碱性成纤维细胞生长因子对培养的瘢痕成纤维细胞FN合成的调控作用

目的探讨碱性成纤维细胞生长因子（bFGF）对成纤维细胞纤维连结蛋白（FN）合成的调控作用。方法采用细胞培养、ELISA法、RT-PCR方法观察bFGF在不同剂量下对瘢痕来源的成纤维细胞FN合成的影响。结果FN的表达在低bFGF浓度组与对照组无明显差异,随着浓度的升高表现为增高趋势,以50、100、500ng／ml最显著,与对照组之间有显著性差异（P〈0．05）。FN mRNA表达在50-100ng／ml组明显升高,与对照组间有显著性差异（P〈0．05）。mRNA表达趋势与上清中蛋白的表达具有一致性。结论高浓度bFGF刺激FN合成可能是bFGF促进创面愈合的重要原因。     

体外诱导骨髓间充质干细胞向肝细胞样细胞方向分化

探讨成纤维生长因子-2(FGF-2)在体外定向诱导大鼠骨髓间充质干细胞(BM-MSCs)向肝细胞样细胞分化的作用及量化关系。体外分离培养大鼠BM-MSCs,将第3代BM-MSCs采用不同剂量的FGF-2诱导。诱导后,在显微镜下观察细胞形态学的改变;用免疫细胞化学法检测白蛋白和CK19的分泌;Shiff染色法检测糖原的分泌。诱导后BM-MSCs由梭形向多角形、卵圆形方向变化,白蛋白、CK19和糖原12 d即有阳性表达,以后随着诱导时间的延长阳性率逐渐升高。20 ng/mL FGF-2诱导比10 ng/mL FGF-2诱导细胞白蛋白、CK19和糖原的表达量均多。20 ng/mL FGF-2具有较强的诱导BM-MSCs向肝细胞样细胞分化的能力。     

人参皂苷Rg1组合诱导人成骨肉瘤MG-63细胞分化过程中Prohibitin的表达与定位变化

选择性抽提经人参皂苷Rg1组合（RCT）诱导处理前后的人成骨肉瘤MG-63细胞核基质,对prohibitin在核基质中的存在、分布及其与相关基因产物在RCT处理前后MG-63细胞中的共定位关系进行观察研究.蛋白质组学分析结果显示,prohibitin存在于人成骨肉瘤MG-63细胞核基质蛋白组分中,并在RCT处理后细胞核基质中表达下调;蛋白质印迹杂交确证了prohibitin在MG-63细胞核基质中的存在及其在RCT处理后下调变化;免疫荧光显微镜观察进一步证实prohibitin定位在核基质上,经RCT处理后出现分布位置与表达水平变化;激光共聚焦显微镜观察可见prohibitin与c-Fos、c-Myc、p53和Rb基因产物均存在共定位关系,并在RCT处理后共定位分布区域出现变化.本研究证实了prohibitin是一种新发现的核基质蛋白,其在核基质上的定位与表达在RCT诱导分化前后发生显著变化,并与相关癌基因、抑癌基因产物存在共定位关系.实验表明RCT处理引起的prohibitin的变化与人成骨肉瘤MG-63细胞的诱导分化与调控具有密切关系,为深入揭示RCT等中药有效成分诱导肿瘤细胞分化的机理提供了重要科学依据和深入探索的新方向.     

TGF-β超家族在软骨发生、发育和维持中的作用

转化生长因子b(Transforming growth factor b, TGF-b)超家族包括TGF-b和骨形态发生蛋白(Bone morphogenetic protein,BMP)两个亚家族。TGF-b超家族信号通路的配体、配体拮抗分子、受体、信号转导分子均在软骨内成骨过程中发挥各自独特的作用, 参与调控软骨细胞的谱系分化、增殖、成熟、凋亡和矿化。BMP信号能起始间充质细胞向软骨细胞分化并维持软骨细胞的特性, 在软骨发生过程中起主导作用; 在生长板发育的过程中, BMP信号促进软骨细胞的成熟, 促进成骨, 而TGF-b信号抑制软骨细胞的肥大分化, 维持生长板中适量的软骨细胞; TGF-b信号和BMP信号对于关节软骨的维持和修复都是不可或缺的。因此, TGF-b超家族的重要作用贯穿骨骼发育过程的始终。     

遗传咨询

成骨不全能产前诊断吗？;马凡综合征是怎样遗传的？。     

人参皂甙Rg1组合诱导人成骨肉瘤 MG-63细胞分化过程中Nucleophosmin的表达与定位变化

选择性抽提经中药有效成分人参皂甙Rg1组合(简称RCT)诱导处理前后的人成骨肉瘤MG-63细胞核基质,对nucleophosmin(NPM)在核基质中的存在、分布及其与相关基因产物在MG-63细胞中的共定位关系进行了观察研究.双向凝胶电泳和质谱鉴定结果显示NPM存在于MG- 63细胞核基质蛋白组分中,在RCT处理后细胞核基质蛋白中表达下调.蛋白质印迹杂交结果证实了NPM在RCT处理前后的MG-63细胞核基质蛋白中的存在及其表达下调变化.免疫荧光显微镜观察显示NPM定位于MG-63细胞核基质上,经RCT处理后出现分布位置与表达水平的变化.免疫荧光-激光扫描共聚焦显微镜的观察结果显示NPM在MG-63细胞中与c-fos、c-myc、RB、p53 等基因产物具有共定位关系,并在RCT处理后细胞核内其共定位区域发生了变化.研究结果证实了NPM存在于核基质上,是一种核基质蛋白,其在RCT诱导人成骨肉瘤MG-63分化过程中的表达与分布变化及其与相关癌基因、抑癌基因的关系显然对MG-63细胞分化具有重要影响,这为深入揭示中药有效成分诱导肿瘤细胞分化的机制提供了重要科学依据和深入探索的新方向.     

