革兰氏阴性菌脂多糖运输系统的构成及作用机制

革兰氏阴性菌包含有两层组分不同的膜结构——内膜和外膜,对大多数革兰氏阴性菌而言,脂多糖(lipopolysaccharides,LPS)是其外膜上最主要的脂质成分,锚定在外膜小叶(the outer leaflet of the OM)上,是革兰氏阴性菌固有免疫的重要组成部分。脂多糖运输系统(lipopolysaccharide transport system,Lpt)将胞内装配完整的LPS正确装配到外膜,使得与脂多糖相关的阻渗、有机溶剂耐受性、疏水性抗生素耐受性、膜通透性等功能得以实现。该运输系统的正确作用主要依赖7个不同的脂多糖运输蛋白(Lpt ABCDEFG)协同完成,整个系统贯穿细菌内膜至外膜,由内膜上ABC转运体复合物Lpt B2FG、胞质内转运协同蛋白Lpt A/C及被许多学者称作脂多糖运输的"命门"的外膜蛋白复合物Lpt DE共同构成。本文就革兰氏阴性菌脂多糖的具体结构功能进行简介,进而综述脂多糖运输系统的7个蛋白的构成和作用机制,以期为进一步研究该系统中每个蛋白的功能提供理论基础及参考。     

革兰氏阴性杆菌染色体β—内酰胺酶基因表达的调节…

几乎所有的革兰氏阴性杆菌染色体上都有β－内酰胺酶基因ａｍｐＣ,它通常表达水平很低,受ａｍｐＲ,ａｍｐＤ,ａｍｐＥ和ａｍｐＧ等多基因产物的调控,一些细菌有ａｍｐＲ,（如阴沟肠杆菌）,使ａｍｐＣ基因的表达成为可诱导。它经诱导或突变激活后可高水平表达,从而在此类菌的外质间隙中出现大量的β－内酰胺酶,酶再通过水解或捕获进入到外质间隙中的β－内酰胺类抗生素,从而引起耐药。     

桔小实蝇肽聚糖识别蛋白基因BdPGRP-SB1的克隆及功能鉴定

【目的】为探究肽聚糖识别蛋白(PGRP)基因BdPGRP-SB1在桔小实蝇Bactrocera dorsalis免疫中的作用。【方法】本研究利用PCR克隆桔小实蝇BdPGRP-SB1全长cDNA序列;利用生物信息学软件对该基因核苷酸序列及其编码的氨基酸序列特征进行分析。采用RT-qPCR分析BdPGRP-SB1在桔小实蝇不同发育阶段(卵、幼虫、蛹、成虫)及5日龄成虫不同组织(中肠、马氏管、后肠、脂肪体、卵巢和精巢)中的表达模式;对桔小实蝇5日龄雌成虫分别注射大肠杆菌Escherichia coli 0111:B4肽聚糖(PGN-EB)和金黄色葡萄球菌Staphylococcus aureus肽聚糖(PGN-SA)后检测BdPGRP-SB1表达水平变化。利用RNAi沉默BdPGRP-SB1的表达,测定大肠杆菌和金黄色葡萄球菌诱导后桔小实蝇雌成虫的死亡率及大肠杆菌诱导后抗菌肽(AMP)基因attacin-A, defensin和diptercin表达变化情况。【结果】克隆获得桔小实蝇BdPGRP-SB1的全长cDNA序列(GenBank登录号: MN892482),开放阅读框长558 bp,编码185个氨基酸,其编码蛋白预测分子量为21.45 kD,等电点为8.57。序列分析表明,BdPGRP-SB1无跨膜结构域,具有PGRP保守结构域,前端具有信号肽,为分泌型蛋白;具有Zn²⁺依赖性酰胺酶活性和DAP型肽聚糖识别位点。系统进化分析发现,BdPGRP-SB1与辣椒实蝇B. latifrons的PGRP-SB1亲缘关系最近,氨基酸序列一致性达96%。发育表达模式表明,BdPGRP-SB1在桔小实蝇3日龄幼虫和成虫期高表达;组织表达谱结果显示BdPGRP-SB1在5日龄成虫各组织中均有表达,在脂肪体内表达量最高。PGN-EB和PGN-SA均能诱导桔小实蝇雌成虫体内BdPGRP-SB1表达水平变化。通过RNAi抑制BdPGRP-SB1表达后,注射大肠杆菌导致桔小实蝇雌成虫死亡率显著升高,以及attacin-A, defensin和diptercin表达量显著上调。【结论】结果说明桔小实蝇BdPGRP-SB1参与识别革兰氏阴性细菌,并可能参与桔小实蝇Imd途径调控其免疫反应。     

革兰氏阴性菌IX型分泌系统的研究进展

IX型分泌系统(Type IX Secretion System,T9SS)是一种最新发现的存在于许多革兰氏阴性细菌中的分泌系统。T9SS参与细菌的毒力和滑行运动及复杂生物聚合物的降解过程。近年来,与T9SS相关的研究一直都是微生物学领域关注的热点。本文就T9SS的发现、组成与结构、分泌机制及调控机制等方面的研究进展进行综述,以期为进一步解析细菌的T9SS提供新的思路。     

