遗传变异的又一来源：拷贝数变异

人们很早就发现DNA拷贝数变异与特定染色体重组和基因组异常相关这一现象,但最近才知道它与疾病的相关联系。我们对拷贝数变异的原理、最新研究方法,及其与复杂疾病的相关性研究等进展进行了综述;总结了拷贝数变异研究所存在的问题;对拷贝数变异未来的研究重点和需要解决的问题进行了展望。     

比较NRP-1反义寡核苷酸与VEGFR-2反义寡核苷酸对人胃癌SGC7901细胞增殖和凋亡的影响

目的:研究比较神经纤毛蛋白1(NRP-1)反义寡核苷酸(ASODN)与血管内皮生长因子受体2(VEGFR-2)反义寡核苷酸(ASODN)对人胃癌SGC7901细胞增殖活性及凋亡水平的影响。 方法:分别及同时将不同浓度经硫代磷酸化修饰的NRP-1 ASODN 和 VEGFR-2 ASODN 转染入人胃癌SGC7901细胞,逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测NRP-1基因和VEGFR-2 基因mRNA的转录水平;MTT比色法测量细胞的增殖活性;流式细胞仪测量细胞的凋亡水平。 结果:转染NRP-1 ASODN和VEGFR-2 ASODN后,人胃癌SGC7901细胞NRP-1基因和VEGFR-2 基因mRNA的转录水平均出现降低;NRP-1 ASODN和VEGFR-2 ASODN对SGC7901细胞有明显抑制增殖和促进凋亡的作用,且随着ASODN浓度升高而增强;分别转染时其作用无显著差别,联合转染时其作用明显增强。结论:NRP-1 ASODN和VEGFR-2 ASODN可抑制人胃癌SGC7901细胞 NRP-1基因和VEGFR-2 基因mRNA的转录水平及细胞增殖活性,促进细胞凋亡;与分别转染相比,两者联合转染作用明显增强。     

蛋白质组学的研究方法

近年来,蛋白质组学的研究在生物医学领域正逐步深入,研究方法也正逐步完善。本文综述了蛋白质组学的几种研究方法,指出了各种方法的优点及局限性,并且对蛋白质组学的研究方法和前景进行了展望。     

酵母基因中转录正调控内含子序列特征的统计分析

大量实验研究显示,真核基因的许多内含子具有调控转录的功能,但是对此问题尚缺乏全面的研究.观察一些酵母基因的转录频率与基因的内含子序列后,发现一个值得注意的现象：转录频率高的基因内含子序列一般都比较长,而转录频率低的基因内含子一般都比较短.这提示高效转录基因的较长内含子中可能含有某些增强基因转录的特征性结构.于是选取两组酵母基因的内含子进行详细研究,第一组的基因具有较高的转录频率（>30）,第二组的基因转录频率较低（≤10）.对寡核苷酸（主要是四核苷酸、五核苷酸）的出现频率进行统计比较分析,探测到一批寡核苷酸,它们在第一组内含子中出现的频率显著高于在第二组内含子中出现的频率,同时也显著高于与第一组内含子相邻的外显子中的出现频率.其中一些寡核苷酸与实验研究得到的转录调控元件相同.从这批寡核苷酸在内含子和外显子序列中的分布看,高效转录基因内含子的序列结构确实有利于基因的转录.     

