编码人分化抗原5D4的全长cDNA克隆及其编码蛋白质的二级结构分析

用 3D5细胞染色强阳性 ,而Daudi与Jurkat细胞染色弱阳性的单克隆抗体5D4,从一个人扁桃体细胞λgt1 1cDNA文库 (ATCCNo .375 46 )筛选到一个长 1 846bp的cDNA克隆 .RT_PCR显示 3D5细胞、Daudi细胞和Jurkat细胞 5D4mRNA均阳性 ,但 3D5细胞明显强于后两者 . 5D4cDNA中 88～ 1 2 0 9bp为一个开放阅读框架 ,编码374个氨基酸的蛋白质 .Northernblot分析结果和起始密码子前 5′端非编码区有 2个连续的终止密码子表明 ,这是一个全长cDNA .从其开放阅读框架推断的蛋白质的氨基酸序列中 2 95～ 334aa为一强疏水区 ,预测 31 3～ 334aa为一分值极高的跨膜螺旋区 ,其方向最可能是由膜内到膜外 .     

氨甲喋呤-人血清白蛋白-单抗79结合物在动物体内的组织分布及其稳定性的研究

本研究比较了~(125)标记的氨甲喋呤-人血清白蛋白-单抗79(MTX-HSA-McAb79)和氨甲喋呤-人血清白蛋白(MTX-HSA)两种结合物的血浓度及在肝、脾、肾等重要脏器的组织分布。发现前者的生物利用度大、血的清除率低、且肝脏等重要代谢器官对它的摄取也低。 在MTX-HSA-McAb79结合物的稳定性研究中,首先采用纸层析法及荧光分光光度法分别证明结合物中酰胺键在体内外均具有良好的稳定性;其次采用SDS-PAGE结合放射自显影术,再通过薄层扫描定量,研究了结合物中二硫键的稳定程度。结果表明:二硫键相当不稳定,腹腔注射后1h即有60.5％的二硫键断裂,24h则高达92.9％。r-扫描显示MTX-HSA-McAb79在肿瘤部位的浓集不理想,这与二硫键稳定性试验的结果是一致的。探索新的交联剂和交联方法,增加结合物在体内的稳定性将是今后的目标之一。     

国内外单抗药物市场概述

单抗药物具有特异性强、不良反应小等优势,近年来在肿瘤和自身免疫性疾病治疗等领域取得了快速发展。目前全球上市抗体药物共55个,2015年销售总额达到916.3亿美元。中国当前正处在抗体药物快速发展阶段,国家食品药品监督管理局(CFDA)共批准生产抗体药物22种,其中国产产品10个,进口产品12个。2014年国内单抗药物市场规模为50.34亿元,随着生物技术的不断发展,国内单抗药物的市场前景将会越来越广泛。     

Asia I口蹄疫vp2蛋白单克隆抗体的制备及单抗竞争ELISA方法的建立

制备Asia I口蹄疫病毒vp2单克隆抗体(mAb)并建立了单抗竞争ELISA方法。用纯化的Asia I型口蹄疫病毒vp2重组蛋白免疫BALB/c小鼠, 将免疫小鼠的脾细胞与骨髓瘤SP2/0细胞融合, 采用间接ELISA和有限稀释法筛选杂交瘤细胞。分别用ELISA、Western blotting检测mAb腹水的效价及其特异性。筛选到杂交瘤细胞2株, 腹水效价均在100×29以上; 以纯化后的Asia I型口蹄疫病毒vp2重组蛋白作为抗原, 利用Asia I型口蹄疫病毒vp2单抗酶标物建立了竞争ELISA方法用来检测Asia I型口蹄疫抗体。临床应用表明, 该方法与UBI公司的口蹄疫全病毒抗体检测试剂盒总符合率达89.0%, 和荷兰赛迪公司的口蹄疫病毒LPB-ELISA抗体检测试剂盒总符合率达86.5%。     

抗甲肝病毒基因工程单抗分离纯化与鉴定

为克服血源免疫球蛋白制品的不足,开发了抗甲肝病毒基因工程单克隆抗体anti-HAV IgG。用无血清培养基培养rCHO工程细胞株,上清液经过rProtein A SFF亲和层析→脱盐→离子交换层析→超滤换液纯化后,所得anti-HAV IgG纯度达99%以上,比活性约100IU/mg,anti-HAV IgG活性回收率40%。所纯化的anti-HAV IgG分子量150kD,等电点8.4～9.3。免疫印迹实验证实anti-HAV IgG为人源全抗体分子。亲和层析介质rProtein A SFF确实存在亲和配基脱落问题,但通过后续纯化步骤可有效除去。在亲和层析过程中加入高盐清洗步骤,可有效降低宿主DNA残留量水平。对样品中自由巯基含量进行了测定,认为非还原电泳图谱中低分子量条带是由于抗体分子内存在自由巯基引起。用该工艺制备的anti-HAV IgG各项纯度检测指标均达到我国对基因工程产品的质量要求。     

