三色荧光原位杂交技术（Triple—FISH）检测男性不育患者精子染色体的非整倍体性

目的：研究精子非整倍体染色体与男性不育之间的关系。方法：用荧光原位杂交（FISH）技术,对12个不育患精子的染色体进行了研究,其中,10例少,弱,畸精症患为A组,2例正常或接近正常的样品为B组,另有2例正常健康献精为对照组,原位杂交采用染色体XY和18号探针,每个个体记数1000个精子,结果：杂交总有效率为98％,在B组男性不育XY和18号的二体频率为0．30％和0．30％,与对照组相比（0．15％,0％）无显差别,XY和18号失体的精子为0．15％和0％,与对照组（0％,0．15％）也无显差别,而A组的XY和18号染色体二体率为1．13％和0．96％,失体为1．13％和1．6％,与前两组相比,差异有显性,估算总的非整倍体率：A组为42．44％,B组为6．05％,对照组为2．59％,前与后两组相比,差异有显性,结论：不育患精子的染色体具有显的非整倍体性。     

IL—5在非复制重组痘苗病毒中的表达及其对重组病毒免疫效效果的影响

利用非复制痘苗病毒表达载体pNEOCKβ751IL5和重组病毒RVJ123,通过两步重组构建了能同时表达IL－5和乙型肝炎病毒HBsAg的非复制型重组痘苗病毒RVJ123△11β75IL5。Southern-blot证实,痘苗病毒C－K片段间基因缺失的同时伴有IL－5基因的插入,鼻腔吸入分别免疫Balb/c小鼠和新西兰白兔。ELISPOT实验证实,免疫后两周小鼠肺淋巴细胞的抗HBsAgIgA抗分分泌细胞（ASC）数比对照组（RVJ123△11β75）增加约2倍,而同时小鼠肺淋巴细胞的抗HBsAgIgG抗体分泌细胞（ASC）数与对照组无差别。可在小鼠血液、肺浸出液以及新西兰白兔血液、肺浸出液、其它分泌液样品中检测到抗乙型肝炎病毒HBsAg的特异性的IgA,IgG抗体,与对照组相比,IgA抗体阳性转率及抗体滴度提高,而IgG则无差异。本实验说明：IL－5可在体内选择性地增强机体的粘膜IgA反应。提示非复制载体疫苗中,表达的该细胞因子有效的增强疫苗的的粘膜免疫反应,为粘膜疫苗的发展策略提供了新的途径。     

非NMDA受体参与双相呼气和吸气神经元电活动的调节

在新生大鼠延髓脑片上同步记录舌下神经根和双相呼气神经元／吸气神经元单位的放电活动,并在灌流的改良Kredbs液中先后加以非NMDA受体的激动剂KA和拮抗剂DNQX,观察对神经元单位放电的影响,以进一步探讨非NMDA受体在对双相呼气神经元之间交互兴奋和吸气神经元兴奋性突触输入中的作用,结果表明,使用非NMDA受体激动剂KA以后,双相呼气神经元的放电频率和蜂频率都明显增大,吸气神经元中期放电的频率和非NMDA受体激动剂KA以后,双相呼气神经元的放电频率和峰频率都明显增大,吸气神经元中期放电的频率和峰频率也显著增大,而早期和晚期放电的频率无明显改变,用相应拮抗剂以后,上述效应明显被抑制,结果提示,非NMDA受体参与了双相呼气神经元之间的交互兴奋作用,并且也介导了吸气神经元的兴奋性突触输入／     

南亚热带红椎和格木人工幼龄林土壤微生物群落结构特征

采用氯仿熏蒸浸提法和磷脂脂肪酸法(Phospholipids fatty acid,PLFA)研究了我国南亚热带地区非固氮树种红椎(Castanopsis hystrix)和固氮树种格木(Erythrophleum fordii)人工幼龄林土壤微生物生物量与微生物群落结构特征。结果表明,在旱季和雨季,红椎幼龄林土壤微生物总PLFAs量,细菌PLFAs量、放线菌PLFAs量及丛枝菌根真菌PLFAs量均大于格木幼龄林。红椎幼龄林土壤PLFA Shannon多样性指数(H_(PLFA))在旱季和雨季均大于格木幼龄林。主成分分析表明,土壤微生物群落结构组成受到林分类型和季节的双重影响。冗余分析表明,土壤硝态氮(NO_3~--N)含量、土壤含水量、p H及土壤微生物生物量氮(MBN)与特征磷脂脂肪酸之间呈显著相关关系。以上结果表明固氮树种格木与非固氮树种红椎人工幼龄林对土壤微生物生物量和群落结构的影响存在显著差异。     

昆明山海棠对中国仓鼠V79细胞二酰基甘油含量的影响

本研究以昆明山海棠根部水抽提物(Tripterygium Hypoglaucum(Level)Hutch,THH)处理中国仓鼠V79细胞,通过检测V79细胞C-M细胞频率以及二酰基甘油(1,2-diacylgcerol,DAG)的含量测定,分析了THH诱发非整倍体与细胞醇磷酯信号通路的关系.结果指出THH能在1mg/ml、2mg/ml两个剂量上使V79细胞的DAG含量显著升高(P＜0.001),并明显的提高C-M细胞频率(P＜0.05),提示肌醇酯信号通路是介导THH诱发非整倍体的途径之一.     

