反相高压液相色谱折叠重组人白细胞介素-2

重组人白细胞介素－２（ｒｈＩＬ－２）基因表达产物在大肠杆菌中以不溶性包涵体形式存在,经过菌体发酵和收集、超声破菌、包涵体抽提、稀释透析初步复性、反相高压液相色谱纯化,终产物纯度大于９９％。反相高压液相色谱不仅可以纯化ｒｈＩＬ－２,且使产物的总活性提高７．９－９倍,比活性提高１４￣１８倍,达到１．５×１０＾７ｕ／ｍｇ蛋白质,蛋白得率为５０％￣５６％。结果表明,反相高压液相色谱具有纯化和显提高ｒｈＨ     

反相高压液相色谱折叠重组人白细胞介素-2

重组人白细胞介素-2(rhIL-2)基因表达产物在大肠杆菌中以不溶性包涵体形式存在,经过菌体发酵和收集、超声破菌、包涵体抽提、稀释透析初步复性、反相高压液相色谱纯化,终产物纯度大于99％。反相高压液相色谱不仅可以纯化rhIL-2,且使产物的总活性提高7．9～9倍,比活性提高14～18倍,达到1.5×10⁷u／mg蛋白质,蛋白得率为50％～56％。结果表明．反相高压液相色谱具有纯化和显著提高rhIL-2折叠效率的双重功效,为非SDS变复性法生产rhIL-2提供了简便有效的方法。     

ET—1,NO和缺氧对肺动脉平滑肌细胞钙内流及胶原合成的影响

肺血管平滑肌细胞是肺血管收缩反应的主要执行者,也是肺血管结构重建的重要参与者。本研究观察了内皮素－１（ＥＴ－１）一氧化氮（ＮＯ）和缺氧对培养的新生小牛肺动脉平滑肌细胞（ＰＡＳＭＣ）钙内流以及胶原合成的影响,结果表明ＥＴ－１和缺氧可促进ＰＡＳＭＣ的钙内流;ＮＯ供应剂硝普钠（ＳＭＰ）可抑制ＥＴ－１诱导的钙内流,其作用呈剂量依赖性,ＳＮＰ还可以剂量依赖地抑制了ＰＡＳＭＣ的胶原合成,而缺氧可促进ＰＡＳＭＣ     

低O_2高CO_2性肺动脉高压大鼠血浆内皮素和肺细小动脉超微结构的研究

为探讨低Ｏ２高ＣＯ２性肺动脉高压形成的机制,对血浆内皮素（ＥＴ）和肺细小动脉超微结构改变进行研究。应用低Ｏ２高ＣＯ２性肺动脉高压大鼠模型,观察了不同ＥＴ浓度时肺细小动脉超微结构改变。实验组①ＥＴ浓度明显升高,②肺细小动脉内皮细胞（ＥＣ）水肿,内质网扩张,内皮下水肿明显,内膜增厚;③肺细小动脉中膜平滑肌细胞（ＳＭＣ）竖立,微丝束增多,ＳＭＣ数目增多,细胞面积增大;④外膜纤维母细胞（ＦＩＢ）增生,胶原纤维密集。结果表明低Ｏ２高ＣＯ２引起的血浆ＥＴ增高,可致肺动脉内膜增厚、平滑肌细胞和纤维母细胞增生,可能是肺动脉高压形成的重要机制之一。     

高压液相色谱法分析常见单糖,双糖

本文介绍用高压液相色谱法分析常见的单糖、双糖。选用氨基色谱柱及离子交换色谱柱,用示差折光检测器进行检测,使单糖得到较好的分离,测定方法快速、简便。     

高压脉冲电场辅助酶法提取鹿托盘胶原蛋白北大核心CSCD

为了提高鹿托盘中胶原蛋白的提取率,采用高压脉冲电场技术辅助胃蛋白酶的方法提取胶原蛋白。以胶原蛋白提取率为指标,通过对胃蛋白酶添加量、脉冲数和电场强度进行单因素考察,采用正交实验对胶原蛋白提取条件进行优化。优选出鹿托盘胶原蛋白的最佳提取条件为:胃蛋白酶添加量2%、脉冲数8、电场强度20k V.cm-1,在该条件下鹿托盘胶原蛋白的提取率可达到(73.27±0.73)%。与普通酶法相比,高压脉冲电场辅助提取胶原蛋白的得率比普通酶法提高了10.34%,且处理时间较短。聚丙烯酰氨凝胶电泳结果表明所提取的胶原蛋白由α1、α2和β-亚基组成,结构特征表明胶原蛋白具有完整的螺旋结构和Ⅰ型胶原蛋白的特性。该研究可为高压脉冲电场用于胶原蛋白的提取提供理论参考。     

