shASPP2 H22稳转肝癌细胞系的构建及ASPP2敲低对H22移植瘤小鼠血管生成的影响

摘要 目的：构建小鼠shASPP2 H22稳转肝癌细胞系,观察ASPP2敲低对血管生成的影响。方法：针对小鼠ASPP2基因设计了3个不同的shRNA干扰序列（Y18421,Y18422,Y18423）及1个对照序列（GL427NC2）,采用双酶切（Age Ⅰ和EcoR Ⅰ）及质粒连接构建重组质粒,使用菌落PCR和测序比对进行鉴定;使用293T细胞将各重组质粒包装慢病毒并测定滴度;将 shASPP2和对照慢病毒质粒转染H22细胞,采用流式细胞术测定转染效率;采用qRT-PCR、Western Blot法观察shASPP2慢病毒对H22细胞ASPP2的干扰效果;采用CCK8法观察ASPP2敲低对H22细胞增殖的影响;采用Western Blot法观察ASPP2敲低对H22细胞及上清VEGF表达和分泌的影响;采用细胞注射法建立小鼠ASPP2敲低H22细胞皮下移植瘤模型,游标卡尺法观察肿瘤体积大小,采用活体激光共聚焦观察肿瘤血管生成情况,采用Western Blot法观察肿瘤组织VEGF的表达。结果：双酶切、菌落PCR和测序鉴定结果表示各重组质粒构建成功;各重组质粒经慢病毒包装后,测定显示Y18421、Y18422、Y18423和GL427NC2慢病毒质粒的滴度分别为3.40×10⁸ TU/mL、4.08×10⁸ TU/mL、5.49×10⁸ TU/mL和1.7×10⁹ TU/mL;Y18421、Y18422、Y18423及GL427NC2慢病毒质粒转染效率分别为：86.2 %、69.6 %、60.8 %和76.9 %。与GL427NC2 H22细胞相比,Y18421 H22细胞的ASPP2 mRNA及蛋白的表达明显降低（P<0.01,P<0.05）;Y18421细胞在培养24,48,72 h后增殖速率显著增加（P<0.0001,P<0.001,P<0.01）;Y18421细胞及上清的VEGF表达显著升高（P<0.001,P<0.01,P<0.05）。与GL427NC2 细胞移植瘤相比,Y18421细胞移植瘤体积明显增大（P<0.05）,总血管长度显著增加（P<0.05）,VEGF蛋白的表达明显上调（P<0.05）。结论：小鼠shASPP2 H22稳转肝癌细胞系构建成功,ASPP2敲低可能通过上调VEGF的表达促进小鼠H22细胞移植瘤血管生成。     

银纳米簇抗菌机理、活性及其应用的研究进展

银纳米簇是一类粒径介于银原子和银纳米颗粒之间,由几个到几十个银原子组成,核心尺寸小于2 nm的银纳米材料.近年来银纳米簇以其固有的广谱抑菌性、不致耐药性、良好的生物相容性、低剂量有效性等优势在抗菌应用领域受到了较高的关注.综述了银纳米簇的抗菌机理及抗菌活性的影响因素,探讨其细胞毒性,并对目前已有的抗菌应用进行总结,展望...     

星形胶质细胞铁代谢在帕金森病中的作用机制研究进展

脑铁累积及其诱导的氧化应激加剧了帕金森病(Parkinson's disease,PD)的发生发展.脑内星形胶质细胞存在区域异质性,PD中脑多巴胺能神经元死亡与星形胶质细胞之间存在相关性.该文概述了星形胶质细胞,黑质铁代谢,以及星形胶质细胞铁代谢相关分子铁调节蛋白、铁调素和铜蓝蛋白在PD发生发展中的作用,希望能为今后深...     

紫檀芪对小鼠缺血性脑损伤后脑水肿期神经细胞凋亡的影响

摘要 目的：探索紫檀芪（PTE）对小鼠缺血性脑损伤后脑水肿期神经细胞凋亡的影响。方法：将实验小鼠分为3组即假手术组（sham组）、脑缺血再灌注损伤组（IR组）和紫檀芪治疗组（PTE+IR组）,其中PTE于造模前连续5天每天腹腔给药（5 mg/kg）1次;然后于造模后3 d进行脑组织TTC染色并计算脑梗死体积比;于造模后2 h、12 h和1、2、4、6、8、10、12及14 d进行小鼠神经行为学评分;使用TUNEL试剂盒于造模后3、7和14 d检测缺血半暗带和海马的凋亡神经细胞。结果：PTE可减轻脑梗死体积、改善神经行为学评分以及抑制缺血半暗带和海马的神经细胞凋亡。结论：PTE在小鼠缺血性脑损伤后脑水肿期具有明确的神经保护作用,其机制与抑制细胞凋亡有关。     

