1的cDNA序列相似性为93．78％,中华蜜蜂与印度蜂的相似性高达99．36％,这一结果从分子水平证实中华蜜蜂与印度蜂有较近的共同祖先,而东方蜜蜂与西方蜜蜂的亲缘关系较远。     

森林草莓SUN基因家族的鉴定及其对逆境的响应

SUN基因是调控植物生长发育的关键基因。本研究鉴定了二倍体森林草莓(Fragaria vesca)的SUN基因家族,并对各成员的理化性质、基因结构、系统进化以及基因表达进行了分析。结果表明,森林草莓有31个FvSUN基因,其编码蛋白可聚类为7个组,同一组内成员具有高度相似的基因结构与编码蛋白保守域;FvSUNs蛋白的亚细胞定位主要在细胞核中。共线性分析表明森林草莓FvSUNs基因家族主要通过染色体片段复制产生,拟南芥与森林草莓存在23对直系同源基因。利用森林草莓的转录组数据,对FvSUNs基因的组织表达特征进行分析,发现主要可归为3类：各组织均表达、组织中几乎不表达、组织特异性表达,并通过实时荧光定量PCR (quantitative real-time polymerase chain reaction, qRT-PCR)进一步验证结果。此外,还对森林草莓进行不同的逆境胁迫处理,qRT-PCR分析了31个FvSUNs基因的表达情况,发现大部分基因均在不同程度上受低温、高盐或干旱胁迫的诱导表达。这些研究结果为深入揭示草莓SUN基因的生物学功能及其分子机制奠定了基础。