极化上皮细胞中转运蛋白的分选

上皮组织细胞必须极化其表面区域以执行其转运生理功能。不同膜转运蛋白定位于细胞膜的不同区域,而细胞与细胞之间则须通过紧密连接复合体紧密连接成极化区域,并调节旁细胞途径的通透性。精密的机体要求上皮细胞具备一个筛选装置,用于将新合成的转运蛋白定位于合适的表面区域;转运蛋白本身也必须内含规定其功能位置的分选信号。目前上皮细胞蛋白分选和蛋白质之间相互作用已被逐渐阐明。上皮细胞通过细胞信号转导途径形成极化初始状态,将自己定位于特定位置,调节细胞与细胞之间、细胞与基质之问的相互作用。最近研究发现其信号转导通路的一个成员是一种AMP激活的蛋白激酶（AMP-stimulated protein kinase．AMPK）,它也是细胞能量感受器。     

益生菌辅助埃索美拉唑镁四联疗法对幽门螺杆菌阳性十二指肠溃疡患者肠道菌群分布及血清IFN\|γ、IL\|10的调节作用

目的 探讨益生菌辅助埃索美拉唑镁四联疗法在幽门螺杆菌(H. pylori)阳性十二指肠溃疡中的应用价值。 方法 按照随机数字表将我院116例H. pylori阳性十二指肠溃疡患者(2017年12月至2019年2月收治)分为观察组与对照组,各58例。对照组患者给予常规埃索美拉唑镁四联疗法治疗,观察组患者于对照组基础上联合益生菌(双歧杆菌三联活菌胶囊)辅助治疗,两组患者均治疗4周。对比两组患者临床疗效、治疗前后肠道菌群(双歧杆菌、乳杆菌)数量及血清免疫炎症介质[干扰素\|γ(IFN\|γ)、白细胞介素\|10(IL\|10)]水平、H. pylori根除率及治疗安全性。 结果 (1)观察组患者治疗有效率为93.10%(54/58),显著高于对照组的79.31%(46/58)。(2)治疗后两组患者肠道双歧杆菌、乳杆菌数量较治疗前增加,且观察组高于对照组(均P2=0.077,P=0.782)。 结论 益生菌辅助埃索美拉唑镁四联疗法治疗H. pylori阳性十二指肠溃疡患者效果确切,有利于提高H. pylori根除率,其机制可能与其能改善肠道菌群分布、下调血清免疫炎症介质表达有关。     

流式细胞计无菌分选功能的开发

分选技术是流式细胞计一项重要功能。其分离细胞的速度及纯度是目前世界上任何其他医学仪器无法比拟的。其分选速度可高达3000—5000个细胞/秒;纯度可高达99％以上。 分选可分为两种,一种为一般分选,另一种为无菌分选。无菌分选需要在分选过程中严格保证无菌条件,使分选过程中细胞不受污染。以利于细胞的继续增殖。一般分选,国内其他实验室正在开展;而无菌分选国内尚未见报道。国外也只是部分实验室在应用。我们参考了一些国内外文献并借鉴了一些国外经验,在FACS440型流式细胞计上开发了无菌分选功能。本文介绍这种方法及应用。希望此文对今后推广这项技术起到促进作用。     

PCR-双酶切鉴定STGC3抑癌基因重组子假阳性研究

目的:探讨PCR与双酶切技术联合使用鉴定阳性重组子的特异性和可靠性,评价长期保存的重组质粒再次测序的必要性。方法:对随机选取已经过测序验证的三组STGC3/pcDNA 3．1( )、一组STGC3/pGEM Easy T Vector重组子首先经过LB氨苄平皿培养挑单克隆筛选,然后单独或联合使用PCR和双限制性内切酶BamH I和Xho I酶切方法鉴定,将阳性样品送交生物工程公司测序,比较并评价两者结果的一致性。结果:三组STGC3/pcDNA 3．1( )重组子经PCR—双酶切检测阳性而不能通过测序,说明该检测方法在运用中确实存在假阳性,同时证明重组载体在长期保存后有必要再次鉴定。结论:保存过程中的杂菌污染、实验室操作中的质粒交叉污染以及重组载体基因突变是基因工程操作中不可忽视的问题;PCR—双酶切鉴定重组载体存在假阳性的问题,实验设计中应包含阳性与阴性(污染)对照,并有足够的重复实验。     

日本七鳃鳗类淋巴细胞的分离及细胞学特征

为分离纯化并鉴定日本七鳃鳗(Lampetra japonica)血液中的类淋巴细胞,采用Ficoll密度梯度离心法分离出单个核细胞层,并得到分离单个核细胞层的最佳分离液比重为1.092。利用流式细胞仪对分离到的单个核细胞层细胞进行分选,根据细胞的前向光及侧向光散射特征成功分选出类淋巴细胞,分选效率为95.68%,每毫升外周血可分离纯化得到类淋巴细胞2.4×106个。通过透射电镜观察七鳃鳗类淋巴细胞,细胞为圆形或椭圆形,细胞表面有突起、无微绒毛,胞质内含有板状嵴线粒体、粗面内质网、游离核糖体和液泡等。淋巴细胞异质性实验结果表明,日本七鳃鳗血液白细胞中尚未发现T淋巴细胞、B淋巴细胞的分化。     

