抗体库技术

基因工程抗体可称为第三代抗体,其较前两代抗体有免疫原性低,用途多样等优点。其中抗体库技术又较另两种基因工程抗体（嵌合抗体,改型抗体）优越,可不经免疫制备抗体,又可实现完全人源化,理论上若构建出有足够库容量及多样性的抗体库,便可从中筛选任何抗原的单克隆抗体。该技术有可能取代杂交瘤技术,本文综述了抗体库技术的产生,发展,优点及应用前景等。     

抗体医药和酶抑制剂着眼后利妥昔单抗

当前迫切需要对使用抗体医药利妥昔单抗（rituximab）无效的患者也能有效的药剂。 全世界正在开发能够识别两种抗原的抗体和叶酸合成抑制剂等分子靶向药物。     

应用CE-SDS测定抗CD52人源化单克隆抗体参比品单体纯度及非糖化重链比例

目的:测定抗CD52人源单克隆抗体参比品单体纯度及非糖基化重链比例。方法:采用PA800 plus毛细管电泳系统,非还原十二烷基苯硫酸钠-毛细管电泳(CE-SDS)测定抗CD52人源单克隆抗体单体纯度,以及用还原CE-SDS电泳测定非糖化重链比例。结果:非还原CE-SDS三次测定单体纯度平均值为93.57%,主峰的迁移时间及修正峰面积百分比RSD分别为0.16%和0.19%;还原CE-SDS电泳重链修正峰面积百分比平均值为66.89%,修正峰面积百分比及迁移时间RSD分别为0.09%和0%;轻链修正峰面积百分比平均值为32.30%;轻链修正峰面积及迁移时间RSD分别为0%和0%;非糖基化重链修正峰面积百分比平均值为0.87%,修正峰面积百分比及迁移时间RSD分别为6.66%和0.27%。结论:CE-SDS测定抗CD52人源单抗单体纯度及非糖化重链比例实验结果偏差较小,表明结果准确可靠。     

抗胃癌鼠单抗3Gg轻链可变区基因的克隆和序列分析

本文报导了用ＰＣＲ方法（Ｐｏｌｙｍｅｒａｓｅ Ｃｈａｉｎ Ｒｅａｃｔｉｏｎ）从抗胃癌单抗３Ｇｇ杂交瘤细胞的基因组ＤＮＡ中,扩增出３３３ｂｐ的轻链可变区基因,克隆至ｐＢｌｕｅｓｃｒｉｐｔ Ⅱｋｓ ＋／－载体上,筛选到阳性克隆。核苷酸序列分析表明：有５３％的核苷酸序列与抗体基因库中的一般序列相符。证明已获得抗胃癌单抗轻链可变区基因。     

小鼠精子睾丸后成熟过程中单克隆抗体MSH27抗原表位的显露

MSH2 7是一株抗小鼠精子的单克隆抗体 ,此抗体及其纯化的抗原分子在体外受精实验中均可以阻止精卵膜融合 ,因而推测其抗原在精卵膜融合过程中具有重要的作用 .这里探讨了抗原分子在精子睾丸后成熟过程中MSH2 7识别表位的显露条件 .MSH2 7抗原分子在睾丸中产生 ,定位于精子顶体后区的质膜上 ;但MSH2 7所识别的抗原表位只在顶体反应后的精子上表露 .在受精过程中 ,精子必须完成顶体反应并穿过卵子的透明带才能接近卵子质膜并与之融合 .同时还研究了顶体反应和穿透明带作用对MSH2 7表位显露的影响 .在附睾成熟过程中 ,随着精子在附睾中的转运 ,它们发生顶体反应的能力不断增加 ;精子抗原表位的显露呈现顶体反应依赖性 ,且两者呈现线性回归关系 .钙离子载体A2 3 187诱发顶体反应后 ,MSH2 7染色阳性的精子远远少于顶体反应的精子 ;但穿过透明带后绝大多数精子 ( 98% )呈现MSH2 7染色阳性 .总之 ,在睾丸后成熟 (附睾成熟、获能、顶体反应 )和精子穿透明带的过程中 ,对整个精子群体来讲 ,单抗MSH2 7所识别的抗原表位的显露和精子最终获得穿入卵子质膜的能力是同步发生的 .     

