小鼠beta防御素2原核表达与抗菌作用的初步研究

构建小鼠β-防御素-2( mouse beta defensins 2,mBD2)原核表达质粒pET32/mBD2,进行蛋白诱导表达及纯化,测定并纯化蛋白的抗菌活性.旨在为选一步研究其生物学特性奠定基础.通过腹腔注射脂多糖(lipopoly-saccharide,LPS)建立小鼠急性时相反应,采用RT-PCR方法扩增mBD2成熟肽,经KpnⅠ和XhoⅠ双酶切后插入相同酶切的pET-32a(+)载体,构建的重组质粒.将鉴定正确的重组质粒转化大肠杆菌表达菌株BL21 (DE3),采用异丙基-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导融合蛋白的表达.通过镍亲和层析获得纯化的融合蛋白.将融合蛋白采用肠激酶酶切、洗脱并用滤纸片法测定目的蛋白的抗菌活性.成功构建了原核表达质粒pET32a(+)/mBD2,并转化工程菌BL21( DE3).在0.25 mmol/L IPTG、30℃诱导4h条件下获得的融合蛋白.采用抑菌试验证实蛋白具有一定的抑制革兰阳性菌及阴性菌生长的作用.本研究成功构建了pET32/mBD2原核表达质粒,得到了在大肠杆菌中稳定表达mBD2蛋白.     

枝顶孢属真菌的抑菌活性及其代谢产物研究

用组织分离法从采集于广东鼎湖山的腐殖质中分离得到一株枝顶孢属真菌(Acremonium sp. SC0105),其固体发酵物的乙醇提取物对金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)有较强的抑制作用。经多种柱层析,从固体发酵物中分离得到5个化合物。通过光谱分析,分别鉴定为姜糖脂B (1)、姜糖脂C (2)、D-甘露醇(3)、酒渣碱(4)、枝顶孢素F(5)。其中酒渣碱是首次从枝顶孢属真菌中分离得到。     

米诺环素对泛耐药鲍曼不动杆菌的体外药敏分析

初步探讨米诺环素对泛耐药的鲍曼不动杆菌体外药敏。将各种标本分离获得的鲍曼不动杆菌,进行米诺环素药敏试验,并将检测结果进行统计和分析。2009年1月至2011年9月共检出鲍曼不动杆菌471株,其中米诺环素敏感的鲍曼不动杆菌2009年5株、2010年12株、2011年23株;亚胺培南、美洛培南敏感其他耐药的0株,亚胺培南、美洛培南、米诺环素敏感其他耐药的0株;米诺环素和头孢哌酮/舒巴坦同时敏感的236株,占总数的50.1%。米诺环素对泛耐药的鲍曼不动杆菌在体外有很好的抗菌活性,特别是联合头孢哌酮/舒巴坦治疗泛耐株鲍曼不动杆菌的感染是一个不错的选择。     

拟南芥野生型与隐花素突变体光调节的蛋白质鉴定与聚类分析

光是控制植物生长发育十分重要的环境因子之一.隐花素是植物的蓝光受体,在植 物中调节多种光形态建成,包括抑制下胚轴的伸长、子叶的伸展和调节植物的开花时间 等,但隐花素依赖蓝光调节光形态建成的分子机制尚不清楚.本文采用比较蛋白质组学 方法研究了在持续蓝光和红光下生长的拟南芥隐花素双突变体cry1cry2和野生型幼苗的全蛋白图谱.采用基质辅助激光解吸飞行时间串联质谱(MALDI-TOF-TOF)进行肽质谱指纹图谱分析.在cry1cry2和野生型中鉴定了71个差异蛋白点.这些差异蛋白质反应光的变化可以形成6类,结果表明,光调节隐花素是通过控制许多相关基因的表达而实现的,为进一步研究拟南芥隐花素的光反应机制提供一些有用的信息.研究表明,蛋白质表达图谱可用于研究各种突变体在不同光照条件下光应答之间的关系.     

不同细胞中STAT元件对刺激因子的特异性应答

以高通量药物筛选为目的,构建转录因子STAT元件驱动的萤火虫荧光素酶报告载体,并进行功能初步验证.人工合成含IRF－1和C－FOS基因上游调控序列中的2个STAT元件的DNA片段,克隆于pGL3－promoter报道质粒作为报道载体pSTAT luc|为检测其对不同有效因子刺激的反应性,该报道载体与荧光内参照载体pRL－SV40瞬时共转染不同细胞,在各种因子刺激条件下,双荧光素酶检测系统测定化学发光强度. 结果显示,pSTAT－luc的报道基因载体符合预期设计|该载体转染细胞实验显示,在STAT途径阳性的HeLa、A549和MCF 7细胞中,特异刺激因子INF－γ和抑瘤素OSM处理能够剂量依赖性的引起细胞内萤火虫荧光素酶的升高|在STAT途径阴性的PC－12细胞,上述因子不能引起荧光素酶的活性改变|以非该途径因子刺激时,HeLa、A549和MCF－7细胞未见发光水平的改变.结果表明,构建的报道系统具有阳性细胞反应特异性以及阳性刺激 反应特异性,能够用于建立靶向STAT信号通路的高通量药物筛选平台.     

