绿斑病藻寄生对夏橙叶片光合作用特性的影响

以盆栽的2年生奥灵达夏橙为试材,研究了绿斑病藻寄生对夏橙叶片光合作用特性的影响.结果表明,轻度病叶对叶绿素总量（Chl a+b）、类胡萝卜素含量（Car）、净光合速率（P_n）、胞间CO₂浓度（C_i）、原初光能转换效率（F_v/F_m）、光合电子传递量子效率（ΦPS Ⅱ）和光化学猝灭系数（qP）无显著影响;中度病叶和重度病叶的Chla+b、Car、P_n、F_v/F_m、ΦPS Ⅱ和qP较对照分别下降了23.85%、26.49%、43.3%、4.5%、35.1%、22.5%和37.61%、44.04%、64.5%、8.6%、63.6%、40.1%,与对照差异显著,而C_i较对照显著上升.绿斑病藻的大量寄生减弱了夏橙叶片的光合作用,而净光合速率的下降主要是由非气孔因素限制引起.     

ZnPcS2P2-based photodynamic therapy induces mitochondria-dependent apoptosis in K562 cells

Mitochondria play a key role in the regulation of apoptosis induced by numerous antitumor chemotherapeutic and other toxic agents. Photodynamic therapy (PDT) exerts significant cellular killing efficacy through either an apoptotic or necrotic cell death pathway. This study investigated the mechanism underlying the killing effects of a novel amphipathic photosensitizer [di-sulfonated di-phthalimidomethy lphthalocyanine zinc (ZnPcS2P2)]-mediated photodynamic therapy (ZnPcS2P2-PDT) on K562 cells. Apoptosis was evident in the post-PDT cells through the TdT-mediated dUTP nick end labeling (TUNEL) method and DNA fragmentation assay. After ZnPcS2P2-PDT, K562 cells underwent mitochondria-dependent apoptosis as evidenced by the release of cytochrome c from mitochondria into cytosol, accompanied by mitochondrial membrane potential (A~m) reduction, indicating the opening of the mitochondrial permeability transition pore (PTP). The activities of protease from the caspase family and caspase-3 were also significantly elevated. Furthermore, ZnPcS2P2-PDT down-regulated the expression of chimaeric Bcr-Abl oncoprotein, which is the molecular hallmark of chronic myelogenous leukemia (CML).     

大鼠口面部躯体和上消化道内脏伤害性传入汇聚于三叉神经脊束间质核含CB神经元

三叉神经脊束间质核(interstitial nucleus of the spinal trigeminal tract,INV)为位于三叉神经脊束内的一些灰质团块,经三叉神经和舌咽及迷走神经接受口面部的三叉神经躯体传入与上消化道的内脏伤害性传入。INV内含有大量含calbinding D-28k(CB)神经元,但尚不清楚支配口面部的三叉神经躯体传入与支配上消化道的内脏伤害性传入是否汇聚于INV内含CB的神经元。本文应用跨节追踪法并结合CB和Fos免疫组织化学的激光共聚焦显微镜和电镜技术,研究了下牙槽神经(interior alveolarnerve．IAN)的初级传入和上消化道伤害性信息向INV内含CB神经元的汇聚。结果如下：(1)将生物素化的葡聚糖胺(biotinylated dextran amine,BDA)和甲醛分别注入IAN和上消化道后,BDA跨节标记的浓密初级传入纤维和末梢分布于同侧INV内,在其膨大部较为集中;大量的CB和Fos免疫反应阳性神经元分布于双侧INV内,并与BDA注射侧的BDA标记末梢区相重叠：共聚焦显微镜观察显示,约半数CB免疫反应阳性的神经元同时呈Fos阳性的双标记神经元(74／153),其中部分双标神经元与IAN末梢形成紧密接触状。(2)辣根过氧化物酶(horseradish peroxidase,HRP)注射到IAN后,HRP跨节标记的纤维和末梢的分布与BDA标记的分布相似;电镜下观察到,INV内有大量CB免疫反应阳性神经元的树突和少量胞体,以及HRP标记的传入末梢,其中一些HRP标记的轴突终末分别与CB免疫反应阳性树突和胞体形成非对称型轴-树或轴-体突触。结果提示口面部躯体初级传入信息和内脏伤害性信息汇聚于INV内含CB的神经元上,可能在躯体传入信息对内脏伤害性信息的调制和内脏心血管活动中发挥重要作用。     

