肺炎克雷伯菌荚膜糖蛋白ELISA检测方法的研究

以肺炎克雷伯菌荚膜糖蛋白为免疫原,获得了兔抗肺炎克雷伯菌荚膜糖蛋白抗血清,通过硫酸铵分级沉淀与吸附法相结合的方法对抗血清进行纯化,并在此基础上建立了肺炎克雷伯菌荚膜糖蛋白间接ELISA检测方法.该检测方法的检测灵敏度为0.031 mg/L,线性检测范围为2.5～30.0 mg/L,批内误差为1.04％～3.22％,批间误差为2.61％～8.35％.     

以gfp为报告基因的肺炎链球菌启动子诱捕文库的构建与分析

首先构建一个以gfp(green fluorescence protein)为报告基因的自杀质粒pEVP3-SDGFP,将肺炎链球菌基因组DNA的随机酶切片段(200bp～800 bp)克隆到该质粒gfp基因上游的多克隆位点,得到约58000个含有肺炎链球茵基因组DNA随机酶切片段的重组子,提取质粒即为质粒库,该库大约覆盖肺炎链球菌基因组全长的5倍,插入率达到90%以上,且有较强的随机性,质量较高.将该质粒库转化入肺炎链球菌TIGR4菌株,带有随机片段的报告质粒通过同源重组的方式将gfp基因融合于细菌染色体上该随机片段之后,利用质粒的抗生素抗性基因筛选出重组菌株,从而构建出相应的菌株库,共获得包含约500000个肺炎链球菌转化子的菌株库,经体内、外实验表明,其包含插入了S.pn体内、外表达基因片段的细菌,可以报告特定条件下的基因表达,并可通过流式细胞仪识别、分选.该文库的构建为进一步利用差异荧光诱导技术筛选肺炎链球菌体内诱导基因奠定了基础.     

肺炎克雷伯菌在儿科各病房的临床分布及耐药性分析

目的了解肺炎克雷伯菌在儿科普通病房、新生儿病房、小儿重症监护病房(PICU)的临床分布特点和耐药情况,为临床合理用药提供依据。方法对本院2011年1月1日至2015年12月31日儿科各病房采集到的标本进行分析,菌株鉴定采用法国生物梅里埃公司的VITEK 2COMPACT分析仪,药敏试验采用MIC法。结果本院儿科各病房共分离到487株肺炎克雷伯菌,主要来自痰液和鼻咽拭子;各病区中产ESBLs的肺炎克雷伯菌检出率在35.3%~42.7%之间。药敏结果显示,产ESBLs肺炎克雷伯菌对氨苄西林、头孢菌素类、氨曲南100%耐药,对碳青霉烯类、氨基糖甙类、喹诺酮类抗菌药物敏感;未产ESBLs菌株耐药率相对较低。结论加强肺炎克雷伯菌的分离鉴定及耐药性的测定,是临床合理应用抗生素的重要依据。     