PNPLA3在实验性非酒精性脂肪性肝病中的表达及其CpG岛甲基化状态的研究

目的:探讨PNPLA3在非酒精性脂肪性肝病中的表达水平及其Cp G岛甲基化状态,探讨PNPLA3在NAFLD发生、发展中的作用。方法:1.采用10μg/m L的油酸作用于人正常肝细胞株L02建立脂肪肝细胞模型,72 h后经油红O染色,观察正常组、脂肪肝模型组及给药组细胞内脂滴形成情况,并用荧光定量PCR检测PNPLA3在三组肝细胞中的表达情况。2.采用专用DNA提取试剂盒分别提取正常组、脂肪肝模型组、给药组细胞中DNA,经亚硫酸转化后行PCR扩增目的基因,并用焦磷酸测序方法检测不同组PNPLA3 Cp G岛中甲基化水平,探讨其在非酒精性脂肪肝中的作用。结果:1、脂肪肝模型组肝细胞PNPLA3 m RNA的表达高于正常组,经姜黄素给药后,其表达降低,差异均有统计学意义(P0.05)。2、在PNPLA3启动子区6个检测位点中,脂肪肝组位点2甲基化水平高于正常组,姜黄素给药后甲基化水平降低,差异均有统计学意义(P0.05),在其余各检测位点中甲基化水平无差异。结论:1、油红O染色后,脂肪肝模型组细胞内发现有大量红色脂滴积聚,而正常组基本上未见脂滴,姜黄素给药组脂滴较模型组减少,表明用10μg/m L的油酸诱导能成功建立体外肝细胞模型。2、PNPLA3 m RNA在肝细胞中高表达及其启动子区甲基化状态异常参与非酒精性脂肪肝发病。3、抑制肝脏PNPLA3活性或降低肝细胞PNPLA3 m RNA的表达水平可能是今后治疗非酒精性脂肪性肝病(NAFLD)的一个新的治疗方法。     

长非编码RNA在胃癌发病机制中相关作用的研究进展

胃癌是死亡率位居全球第二的消化道恶性肿瘤,在我国的发病率呈逐年上升的趋势。研究发现,长非编码RNA(lncRNA)在胃癌患者癌细胞中存在异常表达,且与癌细胞的增殖、转移等生物学活动密切相关。lncRNA对于评估癌前病变的发生、判断化疗的疗效及胃癌的预后都有重要意义,但目前lncRNA在胃癌发生、发展过程中的作用机制尚不完全清楚。我们就lncRNA在胃癌发病机制中的最新研究进展做简要综述。     

非限制性内切核酸酶Sma的表达纯化工艺及性能研究

目的:大量表达非限制性内切核酸酶Sma并获得高纯度目的蛋白,对其酶活进行鉴定。方法:PCR获得Sma基因片段,构建pET28a-omp A-Sma表达载体,转入E.coli BL21(DE3)中,筛选出不同培养基下,目的蛋白可溶表达量最高的条件。通过渗透休克方法提取目的蛋白,并经离子交换纯化。检测不同的温度条件下Sma的酶活,并与商品化产品进行比较。结果:经PCR和测序证明重组蛋白表达质粒构建正确。可溶蛋白产量为7mg/L,每升培养基获得7 300k U的Sma,纯化后纯度95%,活性达273U/μl(商品化产品为250U/μl)。结论:成功地表达了可溶性非限制性内切核酸酶Sma,纯度高、活性好,各项条件下活性皆不低于商品化产品。     

符号检验法及其在动物生态学研究中的应用

符号检验法是非参数统计法的一种重要方法,在动物生态学的实验数据统计分析领域有一定的实用价值,本文简要介绍这一方法的使用。     

长链非编码RNA对骨肉瘤的调控作用北大核心CSCD

骨肉瘤是一类主要发生于长管状骨的原发性恶性骨肿瘤,其主要特征是由肿瘤细胞直接形成不成熟的骨或骨组织。患者具有严重的疼痛症状和软组织肿胀,严重的可导致病理性骨折。由于骨肉瘤侵袭性较高和转移较快,其临床治疗效果较差,且患者具有较高的癌症致死率。尽管目前在骨肉瘤发生、发展的机制研究上取得了较大进展,但关于骨肉瘤的生理、病理机制尚未完全清楚。长链非编码RNA作为非编码RNA的一种,在各类肿瘤的发生和发展中发挥关键性作用;其对骨肉瘤细胞的生长、增殖、迁移、侵袭以及骨肉瘤的发生、发展、耐药性和预后也具有重要的调控作用。因此,明确长链非编码RNA在骨肉瘤中的作用,为进一步探究骨肉瘤的发病机制和临床治疗提供潜在的生物标志物。