桔小实蝇肽聚糖识别蛋白基因BdPGRP-SB1的克隆及功能鉴定

【目的】为探究肽聚糖识别蛋白(PGRP)基因BdPGRP-SB1在桔小实蝇Bactrocera dorsalis免疫中的作用。【方法】本研究利用PCR克隆桔小实蝇BdPGRP-SB1全长cDNA序列;利用生物信息学软件对该基因核苷酸序列及其编码的氨基酸序列特征进行分析。采用RT-qPCR分析BdPGRPSB1在桔小实蝇不同发育阶段(卵、幼虫、蛹、成虫)及5日龄成虫不同组织(中肠、马氏管、后肠、脂肪体、卵巢和精巢)中的表达模式;对桔小实蝇5日龄雌成虫分别注射大肠杆菌Escherichia coli0111:B4肽聚糖(PGN-EB)和金黄色葡萄球菌Staphylococcus aureus肽聚糖(PGN-SA)后检测BdPGRP-SB1表达水平变化。利用RNAi沉默BdPGRP-SB1的表达,测定大肠杆菌和金黄色葡萄球菌诱导后桔小实蝇雌成虫的死亡率及大肠杆菌诱导后抗菌肽(AMP)基因attacin-A,defensin和diptercin表达变化情况。【结果】克隆获得桔小实蝇BdPGRP-SB1的全长cDNA序列(GenBank登录号:MN892482),开放阅读框长558 bp,编码1...     

革兰氏阴性杆菌氟喹诺酮耐药株的实验研究

对８２株临床分离的氟喹诺酮药物（Ｆｌｕｏｒｏｑｕｉｎｏｌｏｎｅｓ,ＦＱＮＳ）耐药菌进行了多种抗生素敏感试验。结果显示８２株耐药菌对５种药物耐药率分别为：诺氟沙星９７．５６％、依诺沙星９６．３４％、罗美沙星９５．１２％、氧氟沙星９２．６８％、环丙沙星８７．８％。３２株菌对ＦＱＮＳ存在较普遍的交叉耐药现象,对氨苄青霉素、庆大霉素、丁胺卡那霉素及头孢菌素类的多重耐药率也较高。８２株菌中有４３株菌携带质粒（５２．４４％）。质粒消除及转化实验结果表明：质粒与ＦＱＮＳ耐药性无关。     

替考拉宁在感染的血液病患者中血药浓度的监测与应用价值分析

目的:探讨替考拉宁在感染的血液病患者中血药浓度的监测与应用价值。方法:回顾分析2017年12月-2019年12月来我院治疗的42例革兰氏阳性球菌引起感染的血液病患者临床资料,按照临床替考拉宁的给药剂量分A组和B组,每组21例。利用高效液相色谱法(HPLC)检测患者第5天用药前30 min的血药浓度,利用酶联免疫荧光法检测患者降钙素原(PCT)水平。比较两组血药浓度,临床疗效及PCT水平的差异,并记录不良反应。结果:B组患者血药浓度(15.12±4.68)mg/L高于A组的(11.76±5.31)mg/L,且B组患者PCT水平(0.86±1.21)ng/mL低于A组的(2.23±1.63)ng/mL,差异均有统计学意义(P<0.05)。B组患者临床有效率为95.24%(20/21),A组临床有效率为71.43%(15/21),两组临床有效率比较差异有统计学意义(P<0.05)。A组发生不良反应发生率为23.81%(5/21),B组不良反应发生率为19.05%(4/21),两组患者不良反应发生率比较差异无统计学意义(P>0.05)。有效组患者血药浓度(17.21±6.64)mg/L高于无效组的(10.14±5.48)mg/L;且有效组患者PCT水平(0.65±1.31)ng/mL低于无效组的(2.63±1.87)ng/mL,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论:对感染的血液病患者,提高替考拉宁初始负荷剂量可以达到较高的有效血药浓度,临床疗效更好,且不良反应未见增加。对感染的血液病患者进行血药浓度监测,能够一定程度上反映出临床治疗效果,具有临床参考价值。     

重组杀菌/渗透增强蛋白21在体内抗感染免疫作用的研究

本文介绍了rBPI21在革兰氏阴性菌败血症、慢性渗出性耳炎、下肢缺血再灌注损伤后并发症三种运行模型和临床创伤性失血及其并发症、肝部分切除术后、脑膜炎菌血症患者体内抗感染免疫作用的研究结果。提示rBPI21作为一种新型的抗菌蛋白,在治疗革兰氏阴性菌感染性疾病及其并发症方面具有广阔的临床应用前景。     

细菌表面呈现技术研究进展

自从首次描述外源蛋白在大肠杆菌表面呈现成功以来,细菌表面呈现技术得到了迅猛的发展,无论是革兰氏阴性菌还是革兰氏阳性菌都可用于异源蛋白的表面呈现,该技术被应用于微生物学、免疫学、分子生物学、疫苗学以及生物工程的多个领域的基础和应用研究。