视网膜光凝术联合雷珠单抗治疗新生血管青光眼的疗效及对血液流变学和房水炎性因子的影响

摘要 目的：探讨新生血管青光眼采用视网膜光凝术联合雷珠单抗治疗的疗效及对房水炎性因子和血液流变学的影响。方法：选取我院2015年2月～2017年5月收治的172例（180眼）新生血管青光眼患者作为研究对象,按照随机数字表法分为两组,对照组患者85例（88眼）,采用视网膜光凝术进行治疗,观察组患者87例（92眼）,采用视网膜光凝术联合雷珠单抗进行治疗,对比两组治疗后虹膜新生血管消退情况及消退时间,治疗前后眼压变化情况和静脉循环时间、眼部光学相干断层扫描（OCT）、血液流变学、房水炎性因子检测结果与不良反应发生情况。结果：观察组虹膜新生血管消失率为95.65%,高于对照组的80.68%（P＜0.05）;与对照组对比,观察组虹膜新生血管消退时间更短（P＜0.05）;与对照组对比,观察组治疗后眼压更低,静脉循环时间更短（P＜0.05）;与对照组对比,观察组治疗后视野缺损值更小,视网膜神经纤维层（RNFL）厚度更厚（P＜0.05）;治疗后观察组血浆黏度(PV)、红细胞压积( HCT)、血小板黏附率(PAdT)水平均低于对照组（P＜0.05）;治疗后观察组房水炎性因子水平包括白介素-1β(IL-1β)、白介素-6(IL-6)、单核细胞趋化蛋白1(MCP-1)水平均低于对照组（P＜0.05）;对照组不良反应发生率为9.09%,与观察组的10.87%对比无统计学差异（P＞0.05）。结论：新生血管青光眼采用视网膜光凝术联合雷珠单抗治疗的疗效理想,可改善患者的血液流变学指标,降低房水炎性因子水平,且安全性高。     

天花粉蛋白Lys和Arg残基的化学修饰对其与IgE反应活性的影响

用马来酸酐及环己二酮分别对天花粉蛋白上的Ｌｙｓ、Ａｒｇ残基侧链进行修饰,并以竞争性酶免疫测定检查了化学修饰对ＴＣＳ与小鼠抗ＴＣＳ单抗ＴＥ－１（ＩｇＥ型）反应活性的影响。两种修饰均使ＴＣＳ与单抗ＴＥ－１反应活性下降。推测Ｌｙｓ残基可能直接参予了与单抗ＴＥ－１的结合。热变性实验提示ＴＣＳ上单抗ＴＥ－１识别部位需要一定的空间构象。     

用体外免疫的人淋巴细胞建立抗破伤风类毒素的杂交瘤克隆

我们应用破伤风类毒素体外免疫的人扁桃体细胞和人-鼠异源骨髓瘤RF 系细胞进行融合,从中筛选到一株杂交瘤细胞89112—50,并通过克隆化筛选获得了两个亚克隆,其分泌的抗体是抗原特异的,和三种抗原(OVA、TC-S、FYG)都不交叉,分泌抗体的功能也比较稳定,在培养瓶内连续扩增传代13次后,仍维持相当高的抗体分泌能力,在常规传代培养过程中所收集的培养物上清液中抗体的含量平均为69.6μg/ml。     

奥沙利铂和氟尿嘧啶联合贝伐珠单抗对晚期胃癌患者免疫功能、肿瘤标志物和预后的影响

摘要 目的：探讨奥沙利铂和氟尿嘧啶联合贝伐珠单抗对晚期胃癌患者免疫功能、肿瘤标志物和预后的影响。方法：选取2014年3月到2017年5月期间我院收治的晚期胃癌患者62例,根据住院号单双数分为对照组和观察组,各31例。对照组给予奥沙利铂和氟尿嘧啶治疗,观察组在对照组的基础上联合贝伐珠单抗治疗,对比两组临床有效率、免疫功能、肿瘤标志物、不良反应和预后。结果：观察组治疗后的临床有效率较对照组高（P<0.05）。两组治疗后免疫球蛋白（Ig）A、IgG、CD4⁺/CD8⁺、CD4⁺、IgM均升高,且观察组高于对照组（P<0.05）,两组治疗后CD8⁺均降低,且观察组低于对照组（P<0.05）。两组治疗后癌胚抗原( CEA) 、糖类抗原199（CA199）、糖类抗原72-4（CA72-4）均降低,且观察组低于对照组（P<0.05）。观察组的不良反应总发生率较对照组低（P<0.05）。观察组复发率、癌症转移率低于对照组,且3年生存率高于对照组（P<0.05）。结论：奥沙利铂和氟尿嘧啶联合贝伐珠单抗治疗晚期胃癌患者,可有效缓解病情,提高免疫功能,同时还降低不良反应发生率,获得良好的预后。