麻杏石甘汤合玉屏风散对支原体肺炎患儿血清炎症因子、氧化应激及T淋巴细胞亚群的影响

目的:探讨麻杏石甘汤合玉屏风散对支原体肺炎患儿血清炎症因子、氧化应激及T淋巴细胞亚群的影响。方法:选取我院儿科门诊于2016年12月至2018年7月间收治的86例支原体肺炎患儿,按随机数字表法分为观察组(43例)和对照组(43例)。对照组采用常规治疗,观察组在对照组基础上联合使用麻杏石甘汤合玉屏风散治疗,两组均治疗14 d。比较两组患儿疗效及临床症状变化情况,检测并比较两组患儿血清炎症因子、氧化应激指标和T淋巴细胞亚群变化情况,观察两组患儿治疗过程中的不良反应发生情况。结果:观察组总有效率为93.02%(40/43),高于对照组的76.74%(33/43)(P<0.05)。观察组患儿体温恢复时间、啰音消失时间、咳嗽消失时间和X线检查恢复正常时间均明显短于对照组(P<0.05)。治疗14 d后,两组患儿血清白介素-2(IL-2)水平明显升高,而白介素-4(IL-4)、白介素-6(IL-6)和肿瘤坏死因子-α(TNF-α)水平明显降低(P<0.05);且与对照组比较,观察组患儿治疗14 d后的血清IL-2水平明显较高,而IL-4、IL-6和TNF-α水平明显较低(P<0.05)。与治疗前比较,治疗5 d后、治疗14 d后,两组患儿血浆丙二醛(MDA)降低,超氧化物歧化酶(SOD)水平升高(P<0.05);与对照组比较,观察组治疗5 d后的血浆MDA明显较低,而SOD水平明显较高(P<0.05)。治疗14 d后,两组患儿CD3⁺、CD4⁺、CD4⁺/CD8⁺明显升高,且观察组高于对照组,而两组患儿CD8⁺明显降低,且观察组低于对照组(P<0.05)。两组不良反应比较差异无统计学意义(P>0.05)。结论:麻杏石甘汤合玉屏风散治疗支原体肺炎疗效显著,能够缓解临床症状、炎症反应,减轻患儿氧化应激状态,并可提高患儿免疫功能。     

蛇类肺炎双球病的诊断及防治

肺炎双球病是肺炎双球菌 (现名肺炎链球菌 )引起的以败血性脓毒血症为特征的急性传染病 ,是蛇类养殖业中常见的一种病症 ,有逐渐上升的趋势。1　临床症状　　某养殖场饲养近 3 0 0条眼镜蛇 ,发病时 ,蛇张口呼吸 ,盘游不安 ,不思回洞 ,行动迟缓 ,流涎 ,体温达 3 8.7℃～ 42 .2℃ ,两天共死 2 6条 ,已用土霉素、红霉素、四环素治疗无效 ,用安乃近强行退热 ,停药后又回升。2　病理剖检　　肺严重气肿 ,出血或硬结 ,萎陷到发生肝变 ,局部化脓 ,肺与胸膜粘连 ,气管有血液粘液和纤维素渗出物 ,脾肿大 1 .5倍 ,有出血性梗塞 ,肝局部坏死 ,淋巴结肿…     

帕拉米韦氯化钠注射液对流感病毒A型肺炎患儿的成本-效益分析

目的:探讨帕拉米韦氯化钠注射液对流感病毒A型肺炎患儿的成本-效益。方法:选择我院2015年1月至2018年12月收治的96例流感病毒A型肺炎患儿,根据随机数字表法,将96例患儿分为A组及B组,每组48例,A组患儿给予磷酸奥司他韦颗粒,B组患儿给予帕拉米韦氯化钠注射液,对比两组患儿的治疗效果、临床症状消失时间、住院时间、用药成本、成本-效益,对比两组患儿治疗前及治疗后的血常规及肝肾功能,对比两组患儿的不良反应发生率。结果:B组患儿的治疗有效率明显较A组高(P<0.05)。观察组患儿的临床症状消失时间及住院时间明显较对照组低(P<0.05)。A组患儿的平均用药成本明显低于B组(P<0.05),A组的成本-效益较B组低。与治疗前相比,治疗后两组患儿的中性粒细胞总数明显升高,白细胞总数、淋巴细胞总数明显降低(P<0.05);而治疗前后,两组患儿的血常规指标对比无统计学意义(P>0.05)。治疗前后,两组患儿的肝肾功能对比均无统计学意义(P>0.05)。B组患儿的不良反应发生率较A组高,但组间对比无统计学意义(P>0.05)。结论:与磷酸奥司他韦相比,帕拉米韦氯化钠注射液对流感病毒A型肺炎患儿的疗效更佳,但其成本-效益较低,临床上可根据患儿实际情况选择用药。     