人类肿瘤坏死因子相关凋亡配体活性部位基因在毕赤酵母中的表达

探讨了人类肿瘤坏死因子相关凋亡配体 (TRAIL)生物活性部分在巴斯德毕赤酵母 (Pichiapastoris)中的分泌表达。由于TRAIL活性部位区第 149 15 0氨基酸含有一个Kex2位点 ,根据Pichiapastoris分泌表达的特点 ,对 149位氨基酸进行了改造 ,使其编码的氨基酸由Arg突变为Lys。这样使TRAIL在分泌的过程中不被Kex2切割 ,保证了片段的完整。序列分析正确后 ,将编码TRAIL的可溶区的基因片段插入到酵母表达载体pPIC9K中 ,使之位于α 因子信号肽下游 ,且与之同框 ,构建分泌型表达载体pPIC9K TRAIL。采用原生质体法将重组质粒转化Pichiapastoris菌株GS115 ,获基因工程菌株Pichiapastoris(pPIC9K TRAIL)。将工程菌用甲醇诱导培养 3～ 4d ,对摇瓶发酵的培养上清进行SDS PAGE、Westernblot分析和体外生物活性检测 ,结果发现发酵液中分子量约为 19kD和 38kD的蛋白质能被TRAIL多克隆抗体特异性识别 ,且具有在体外诱导肿瘤细胞凋亡的活性。通过薄层扫描分析显示目的蛋白最高可占可溶性总蛋白的 36 %。上述实验结果表明 ,在Pichiapastoris中表达的TRAIL能以寡聚体的形式存在并且具有生物学活性。     

蛋白质芯片及其应用

人类基因组计划的实施和大量珍贵的功能基因组数据的获得,使得蛋白质的研究显得越发重要。蛋白质芯片技术的出现为我们提供了一种较传统的凝胶电泳技术更为方便和快速的研究方法。     

高密度培养大肠杆菌YK537／pSBHL—11生产重组人细胞白介素—3

在Ｂ．Ｂｒａｕ ＥＳ－１０型１５Ｌ和ＮＢＳ ＤｉｏＦｌｏ３０００型５Ｌ发酵罐中,利用补料分批培养技术高工表达培养含重组质粒ｐＳＢＨＬ－１１的大肠杆菌ＹＫ５３７,生产重组人白细胞介素－３（ＩＬ－３）,发现在发酵过程中,限制性流加甘油,控制溶解氧在３０％－４０％左右,３０℃生长,１１ｈ,４２℃诱导培养４ｈ,能将发酵液中最终菌体密度从ＯＤ１６６００提高到ＯＤ５３６００,并且保持了白细胞介素－３的表达量。     

三氯杀螨醇浓度和食物密度对萼花臂尾轮虫种群增长的影响

采用群体累积培养方法,研究了不同浓度(0.03、0.3、3.30和300 μg·L-1)的三氯杀螨醇和不同食物密度(3.0和5.0×106cells·ml-1)的斜生栅藻(Scenedesmus obliquus)对萼花臂尾轮虫(Brachionus calyciflorus)种群增长影响.结果表明:藻类食物密度、三氯杀螨醇浓度以及二者的交互作用对轮虫种群增长率均有显著影响(P＜0.05);藻类食物密度和三氯杀螨醇浓度对轮虫最大种群密度也有显著影响(P＜0.01),但二者的交互作用对其却无显著作用(P＞0.05);与空白对照组相比,在3.0×106cells·ml-1藻密度下.0.03-30μg·L-1的三氯杀螨醇显著提高了轮虫种群增长率,3μg·L-1的三氯杀螨醇显著降低了轮虫的最大种群密度,而300μg·L-1的三氯杀螨醇则极显著提高了轮虫的最大种群密度;在5.0×106cells·ml-1藻密度下,三氯杀螨醇对萼花臂尾轮虫种群增长率和最大种群密度均无显著影响;高密度的藻类食物降低了0.03-30μg·L-1和300μg·L-1的三氯杀螨醇分别对萼花臂尾轮虫种群增长率和最大种群密度所具有的促进作用,以及3μg·L-1的三氯杀螨醇对轮虫最大种群密度所具有的抑制作用.     

毕赤氏酵母植酸酶工程菌高密度培养条件的研究

研究了毕赤氏酵母植酸酶工程菌高密度生长的培养条件 ,包括不同碳源、酵母粉、(NH4 ) 2 SO4 、KH2 PO4 等不同用量对菌体生长的影响。结果是甘油 4 %、蛋白陈 2 %、酵母粉 0 5%、(NH4 ) 2 SO4 0 .8%、K2 HPO4 0 1%、KH2 PO4 0 6 %。在此基础上 ,对温度、起始pH、接种量等影响该工程菌菌体生长的因素也作了初步研究。