海洋微生物高通量培养方法和分选技术的研究进展

海洋环境中蕴含着丰富的微生物资源,其在生态系统中发挥着重要作用,与人类生活息息相关。但是迄今通过传统的培养方法可被培养分离的海洋微生物不到1%。本文论述了海洋微生物的重要性,大多数海洋微生物不可被培养的原因,以及高通量培养方法和分选技术的研究进展。随着研究的深入,将会有更加实用有效的高通量培养方法和分选技术出现。     

自身免疫性胰腺炎的胰腺外表现

自身免疫性胰腺炎(autoimmune pancreatitis,AIP)是一种特殊类型的胰腺炎,其发病机制与自身免疫密切相关。2010年公布的诊断标准主要从血清学、影像学、组织学、胰腺外器官受累和激素治疗反应五方面将其分为1型和2型。近年来越来越多的资料显示多种胰腺外表现与AIP相关,如泪腺和唾液腺病变,硬化性胆管炎,间质性肺炎,肺门、纵膈淋巴结肿大,腹膜后纤维化,肾小管间质性肾炎等。胰腺外病变与AIP有相同的病理表现:器官内可见大量的Ig G4阳性浆细胞浸润,对激素治疗反应良好。本文主要对AIP的胰腺外表现作一综述。     

基于同源基因的病原菌鉴定和分型靶位点的功能基因组学研究

利用病原菌序列差异,对病原菌特定基因和位点进行检测,可以快速发现和鉴别病原菌的分类和特征,对传染病快速诊断和溯源具有基础性意义和重要价值.本文旨在覆盖中国重要传染病的103种病原菌,寻找各分类阶元中特有的同源基因,并从中挑选出适合用于病原菌鉴定、分型的候选基因.利用生物信息学和基因组学方法,对已有全基因组序列的275株病原菌的836415个基因进行比对分析,进一步明确菌株的门、纲、目、科、属各分类阶元中特有的同源基因集合;通过COG功能分类方法,对同源基因集合进行功能注释,并分析在不同分类阶元内的保守基因功能的变化规律.本研究寻找到适合鉴定和分型的不同分类阶元（门、纲、目、科、属）的同源基因集合共19563个（门2891个、纲1016个、目3601个、科10130个、属1925个）.对同源基因功能的分析表明,适合对病原菌进行鉴定的基因在不同分类阶元中,表现的功能存在较大差异.革兰氏阳性和阴性病原菌在不同分类阶元中,同源基因表现出的功能也存在差异.该结果将为对在中国广泛存在的病原菌进行检测所涉及的探针、芯片设计提供理论依据,加快目标探针的筛选工作.同时,研究也是首次将世界范围内的全基因组数据和中国重大传染病涉及的病原菌紧密联系结合,为利用功能基因组学开展区域性、有针对性的病原检测和监测,提供候选基因和位点筛选的新方法.相关结果在细菌的元基因组学研究中也具有一定的应用价值.     

基于流式细胞术分选的高效表达外源基因细胞的筛选

目的：以增强型绿色荧光蛋白（EGFP）作为报告基因,用流式细胞术筛选高表达EGFP的细胞,从而获得外源基因高效表达细胞株。方法：构建在EGFPC端编码区融合新霉素（neomycin）抗性基因的融合基因EGFP-Neomycin,将其插入pcDNA3.1（＋）载体,构建EGFP-Neomycin融合基因表达载体pcDNAEN,转染CHO-K1细胞,G418加压筛选和倒置荧光显微镜观察证实所表达的EGFP-Neomycin融合蛋白具有新霉素抗性和激发EGFP荧光双功能;将编码组织型纤溶酶原激活剂（tPA）的cDNA插入pcDNAEN中CMV启动子下游,构建表达tPA的表达载体pcDNAEN/tPA。结果：流式细胞术分析和tPA纤维蛋白溶解活性测定表明,pcDNAEN/tPA转染CHO-K1细胞的EGFP相对荧光强度（RFT）的自然对数值与tPA表达水平呈明显的直线相关关系,相关系数为0.983;比较部分未经流式细胞仪分选的pcDNAEN/tPA转染阳性细胞克隆和RFT分布在100～1000的pcDNAEN/tPA转染阳性细胞克隆的tPA表达水平,经流式细胞术分选获得的细胞克隆的tPA平均表达水平和最高表达水平分别是未经分选获得的细胞克隆的3.9倍和4.1倍。结论：构建的EGFP-Neomycin融合基因具有双功能,建立了利用流式细胞术筛选外源基因高效表达物细胞株的方法。