血管生成素样蛋白4和Ⅱ型肺泡细胞表面抗原-6与急性呼吸窘迫综合征严重程度的关系及对预后的评估效能研究

摘要 目的：分析血管生成素样蛋白4(ANGPTL4)和Ⅱ型肺泡细胞表面抗原-6(KL-6)与急性呼吸窘迫综合征严重程度的关系及对预后的评估效能。方法：选择我院自2020年1月至2022年12月收治的120例急性呼吸窘迫综合征患者作为研究对象（观察组）,根据氧合指数（PaO₂/FiO₂）分为轻度组、中度组和重度组;另选120例非急性呼吸窘迫综合征患者作为对照组。检测所有患者血清ANGPTL4和KL-6的表达水平,分析血清ANGPTL4和KL-6与APACHE Ⅱ评分、PaO₂/FiO₂的关系,使用受试者工作特征曲线（ROC）下面积（AUC）评价血清ANGPTL4联合KL-6对急性呼吸窘迫综合征预后的评估效能。结果：对比对照组,观察组血清ANGPTL4、KL-6的表达水平均明显升高（P＜0.05）;血清ANGPTL4、KL-6的表达水平在轻度组、中度组和重度组中差异有统计学意义,且急性呼吸窘迫综合征越严重,升高越明显（P＜0.05）;经Pearson相关性分析,急性呼吸窘迫综合征患者血清ANGPTL4、KL-6的表达水平与PaO₂/FiO₂呈负相关,与APACHE Ⅱ评分呈正相关（P＜0.05）;经ROC曲线分析,血清ANGPTL4联合KL-6预测急性呼吸窘迫综合征患者入院28d内死亡的敏感度为90.14%、特异度为65.74%,AUC为0.900。结论：血清ANGPTL4、KL-6表达水平升高与急性呼吸窘迫综合征严重程度增大密切相关,两者联合在患者预后评估中具有一定价值,可作为判断病情及预后的辅助指标。     

Wnt通路中蓬松蛋白DNA甲基化对骨质疏松患者骨髓间充质干细胞成骨分化影响

摘要 目的：探讨蓬松蛋白（DVL）DNA甲基化对骨质疏松（OP）患者骨髓间充质干细胞（BMSCs）成骨分化及Wnt通路的影响。方法：分离、培养OP患者的BMSCs,成骨诱导培养BMSCs 0、7、14、21天,观察BMSCs细胞形态变化,检测碱性磷酸酶（ALP）染色及活性,检测茜素红染色及钙结节形成,荧光定量聚合酶链式反应（RT-PCR）及免疫印迹检测远端缺失同源盒5（Dlx5）、核心结合蛋白因子2（Runx2）、成骨细胞特异性转录因子（OSX）、Ⅰ型胶原蛋白（Colla Ⅰ）表达。检测DVL1、Wnt、糖原合成酶激酶3（GSK3）、β连环蛋白（β-catenin）表达及DVL DNA甲基化水平。在成骨诱导培养基中加入甲基转移酶抑制剂5-Aza,将BMSCs分为对照组（Control组）、甲基转移酶抑制剂组（5-Aza组）、甲基转移酶抑制剂+si-NC组（5-Aza+si-NC组）、甲基转移酶抑制剂+si-Wnt组（5-Aza+si-Wnt组）,依次进行ALP活性测定,茜素红染色及钙结节形成测定。RT-PCR检测Dlx5、Runx2、OSX、Colla 1水平,免疫印迹检测Dlx5、Runx2、OSX、Colla Ⅰ、DVL1、Wnt、GSK3、β-catenin的蛋白表达量,并检测DVL DNA甲基化水平。结果：成骨诱导后BMSCs具有强的ALP活性和矿化结节生成能力,且随着培养时间的增长,BMSCs细胞ALP活性和矿化结节生成能力增强,Dlx5、Runx2、OSX、Colla Ⅰ mRNA水平和Wnt、GSK3、β-catenin、DVL1表达升高,DVL DNA甲基化水平降低（P＜0.05）。5-Aza组较Control组ALP染色加深,活性增强,钙结节形成增多（P＜0.05）,Dlx5、Runx2、OSX、Colla Ⅰ mRNA及蛋白表达、Wnt、GSK3、β-catenin、DVL1表达升高,DVL DNA甲基化水平降低（P＜0.05）。5-Aza+si-Wnt组较5-Aza+si-NC组ALP染色变浅,活性降低,钙结节形成减少（P＜0.05）,Dlx5、Runx2、OSX、Colla Ⅰ mRNA及蛋白表达、Wnt、GSK3、β-catenin、DVL1表达降低,DVL DNA甲基化水平升高（P＜0.05）。结论：DVL DNA甲基化可以通过抑制Wnt/β-catenin信号通路抑制OP患者BMSCs成骨分化。     