对钙离子几种生理学效应的归纳与探讨

钙是人体重要的元素成分之一,在体内以2种形式存在:结合状态和离子状态(Ca2 )。但只有Ca2 才具有生理活性。体内Ca2 又分为细胞内Ca2 和细胞外Ca2 2种。研究表明,细胞内Ca2 浓度低,仅为细胞外的1(?)。体内的钙主要来源于食物,含钙的食物进入人体     

思茅松松香中的一个新二萜

从思茅松（Pinus kesiya var.langbianensis）的松香中分离得到一个新奇的松香烷二萜化合物——思茅松素,经现代波谱分析将其化学结构确定为13（14）-烯-8,12-环氧-1-松香酸（1）,同时分离得到5个已知化合物,分别为abiet-8,11,13-trien-15-hydroxy-18-oic acid（2）;pimarol（3a）;iso-pimarol（3b）;abiet-trien-18．oic acid（4）;15．hydroxy abietic acid（5）。     

在低氧预处理延迟心肌保护中钙网蛋白表达升高

本文分别在整体实验和细胞培养条件下研究钙网蛋白（calreticulin,CRT）在低氧预处理（hypoxic preconditioning,HPC）延迟心肌保护中的表达及其信号转导机制。（1）整体实验时Wistar大鼠随机分为3组：假手术（sham）组、仅结扎冠状动脉的心肌缺血（myocardial infarction,MI）组和HPC后再结扎冠状动脉的HPC＋MI组,分别于术后24h、14d和28d观察HPC对缺血后心功能和梗死区、危险区面积的影响;采用Western blot检测CRT表达以及p38丝裂素活化蛋白激酶（p38mitogenactivated protein kinase,p38MAPK）、应激活化蛋白激酶（stress-activated protein kinase,SAPK）活性。（2）原代培养Sprague—Dawley乳鼠心肌细胞,随机分为6组：低氧,复氧（hypoxia／reoxygenation,H／R）组、HPC组、HPC＋H,R组、p38MAPK抑制剂SB203580＋HPC＋H／R（SB＋HPC＋H／R）组、SAPK抑制剂SP600125＋HPC＋H瓜（SP＋HPC＋H／R）组和正常对照组;采用台盼蓝排斥实验、乳酸脱氢酶（1actate dehydrogenase,LDH）活性检测及流式细胞仪检测各组细胞损伤情况;采用Western blot检测CRT表达及p38MAPK、SAPK的磷酸化水平。主要结果如下：（1）整体动物实验结果表明,HPC改善缺血对心肌左室压力最大上升,下降速度（＋dp／dtmax）的抑制,限制心肌梗死面积;HPC后CRT表达呈动态变化：术后24h时HPC＋MI组CRT表达增高106％（P〈0．05vsMI组）,以危险区最为显著;14d至28d表达逐步降低。相关分析显示,术后24h时CRT表达量与心功能呈正相关（r=0．9867,P〈0．05）,与梗死面积呈负相关（r=-0．9709,P〈0．05）。（2）细胞培养实验结果表明,HPC可减轻H／R诱导的心肌细胞LDH漏出,增加心肌细胞存活率,降低细胞凋亡;单纯HPC可诱导CRT表达轻度增加（222％,P〈0．05vs对照组）,而损伤性H／R诱导CRT过表达（503％,P〈0．05vs对照组）,HPC可降低H／R诱导CRT表达升高的幅度;p38MAPK活性与HPC诱导的CRT表达呈正相关（r=0．9021,P〈0．05）,而SAPK活性与其呈负相关（r=-0．8211,P〈0．05）。由此得出结论：（1）整体实验中HPC可明显改善缺血后心脏的收缩与舒张功能,限制心肌梗死范围,促进危险区心肌恢复;心肌梗死早期,HPC诱导CRT表达上调,参与心肌保护;（2）细胞培养实验中HPC可诱导CRT适度表达,增强原代培养乳鼠心肌细胞对H／R损伤的抵抗力;p38MAPK可能介导HPC诱导的CRT表达,而SAPK激活可能不利于心肌保护。     

利用细胞松弛素B分离柑橘及金柑植物微核的研究

采用细胞松弛素B(CB)处理结合蔗糖梯度超速离心方法分离柑橘和金柑亚原生质体的结果表明,柑橘和金柑原生质体的直径为20～30μm,采用蔗糖梯度超速离心分离亚原生质体,其适宜离心力是1400000×g;4',6-二脒基-2-苯基吲哚(DAPI)的染色效果最好,细胞核和细胞质可明显区分;愈伤组织经CB处理36h后再分离亚原生质体,可显著提高微原生质体的产量,分离的微原生质体直径为1.8～3.5μm,产量达到2～3×104个·g-1(FW)。     

油菜素内酯促进农药在植物体内降解

浙江大学研究发现,一种植物激素油菜素内酯能促进农药在植物体内降解和代谢。油菜素内酯处理后,许多参与农药降解的基因表达和酶活性都得到提高,这些基因指导合成的蛋白酶能把农药逐渐转化为水溶性物质或低毒无毒物质,有的则被直接排出体外。