慢性间断低氧暴露对大鼠心肌线粒体ATP酶及吸链酶复合物的影响

目的:研究慢性间断低氧暴露对大鼠心肌线粒体Na 、K -ATPase和Ca2 、Mg2 -ATPase以及呼吸链酶复合物Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ活性的影响.方法:经慢性间断低氧暴露(模拟海拔3 000 m、5 000 m分别低氧,每天4 h,共2周,最后8 000 m低氧4 h)和急性低氧(模拟海拔8 000 m低氧4 h)的大鼠,断头处死,迅速取出心脏,分离心肌线粒体,用水解磷酸根法测定ATP酶活性,用Clark氧电极法测定呼吸链酶复合物的活性.结果:①慢性间断低氧暴露对大鼠心肌线粒体Na 、K -ATPase的活性无明显影响.②急性低氧大鼠心肌线粒体Ca2 、Mg2 -ATPase的活性较正常大鼠显著降低,而慢性间断低氧暴露大鼠心肌线粒体Ca2 、Mg2 -ATPase的活性则明显升高,接近正常水平.③急性低氧大鼠心肌线粒体呼吸链酶复合物I(NADH-CoQ还原酶)、复合物Ⅱ(琥珀酸-CoQ还原酶)、复合物IV(细胞色素氧化酶)活性较正常大鼠显著降低,而经慢性间断低氧暴露后,三者的活性均显著提高.相同实验条件下,低氧对复合物Ⅲ(CoQ-细胞色素C还原酶)活性无明显影响.结论:慢性间断低氧暴露可以显著提高心肌线粒体Ca2 、Mg2 -ATPase和呼吸链酶复合物Ⅰ、Ⅱ、Ⅳ的活性,从而改善低氧时心肌线粒体呼吸链的功能,维持心肌正常能量代谢,最终提高心肌收缩和舒张功能.     

反义寡核苷酸对K562细胞的抑制作用及诱导细胞凋亡的研究

目的研究bcr-abl硫代磷酸反义寡脱氧核糖核酸(Aspo)作用于K562细胞后,对细胞mRNA、蛋白水平的影响,以及诱导细胞凋亡情况。方法Aspo与K562细胞共培养后,用流式细胞仪检测P210蛋白表达及细胞凋亡率,RT-PCR半定量检测bcr-ablmRNA表达情况,电镜观察细胞凋亡的形态学改变。结果K562细胞经浓度大于5μmol/Lbcr-ablAspo处理24h,流式细胞仪检测细胞P210蛋白表达下调甚至完全受抑制,10μmol/Lbcr-ablAspo作用48h,细胞bcr-ablmRNA下降45%左右,当细胞初始浓度为1×104/ml时,Aspo作用120h细胞凋亡率20%～30%,当细胞数增加至1×105/ml时,Aspo作用48h即可使30%细胞发生凋亡,电镜下观察到典型凋亡细胞形态学改变。结论bcr-abl反义核酸对K562细胞mRNA水平具有抑制作用,同时还可诱导细胞凋亡。     

PESV 对K562 细胞BCR/ABL 融合基因及凋亡调控因子Bcl-2、Bad 表达的影响

目的:探讨PESV对K562细胞BCR/ABL融合基因及凋亡调控因子bcl-2和bad表达的影响.方法:将体外培养K562细胞,经PESV处理不同时间后,流式细胞术检测细胞凋亡率,荧光定量RT-PCR检测BCR/ABL、Bcl-2、Bad mRNA水平变化.结果:与对照组相比,PESV处理后K562细胞,凋亡率增加,BCR/ABL融合基因表达降低,抗凋亡相关基因Bcl-2 mRNA表达降低,促凋亡基因Bad mRNA表达增加.结论:PESV能降低降低K562细胞BCR/ABL融合基因的表达,可能通过调节Bcl-2和Bad表达,抑制K562细胞增殖,促进其凋亡.     