维罗非尼联合爱必妥对结直肠癌细胞株的作用研究

探讨BRAF抑制剂维罗非尼联合EGFR单克隆抗体西妥昔单抗对BRAF突变型和野生型结直肠癌细胞株的作用。应用MTT法检测,将不同浓度西妥昔单抗、维罗非尼单药以及两药联合分别作用于BRAF突变型结直肠癌细胞株RKO、HT-29和BRAF野生型结直肠癌细胞株DIFI、CACO-2后,观察各细胞株增殖变化;通过集落形成实验,经过长时间培养细胞验证不同处理因素对细胞增殖的抑制作用;Western blot实验检测EGFR下游通路靶蛋白的活性在两药联合后是否出现明显下调。结果显示,单药治疗,西妥昔单抗能一定程度抑制BRAF野生型结直肠癌细胞株增殖,抑制率达26%~40%,而BRAF突变组两种细胞株对西妥昔单抗均耐药。维罗非尼对不同基因状态细胞的增殖均有一定的抑制作用,IC50均小于7μmol/mL,其中BRAF突变细胞更为敏感。对比单药西妥昔单抗,联合维罗非尼后更加明显地抑制了细胞增殖,4种细胞存活率均明显降低(P0.05)。长时间集落形成实验证实两药联合形成集落的面积和数量均明显减少。Western Blot实验显示对比单药,两药联合明显下调了p-EGFR、BRAF、p-ERK的表达。结果显示,BRAF抑制剂维罗非尼无论在BRAF突变型还是野生型结直肠癌细胞株中,均能增强西妥昔单抗作用的敏感性。     

单克隆抗体——药物免疫偶合物连接方法

当前,恶性肿瘤治疗面临的主要问题在于临床所用抗肿瘤药物选择性不高,它们在杀伤肿瘤细胞的同时也在一定程度上损害正常细胞,特别是增殖较快的细胞,因而常产生较严重的毒副作用,如骨髓抑制,心、肝、肾等实质器官的损害。     

血块显像剂的开发竞争

目前测定血液凝块的技术,既昂贵、又往往不够精确,而且还可能对病人有危险。现在至少有四个公司--美国的Centocor、Cytogen、American Biogenetic Sciences Inc.和澳大利亚的Agen公司--准备改变这种局面,发展以单克隆抗体为基础的显像技术来映像血液凝块。这方面的市场潜力是巨大的,据估计美国每年有1000万人需要这方面的服务,按现在的费用说,每例手术可能要1000美元。     

抗人肝癌单抗片段抗体HAb18F（ab）2的冻干工艺研究

选择适合于HAb18 F(ab′)2片段抗体的冻干保护剂及其冻干工艺,是确保该生物制品的质量关键之一,对不同种类和不同浓度的保护剂进行了研究,结果表明10%蔗糖对HAb18 F(ab′)2片段抗体冻干样品的剂型、外观、残水量(＜3%)、复溶时间(＜10 s)、纯度(＞95%)及稳定性没有影响.研究优化与保护剂相结合的适用于HAb18 F(ab′)2片段抗体的最佳冻干工艺,为抗体片段扩大生产提供依据.     

利妥昔单抗注射液联合化疗治疗B细胞非霍奇金淋巴瘤的疗效观察

目的:观察利妥昔单抗注射液联合化疗治疗B细胞非霍奇金淋巴瘤(B-NHL)的疗效。方法:将2013年1月至2014年12月我院收治的71例B-NHL患者分为对照组(n=35例)和观察组(n=36例)。对照组给予常规化疗方案进行治疗,观察组在此基础上加用利妥昔单抗进行治疗,3个周期后评价其疗效及安全性。结果:观察组总有效率为91.67%,明显高于对照组的68.57%,对比差异有统计学意义(x2=5.979,P0.05);观察组不良反应总发生率为41.67%,略低于对照组的45.71%,但无统计学差异(x2=0.118,P0.05)。结论:利妥昔单抗注射液联合化疗治疗B-NHL中期疗效显著,且无严重不良反应,值得临床推广。