甲状旁腺激素PTH 1-34对成骨细胞的机械应答的影响

目的：探讨PTH对成骨细胞在机械载荷状态下的功能影响。方法：人成骨样细胞株MG63复苏培养,采用163mOsm低渗液作为刺激源,实验分为三组,A组为单纯用DMEM培养基培养;B组为低渗液对成骨细胞分别作用0．5h、2h、4h和6h;C组为低渗处理同期加入hPTH1-34（20ng／L）。检测细胞内钙离子浓度[Ca2＋]、细胞凋亡指数以及增殖活力的变化。所得结果采用单因素方差分析法。结果：随着培养时间延长,[Ca2＋]i升高,以B组升高最为明显,（与A组比较p〈0．05）,A组和C组比较p〉0．05;细胞凋亡指数在B组4h和6h为最高（29．38±0．336;54．87±0.781）,明显高于A组和C组,且与两组相比均p〈0．05,C组4h凋亡率低于A组（p〈0．05）,其它时间组统计学比较p〉0．05。细胞增殖活力随着培养时间增加逐渐增加,与A组和C组同期相比,B组较低,且p〈0.05。结论：过强的低渗牵张作用对细胞有损害作用,[Ca2＋]i降低,凋亡率增加且降低增殖活性;PTH通过维持[Ca2＋]i浓度,对细胞的功能具有保护作用。     

嗅球成鞘细胞的分离培养与鉴定

目的:探讨一种获取高纯度嗅球成鞘细胞(olfactory ensheathing cells,OECs)的方法.方法:从新生SD大鼠(3d)嗅球中迅速分离嗅神经层和嗅颗粒层,采用酶消化法分离细胞,差速贴壁法纯化细胞,接种于多聚赖氨酸包被的培养板内培养2d,采用NGFRp75和S100蛋白双标免疫组化、以Hoechst33342复染鉴定OECs的纯度.结果:OECs的纯度为(95.64±2.76)%.结论:本法是一种相对简便易行且经济、稳定、有效的OECs分离方法.     

HMBA诱导人成骨肉瘤MG-63细胞分化过程中prohibitin的表达与定位变化

本文以HMBA诱导处理前后的人成骨肉瘤MG-63细胞为对象,对prohibitin在核基质中存在、分布及其与相关基因产物在HMBA处理前后MG-63细胞中的共定位关系进行观察研究.蛋白印迹杂交结果确证prohibitin存在于人成骨肉瘤MG-63细胞核基质蛋白组分中,并在HMBA处理后细胞核基质中表达下调,免疫荧光显微镜观察显示prohibitin定位在核基质上,经HMBA处理后出现分布位置与表达水平的变化.激光共聚焦显微镜观察可见prohibitin与MG-63细胞中c-fos、c-myc、p53和rb基因产物均存在共定位关系,但在HMBA处理后细胞中其共定位分布区域出现变化.研究结果证实prohibitin是一种核基质蛋白,定位于核基质上,prohibitin在人成骨肉瘤MG-63细胞诱导分化过程中的表达分布及其与相关癌基因、抑癌基因产物的共定位现象值得进一步探索和研究.     

丹参酮ⅡA对人成骨肉瘤MG-63细胞形态结构和终末分化指标的影响

目的:观察中药有效成分丹参酮ⅡA(Tan ⅡA)对人成骨肉瘤MG-63细胞形态与超微结构和相关终末分化指标的影响,以鉴定其对肿瘤细胞终末分化的诱导作用.方法:0.5μg/mL丹参酮ⅡA处理MG-63细胞,光镜、电镜观察和免疫细胞化学检测系统研究MG-63细胞处理前后细胞形态、超微结构变化和成骨细胞相关终末分化蛋白的表达变化.结果:光镜与电镜观察结果显示经Tan ⅡA处理细胞产生了核质比例减小、异染色质减少、常染色质增多、细胞器丰富发达、细胞表面微绒毛减少等显著变化;免疫细胞化学检测显示处理后MG-63细胞I型胶原蛋白、骨粘素和骨钙蛋白的表达呈阳性,并观察到钙化糖原颗粒增多和典型骨结节的形成.结论:丹参酮ⅡA能显著改变MG-63细胞形态与超微结构恶性特征,并促进与成骨细胞相关的终末分化指标的表达变化,从而对人成骨肉瘤细胞的终末分化具有明显的诱导作用.