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炭疽病是油茶的主要病害,造成巨大经济损失。果生刺盘孢是油茶炭疽病优势致病菌。本研究旨在探讨果生刺盘孢中组蛋白乙酰化转移酶Rtt109的生物学功能,为油茶炭疽病防治提供理论依据。通过构建基因敲除载体,根据同源重组原理,敲除目标基因CfRTT109,进一步筛选获得突变体ΔCfrtt109;构建CfRTT109基因回补质粒,转化至突变体ΔCfrtt109,通过荧光筛选回补菌株。生物学表型测定结果显示:相比于野生型,突变体ΔCfrtt109生长速率下降了51.23%,分生孢子的形成率下降了71.89%;在含有5.0mmol/L内质网胁迫剂二硫苏糖醇的PDA培养基中,突变体ΔCfrtt109的生长抑制率为50.75%,显著高于野生型和回补菌株;荧光定量PCR结果表明,与野生型和回补菌株相比,内质网相关的基因HAC1、SCJ1与PDI1基因在突变体中显著上调表达;在含有DNA损伤试剂甲基磺酸甲酯的PDA培养基中,突变体ΔCfrtt109停止生长;进一步研究发现,在甲基磺酸甲酯胁迫下,突变体ΔCfrtt109中的DNA损伤修复基因RHM52、RHM54与REV1表达量上调幅度显著低于野生型;致病力测... 相似文献
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蛋白质一级结构决定着高级结构。蛋白质肽链在适宜条件下会自动卷曲形成其相应的高级结构,即自动发生蛋白质折叠,其自动发生的原因和过程仍不十分清楚,但是随着蛋白质工程的日益兴起,这些与折叠有关的问题也愈显重要,就此已有文章进行过讨论[1,2]。反之,如把新兴的蛋白质工程手段(尤其是基因定点诱变技术)应用来研究这些折叠问题,必将推动蛋白质折叠的研究。本文将就蛋白质折叠与蛋白质工程相互影响的一些例子进行讨论。 相似文献
34.
尽管几百种蛋白质的三维结构已研究得非常清楚,但这些蛋白质折叠成其天然构象的机制与途径仍有待于进一步的研究。有关于蛋白质折叠的一些体外实验确定,决定一个蛋白质三维结构的信息存在于蛋白质的多肽链之中。在体外,一定条件下,在没有任何其他蛋白质存更多还原在下,一些酶和蛋白质可以自我装配成天然构象[1,2]. 相似文献
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新生肽链的折叠与重组蛋白可溶性表达.崔立斌@马清钧.中国人民解放军军事医学科学院生物工程研究所新生肽链的折叠与重组蛋白可溶性表达崔立斌马清钧(中国人民解放军军事医学科学院生物工程研究所100850)大肠杆菌表达系统是目前最常用的外源蛋白表达系统[1]。大肠杆菌遗传背景清楚,容易培养,能大规模发酵,以及大量可供选择利用的克隆和高效表达载体,使之成为人们克隆和表达外源基因的首选菌株[2-5]... 相似文献
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将野生型鸡心脱辅基细胞色素c及其突变体V92A的17位半胱氨酸残基突变为丝氨酸,再将表达纯化的V92A/C17S和W/C17S用荧光探针IAEDANS标记.通过测量AEDANS-Cys-14的荧光光谱、荧光寿命以及AEDANS与Trp-59之间的荧光共振能量转移效率、比较了V92A与野生型鸡心脱辅基细胞色素c因折叠状态不同引起的N端构象状态及肽链间相互作用的差异.结果显示Apo.c无论在低盐浓度下的无规卷曲状态还是高盐浓度下的融球态,V92A都较野生型处于更松散的折叠状态,此外,在鸡心脱辅基细胞色素c的自发折叠中N端肽段并不起主要作用 相似文献
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38.
一种基于连续PMCA的PrPSc体外扩增方法的建立 总被引:1,自引:0,他引:1
为建立一种基于蛋白质错误折叠循环扩增(PMCA)的体外稳定扩增方法以观察PrPSc是否能在体外连续传代,我们分别制备了正常仓鼠和羊瘙痒病因子263K感染的发病仓鼠的全脑匀浆,将两种脑匀浆以不同体积比混合后,分别进行144个循环的直接PMCA和每轮48个循环、共8轮的连续PMCA,用Western blot对PrPSc的扩增情况进行检测.结果显示,与常规的直接PMCA方法相比,连续PMCA能更有效地使低浓度的PrPSc扩增到可检出的水平,表明连续PMCA可以支持羊瘙痒因子263K在体外长期稳定的复制.连续PMCA方法是一种体外高效地扩增PrPSc的方法,有潜力成为一种Prion体外培养方法,用于研究Prion错误折叠和复制机制,以及检测脑组织、外周组织和体液样品中的微量PrPSc. 相似文献
39.
本综述小分子蛋白骨架在提高哓菌体展示肽亲和力方面的作用。目前已知的天然及人工合成的小分子蛋白骨架包括α-螺旋结构,β-折叠片复合结构,α-螺旋结构展示肽亲和力高达87pmol/L,比野生型高12500倍,β-折叠片结构展示肽亲和力也达到20pmol/L,比野生型高600倍,α-螺旋与β-折叠片复合结构主要是锌指结构域,具有结构复杂,亲和力高的特点,小分子蛋白骨架主要通过提高展示肽的空间构象和对蛋白酶的稳定性而提高亲和力,展现出良好的应用前景。 相似文献
40.
Ting Zhu Sher Hayat Khan Deming Zhao Lifeng Yang 《Acta biochimica et biophysica Sinica》2014,(7):531-539
The hallmark of prion disease is the accumulation of mis folded protein PrPsc, which is toxic to neuronal cells. The proteasome system is responsible for the rapid, precise, and timely degradation of proteins and plays an important role in cellular protein quality control. Increasing evidence indi cates impaired activity of proteasomes in prion diseases. Accumulated PrPsc can directly or indirectly affect prote asome activity. Misfolded protein may influence the assem bly and activity of 19S regulatory particle, or post translational modification of 20S proteasome, which may adversely affect the protein degradation activity of protea somes. In this review, we summarized the recent findings concerning the possible regulation of proteasomes in prion and other neurodegenerative diseases. The proteasome system may enhance its degradation activity by changing its structure, and this activity can also be increased by related chaperones when neuronal cells are subject to stress. When the proteasome system is inhibited, degradation of protein aggregates via autophagy may increase as a compensatory system. It is possible that a balance exists between the prote asome and autophagy in vivo; when one is impaired, the ac tivity of the other may increase to maintain homeostasis. However, more studies are needed to elucidate the relation ship between the proteasome system and autophagy. 相似文献