PI3K/Akt 及其靶蛋白FOXO1 与非酒精性脂肪性肝病

FOXO转录因子是Forkhead蛋白大家族的一个亚群,在人类的4个同源基因中包括FoxO1、FoxO2、FoxO3a和FoxO4。FoxO蛋白质通过丝氨酸或苏氨酸以及赖氨酸残基的磷酸化和乙酰化等后转录修饰后而发挥作用。其中Foxo1是含有高度保守DNA结合位点的核转录蛋白,其主要功能是磷脂酰肌醇3-激酶(PI3K)/蛋白激酶B(Akt)的底物,在胰岛素信号转导中起负性调节作用,Foxo1通过介导胰岛素依赖性微粒体甘油三酯转运蛋白(MTP)的表达,影响肝脏装配和分泌极低密度脂蛋白(VLDL),维持脂代谢稳定。在胰岛素抵抗和脂肪肝状态下,肝细胞核内Foxo1表达明显升高,引起高甘油三酯血症和脂肪肝。有针对性的干预PI3K/Akt及Foxo1的表达,可能从分子机制上为非酒精性脂肪肝的防治提供广阔前景。     

植物Shaker K+通道的研究进展

钾离子通道是植物钾离子吸收的重要途径之一。Shaker K+家族通道是K+通道中最早发现、且研究最深入的K+通道家族。近年来,已从多种植物或同种植物的不同组织器官中分离得到多个Shaker K+钾离子通道基因,如AKT1,AtKC1,QsAKT1,GORK,AKT2等。从结构、表达部位、生理功能和调控等方面介绍了植物Shaker K+通道的研究进展。     

腺病毒E1B-19K基因过表达对HEK293细胞生长和代谢的影响

细胞凋亡是动物细胞大规模培养中影响活细胞密度和目的产品质量的重要因素,过表达抗凋亡基因是目前常用的提高工程细胞凋亡抗性的一种策略。拟在HEK293细胞中过表达腺病毒E1B-19K基因,挑取了不同E1B-19K表达水平的单克隆细胞,考察在不同培养条件下细胞的凋亡水平和代谢情况。E1B-19K的过表达可显著增强细胞在低葡萄糖、低血清和无谷氨酰胺3种培养条件下的抗凋亡能力,使凋亡细胞比例降低60%~80%;E1B-19K的过表达可使批次培养HEK293细胞的衰退期延迟2天,而对细胞的葡萄糖、乳酸和谷氨酰胺等的代谢无显著影响。结果表明,过表达E1B-19K是一种有效减缓HEK293细胞在培养过程中凋亡的策略。     

镍胁迫下安氏伪镖水蚤SSH文库的构建及铁蛋白cDNA的克隆与差异表达

为探讨镍胁迫下桡足类的分子响应机制,以安氏伪镖水蚤为研究对象,利用抑制性消减杂交(suppression subtractive hybridization,SSH)技术,构建了镍胁迫下安氏伪镖水蚤SSHcDNA文库,并随机挑取生长菌落140个克隆子,进行菌液PCR鉴定,计算文库重组率为98.6％,文库容量为1.12×106 cfu.将重组子测序,经BLAST一致性搜索比对分析发现,有一重组片段含有铁蛋白保守结构域,该片段大小为859 bp,连续编码170个氨基酸残基,Gen-Bank登录号为JK312601.半定量PCR证实,镍胁迫24 h后,安氏伪镖水蚤中铁蛋白表达显著上调.本文库的成功构建及铁蛋白cDNA片段的获得为进一步研究镍胁迫下桡足类的分子响应机制奠定了基础.