血液分离的肺炎克雷伯菌的患者疾病类型及耐药谱分析

目的 调查血液分离的肺炎克雷伯菌的耐药谱.方法 收集温州医学院附属第一医院2005年1月至2009年9月间血液分离的肺炎克雷伯菌,采用全自动微生物分析仪对肺炎克雷伯菌进行菌种鉴定和药敏试验,超广谱β-内酰胺酶的检测采用仪器法.舒普深和美洛培南的药敏试验采用K-B法.结果 80株分离自血液的肺炎克雷伯菌主要分离自患有肝胆疾病、血液系统疾病、呼吸系统疾病和神经系统疾病的患者,分别占20.0％、17.5％ 、15.0％和13.7％.80株肺炎克雷伯菌中,10株ESBLs阳性,阳性率为12.5％(10/80).除肺炎克雷伯菌对氨苄西林100％耐药外,对其他15种被测抗菌药物的耐药率全部低于20％,所有被测菌株对亚胺培南和美洛培南全部敏感,对其他9种抗菌药物的耐药率也低于10％.结论 血液分离的肺炎克雷伯菌主要来自患有肝胆疾病、血液系统疾病和神经系统疾病的患者.血液分离的肺炎克雷伯菌的ESBLs检出率非常低,且对常用抗菌药物的耐药率非常低.     

CTX-M-3型超广谱β-内酰胺酶的表达、纯化及多克隆抗体的制备

目的 将肺炎克雷伯菌所产CTX-M-3型超广谱β-内酰胺酶(extended-spectrum β-lactamase,ESBLs)进行表达、纯化及其多克隆抗体的制备.方法 将保存的重组质粒pET-28a(+)/CTX-M-3在大肠埃希菌BL21( DE3)中原核表达.IPTG诱导CTX-M-3融合蛋白表达,利用镍琼脂糖凝胶亲和柱层析纯化蛋白,用纯化的CTX-M-3型ESBLs酶蛋白免疫小鼠制备多克隆抗体.结果 可溶性检测表明表达产物以可溶性形式(上清中)和包涵体形式(沉淀中)两种形式存在.通过蛋白表达条件的优化实验,SDS-PAGE电泳结果显示18℃,0.8 mmol/L IPTG诱导24 h的CTX-M-3重组蛋白的可溶性表达最佳.SDS-PAGE电泳和Western-blot检测表明获得纯化的重组32 kD蛋白.免疫获得的CTX-M-3型ESBLs酶蛋白抗血清的效价为1∶32.结论 pET-28a(+)/CTX-M-3表达载体在大肠埃希菌BL21( DE3)中表达,用His亲和层析柱纯化可获得高纯度可溶性的重组蛋白,成功制备了效价较高的抗CTX-M-3型ESBLs酶蛋白多克隆抗体.     

耐青霉素肺炎链球菌研究进展

肺炎链球菌 (Streptococcus Pneumoniae,SP)是一种常见病原菌 ,可引起细菌性肺炎、脑膜炎、心内膜炎、中耳炎、鼻窦炎、败血症等。 196 7年澳大利亚的 Hansan和 Bullen首次报道了从 1例低丙种球蛋白血症的支气管扩张症患者痰液中分离出耐青霉素肺炎链球菌 (penicillin- resistantstreptococcus pneum oniae,PRSP) [1 ] ,1977年南非亦报道了耐青霉素的肺炎链球菌 [2 ] ,此后许多国家和地区有关于PRSP散在发病和流行的报道 ,引起人们重视。现就耐青霉肺炎链球菌的研究现状作一综述。1　耐青霉素肺炎链球菌的流行病学目前全世界几乎所有…     

运用酶切自连法分析鉴定肺炎链球菌体内诱导基因

肺炎链球菌是严重侵袭性感染和上呼吸道感染最重要的条件致病菌之一,分析鉴定体内诱导基因序列变得尤为重要。本研究利用酶切自连法成功从129个体内诱导表达的肺炎链球菌中获得13个融合重组自杀质粒,通过与肺炎链球菌株TIGR4基因组序列的同源性比对,共得到10个不同的体内诱导基因,其中8个是从血液中筛选出的,另2个为从肺组织中筛选出;通过分析得到18个开放阅读框,其中大部分为已知功能基因,参与细菌多种生命活动,有2个为未知功能基因,编码假想蛋白。可见,酶切自连法可有效用于筛选基因的分析鉴定。