内质网应激在大鼠低氧高二氧化碳性肺动脉高压中的作用

目的：观察低氧高二氧化碳性肺动脉高压大鼠的肺血管重塑并探讨内质网应激（ERS）在肺动脉高压中的作用。方法：将40只SD大鼠随机分为四组：常氧对照组（N）、低氧高二氧化碳组（HH）、ERS通路抑制剂4-苯基丁酸（4-phenylbutyric acid）组（4-PBA）、ERS通路激动剂衣霉素（tunicamycin）组（TM）,n=10。测量各组大鼠的肺动脉平均压（mPAP）、颈动脉平均压以及右心室肥大指数,免疫荧光α-SMA标记法鉴定各组肺中小动脉平滑肌细胞,电镜观察肺组织及肺中小动脉形态学变化,原位末端标记法（TUNEL）检测各组肺动脉平滑肌细胞的凋亡指数,采用RT-PCR和Western blot分别检测各组大鼠葡萄糖调节蛋白78（GRP78）、C/EBP同源蛋白（CHOP）、c-Jun氨基末端激酶（JNK）、天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶-12（caspase-12）mRNA及蛋白质表达。结果：①与N组相比,HH组、4-PBA组、TM组mPAP、右心室游离壁重量/左心室加心室间隔重量[RV/（LV+S）]、肺动脉管壁面积/管总面积（WA/TA）比值增加（P<0.0 1）,肺动脉管腔面积/管总面积（LA/TA）比值减小（P<0.01）,细胞凋亡指数降低（P <0.05或P<0.01）。ERS相关蛋白质及mRNA的表达量升高,各差异均有统计学意义。②与HH组相比,4-PB A组mPAP和[RV/（LV+S）]、WA/TA值减小（P<0.01）,LA/TA值和细胞凋亡指数上升（P<0.05或P<0.01）,ERS相关蛋白质和mRNA的表达量均下调（P<0.05或P<0.01）;③与HH组相比,TM组mPAP、[RV/（LV+S）]、WA/TA值升高（P<0.05或P<0.01）;肺动脉中膜层增厚,LA/TA值和细胞凋亡指数降低（P<0.01）。ERS相关蛋白质及mRNA的表达量均升高,除GRP78蛋白质表达量无明显变化外,其余各差异均有统计学意义。结论：低氧高二氧化碳诱导的肺动脉高压大鼠肺血管重塑可能与肺动脉平滑肌细胞增殖过度及凋亡过少有关;ERS相关因子（JNK、caspase-12和CHOP）参与低氧高二氧化碳性肺动脉高压的调控。     

TGF-beta1 通过PI3K及ERK信号通路调节肺动脉高压过程中IGFBPs蛋白表达

目的：探讨大鼠肺动脉高压(PAH)过程中TGF-beta1对胰岛素样生长因子结合蛋白（IGFBP）表达调节是否依赖于PI3K及ERK 信号通路。方法：取健康成年SD 大鼠26 只,随机分成2 组：PAH组,腹腔注射1%的野百合碱,剂量为60 mg/kg;对照(C)组腹腔 注射生理盐水。于4 周后超声检测肺动脉平均压力,取肺组织做HE 染色,应用NIS-Element 系统测量中膜厚度。原代培养肺动脉 平滑肌（PASMC）细胞,分别加入TGF-beta1 及TGF-beta1 中和抗体后,Western-blot 检测IGFBP3,IGFBP5,Smad2/Smad3 表达。加入 ERK特异性抑制剂PD98059 或PI3K 抑制剂LY294002,检测IGFBP3,IGFBP5 表达。结果：野百合碱处理4 周后,肺动脉高压组 的平均肺动脉压力及右室/(左室+室间隔)比值显著高于对照组。TGF-茁1 可显著升高IGFBP3,IGFBP5 及p-Smad3 的表达（P<0. 05）,而抑制TGF-beta1 则可显著降低三种蛋白的表达（P<0.05）。加入LY294002 抑制PI3K ERK 后,IGFBP3 和p-Smad2 两种蛋白的 表达量显著下调（P<0.05）。加入PD98059 抑制ERK 后可显著降低IGFBP3 及IGFBP5 的表达水平（P<0.05）。结论：PAH 中 TGF-茁1 升高可通过活化Smad2/Smad3 上调IGFBP3和IGFBP5 的表达。TGF-beta1 促进IGFBP3,IGFBP5表达的作用依赖于PI3K 及ERK 信号通路。     