CYFRA21-1、MMP-3及CEA 和细胞学联合检查对恶性胸腔积液的诊断价值分析

摘要 目的：探讨细胞角蛋白19片段（CYFRA21-1）、基质金属蛋白酶-3（MMP-3）及癌胚抗原（CEA） 和细胞学联合检查对恶性胸腔积液的诊断价值。方法：选择2020年1月至2023年1月我院接诊的100例胸腔积液患者进行研究,并根据病理结果分为实验组47例（病理检查结果恶性）,对照组53例（病理检查结果良性）,分析血清CYFRA21-1、MMP-3及CEA 和细胞学水平变化情况及其的诊断价值。结果：实验组患者血清血清CYFRA21-1、MMP-3及CEA水平显著高于对照组,差异显著（P＜0.05）;实验组患者CYFRA21-1、MMP-3及CEA 和细胞学阳性率均显著高于对照组,差异显著（P＜0.05）;CYFRA21-1诊断恶性胸腔积液的AUC为0.989,95%CI为0.977~1.000;MMP-3诊断恶性胸腔积液的AUC为0.979,95%CI为0.964~0.994;CEA 诊断恶性胸腔积液的AUC为0.982,95%CI为0.967~0.997;细胞学诊断恶性胸腔积液的AUC为0.823,95%CI为0.766~0.879,联合检测时AUC为0.995,95%CI为0.990~1.000,较单独检测曲线下面积比较显著差异;且特异度、准确度均较单独检测更高。结论：CYFRA21-1、MMP-3及CEA 和细胞学联合检查可有效提高诊断恶性胸腔积液的准确性,临床应用价值高。     

青海地区非小细胞肺癌患者PLR、NLR、SIRI、HSP90α预测EGFR基因突变的临床价值研究

摘要 目的：探讨青海地区非小细胞肺癌（NSCLC）患者血小板/淋巴细胞比值（PLR）、中性粒细胞/淋巴细胞比值（NLR）、系统性炎症反应指数（SIRI）、热休克蛋白90α（HSP90α）预测表皮生长因子受体（EGFR）基因突变的临床价值。方法：选择2020年3月至2023年3月青海大学附属医院收治的青海地区135例NSCLC且行EGFR基因检测的患者为研究对象,根据EGFR突变发生情况将患者分为EGFR突变型组（64例）与野生型组（71例）。检测PLR、NLR、SIRI、HSP90α。采用多因素Logistic回归分析EGFR基因突变的影响因素,受试者工作特征（ROC）曲线分析PLR、NLR、SIRI、HSP90α联合应用预测NSCLC患者发生EGFR基因突变的效能。结果：EGFR突变型组血浆HSP90α水平高于野生型组（P＜0.05）,PLR、NLR、SIRI低于野生型组（P＜0.05）。多因素Logistic回归分析显示,女性、腺癌、高HSP90α是NSCLC患者发生EGFR基因突变的危险因素（P＜0.05）,高PLR、NLR、SIRI是保护因素（P＜0.05）。PLR、NLR、SIRI、HSP90α预测NSCLC患者发生EGFR基因突变的曲线下面积为0.783、0.826、0.815、0.811,联合预测曲线下面积为0.932,高于单独预测。结论：青海地区EGFR基因突变的NSCLC患者PLR、NLR、SIRI降低,HSP90α增高。联合PLR、NLR、SIRI,HSP90α对EGFR基因突变的发生具有较高的预测价值。     

卡瑞利珠单抗联合化疗对晚期非鳞非小细胞肺癌患者免疫功能和NLR、CAR的影响

摘要 目的：探讨卡瑞利珠单抗联合化疗对晚期非鳞非小细胞肺癌（NSCLC）患者免疫功能和中性粒细胞与淋巴细胞比值（NLR）、C-反应蛋白与白蛋白比值（CAR）的影响。方法：采用回顾性分析,选取2020年1月到2022年12月期间安徽医科大学第一附属医院北区收治的晚期非鳞NSCLC患者100例,按照治疗方法将患者分为对照组（n=48）和观察组（n=52）。对照组接受注射用培美曲塞二钠联合顺铂注射液或注射用奈达铂化疗,观察组在对照组基础上接受卡瑞利珠单抗治疗。对比两组疗效、免疫功能、肿瘤标志物、NLR、CAR,同时观察两组治疗期间不良反应发生率。结果：与对照组相比,观察组的临床总有效率更高（P<0.05）。治疗4个周期后,与对照组相比,观察组癌胚抗原（CEA）、细胞角蛋白19片段抗原21-1（CYFRA21-1）、糖类抗原125（CA125）、NLR、CAR、CD8⁺更低,CD3⁺、CD4⁺、CD4⁺/CD8⁺更高（P<0.05）。两组不良反应发生率对比未见差异（P>0.05）。结论：晚期非鳞NSCLC患者在化疗的基础上结合卡瑞利珠单抗治疗,有助于控制疾病进展,提高临床疗效,降低肿瘤标志物水平,提高免疫功能,降低NLR、CAR。     

体液蛋白质组学的研究和应用

蛋白质组学是目前生命科学的研究热点之一.体液中的蛋白质是来源于与其密切接触组织或者细胞的分泌或渗漏,体液蛋白质组的变化能反映这些组织的生理或者病理改变,因此以寻找疾病相关生物标记为主要目标的比较蛋白质组学是蛋白质组学研究的核心内容之一.对近年来各种体液蛋白质组学的研究状况和应用及存在挑战作一综述.