房水平单向活瓣式补片对老年先天性心脏病合并重度肺动脉高压 的临床效果分析

目的:探究房水平单向活瓣式补片对老年先天性心脏病伴重度肺动脉高压患者的作用疗效。方法:选取我院心血管科收治的先天性心脏病伴重度肺动脉高压患者80例,随机分为对照组和实验组。对照组40例,予以常规基础药物治疗(波生坦);实验组,在基础药物治疗两个疗程后,采用房水平单向活瓣式补片进行手术治疗。比较两组患者治疗前后的肺动脉压(PAP)、体动脉压(SAP)、肺动脉压/体动脉压(PAP/SAP)、动脉血氧分压(Pa O2)、二氧化碳分压(Pa CO2)及吸氧浓度、右室收缩末期内径变化情况。结果:治疗后,与对照组比较,实验组肺动脉压下降幅度较大(P0.05);与治疗前比较,实验组肺动脉压与体动脉压的比值显著下降,且优于对照组(P0.05);治疗后,实验组动脉血氧分压、二氧化碳分压以及吸氧浓度显著优于对照组(P0.05);治疗后,实验组患者右室收缩末期内径显著小于对照组(P0.05);随访结果:实验组死亡1例、术后活瓣坏死2例、其余37例病情均转好且无复发情况;对照组死亡4例、出现各项并发症16例、剩余20例病情转好。结论:房水平单向活瓣式补片法可有效改善患者的肺动脉压、体动脉压、动脉血氧分压、二氧化碳分压及吸氧浓度、右室收缩末期内径及6 min步行距离,对老年先天性心脏病伴重度肺动脉高压患者疗效显著。     

高压氧与术前前列地尔联合治疗先天性心脏病伴重度肺动脉高压的临床效果分析

目的:观察术前前列地尔联合高压氧(hyperbaricoxygen,HBO)治疗对先天性心脏病伴发重度肺动脉高压患者的临床疗效。方法:按随机数字表法将49例室间隔缺损伴发重度肺动脉高压的患者分为对照组(n=25,常规治疗)和观察组(n=24,常规治疗+HBO辅助治疗),常规治疗以多巴胺[3-5μg/(kg·min)]、呋塞米片(5-20 mg/次,3/日)、前列地尔[2~5 ng/(kg·min)]等药物治疗以及常压间断吸氧(每次0.5 h,3次/日)治疗为主。比较2组患者入院时(T1)、术前治疗15 d后(T2)和术后治疗10 d后(T3)三个时间点体肺血流动力学变化。结果:对照组及观察组患者的平均肺动脉压(m PAP)、肺循环阻力(PVR)和肺动脉压/主动脉压比值(Pp/Ps)经术前综合治疗15 d后分别下降为(57.08±9.44)/(53.16±11.61)mm Hg、(943.81±245.86)/(927.21±119.27)dyns/cm5和(0.70±0.17)/(0.68±0.13),经术后治疗10 d后进一步下降;两组动脉血氧饱和度(Sa O2)术前治疗15 d及术后治疗10 d后均较入院时高升,而平均体循环压(m SAP)和体循环阻力(SVR)经术前治疗15d后(T2)略有下降(P0.05),但在术后10 d(T3)恢复至入院时水平(T1)。与对照组相比,观察组m PAP和PVR值经术前治疗15 d后(T2)下降更显著,Sa O2上升也更为明显(P0.05)。结论:对于先天性心脏病伴发重度肺动脉高压的患者,术前给予前列地尔药物降压的同时辅以HBO治疗可有效降低肺动脉压,提高血氧饱和度,可为手术的实施和减少术后并发症提供有利条件。