探究杂交瘤技术制备单克隆抗体时与骨髓瘤细胞有效融合的细胞类型

杂交瘤技术制备单克隆抗体,一般取免疫小鼠的脾细胞与骨髓瘤细胞融合,并通过筛选获得杂交瘤细胞后再生产。脾脏内含有B1细胞、Mz-B细胞、T1 B细胞、T2 B细胞、初始B细胞、致敏B细胞、短寿命浆细胞、中心母细胞、中心细胞、抗体分泌细胞等不同类型的细胞。制备单克隆抗体使用的抗原多为蛋白质,经典的免疫策略要用抗原反复刺激免疫动物,所获单克隆抗体类型多为高亲和力的免疫球蛋白G(IgG),结合近期发明的一些新技术等,可认为与骨髓瘤细胞有效融合的主要是由记忆B细胞增殖分化而来的抗体分泌细胞。     

植物果实中维生素C合成代谢及其基因表达研究

维生素C(Vitamin C),又名抗坏血酸（Ascorbate acid,AsA）,是生物体中具有多效功能的必需化合物。整理了植物果实中维生素C的生理功能以及其中参与维生素C合成的L-半乳糖途径、D-半乳糖醛酸途径、L-古洛糖途径、肌醇途径和维生素C循环途径,并分析了相关基因的功能和表达。对参与维生素C合成与循环的16个基因：PMI、PMM、GMP、GME、GGP、GPP、GalDH、GLDH、GalUR、MIOX、GuLDH、MDHAR、DHAR、AO、APX、GR,及其在维生素C代谢途径中的作用进行了综述。植物果实中维生素C合成代谢途径多样,关键基因的表达会在不同程度上影响其合成代谢,了解植物果实中维生素C合成代谢及相关基因的功能和表达,可为生产富含维生素C的转基因水果和蔬菜奠定基础。     

玉米逆境响应相关转录因子ZmC2H2-1基因克隆及功能验证

玉米是我国第一大作物,提高玉米的抗逆性是玉米育种的重要目标性状之一。植物C2H2型锌指蛋白广泛参与植物各个时期的生长发育及逆境应答过程。本研究从玉米中分离了转录因子ZmC2H2-1基因并对其功能进行了初步研究。结果表明,ZmC2H2-1属于C2H2锌指蛋白转录因子家族,编码蛋白主要位于细胞核中,酵母自激活实验表明ZmC2H2-1不具有自激活活性;干旱、盐和ABA等逆境可抑制ZmC2H2-1基因在玉米中的表达;过表达ZmC2H2-1基因的拟南芥叶片失水速率更快,在PEG、高盐和ABA处理条件下,与对照相比转ZmC2H2-1基因拟南芥耐逆性降低,以上结果说明ZmC2H2-1基因是作为玉米抗逆的负调控因子参与了逆境胁迫应答。本研究为深入解析玉米ZmC2H2-1的调控网络和玉米的抗逆调控机制奠定了基础。     

肺炎支原体肺炎患儿血清维生素A和维生素E营养状况

目的：探讨与研究肺炎支原体肺炎患儿机体维生素A和维生素E营养状况水平和临床意义。方法：选择就诊于我院的肺炎支原体肺炎患儿共100例作为观察组,同期就诊于我院的非肺炎支原体肺炎患儿为对照组,分析比较两组患儿的维生素A和维生素E营养状况及临床治疗指标。结果：观察组患儿出现维生素A和维生素E缺乏情况明显高于对照组比率,患儿血清维生素A和维生素E显著低于对照组,差异显著（P＜0.05）;观察组患儿的咳嗽消失时间、平均住院时长和住院费用显著高于对照组,观察组CRP水平明显高于对照组（P＜0.05）;观察组组内分析,维生素A、维生素E缺乏患儿的咳嗽消失时间、平均住院时长和住院费用明显高于对照组,CRP水平高于对照组（P＜0.05）。结论：肺炎支原体肺炎患儿血清维生素A和维生素E水平多处于缺乏状况,可引起临床住院时间延长和费用增加,临床应注意监测以促进患儿康复。     

包装方式对不同品种番茄果实贮藏期间维生素C含量的影响

采用国家标准GB 6195 86方法测定5个品种、2种包装方式和室温（22℃）贮藏期间番茄果实中维生素C含量的变化,探讨不同品种、包装方式和贮藏时间对番茄果实中维生素C含量的影响。结果表明：不同品种番茄果实中维生素C含量差异显著,春桃柿子＞丹东409（1）＞丹东409（2）＞小黄妃＞硬粉;保鲜膜包装对保持番茄果实中维生素C含量显著优于散装,随着贮藏时间的延长,5个品种、2种包装方式的番茄果实中维生素C含量均显著降低,贮藏7d,保鲜膜包装降低30%左右,散装降低近50%。     

不同灌溉方式下秸秆还田对设施土壤碳、氮及蔬菜产量的影响

针对设施土壤C/N 比失调, 蔬菜产量下降的问题, 采用裂区设计大田试验, 研究了秸秆还田(S1)在水肥一体化 (FG)和膜下沟灌(FP)两种灌溉方式对设施土壤碳、氮及蔬菜产量的影响。结果表明, 在水肥一体化 (FG)灌溉方式下的秸秆腐解率相比膜下沟灌(FP)高出10.7 个百分点。在两种灌溉方式下, 秸秆还田均增加了0-20 cm、20-40 cm土壤有机质含量, FG 灌溉方式下分别增加了14.8%和12.4%; FP 灌溉方式下分别增加了12.4%和2.9%。秸秆还田与FP灌溉方式结合, 增加了0-200 cm 土壤剖面硝态氮淋洗的风险。秸秆还田均降低了0-20 cm 和20-40 cm 层次土壤的pH, FG 灌溉方式下分别降低了0.17 和0.10 个单位; FP 灌溉方式下均降低了0.02 个单位。无论是灌溉方式、秸秆还田还是两者的交互作用, 均极显著提高了黄瓜产量, 其中水肥一体化灌溉方式结合秸秆还田的效果最好。     

早实核桃脂肪积累与酶活性动态及其相关性

以绿岭和绿早2个早实核桃品种为试材,对开花50 d后不同发育时期核仁的脂肪含量与3种相关的酶活性动态进行研究,分析不同发育时期影响核桃脂肪含量的关键酶.结果表明: 2个品种的核仁脂肪积累动态一致,核仁在开花后50 d开始固化,花后60～90 d核仁脂肪含量迅速增加,花后90～120 d增长幅度变缓,花后120～130 d脂肪含量停止增长.利用Logistic模型对核桃脂肪积累进程进行拟合(P<0.01),绿岭脂肪积累盛期为开花后57.8～85.8 d,绿早为开花后67.4～92.1 d.乙酰辅酶A羧化酶(ACCase)、6-磷酸葡萄糖脱氢酶(G6PDH)和丙酮酸激酶(PK)活性均在花后50～100 d呈上升趋势,随后酶活性呈下降趋势.核仁脂肪含量与ACCase活性呈显著正相关;脂肪积累速率与PK活性呈显著正相关;不同发育时期脂肪含量与酶活性的相关性不同.花后50～100 d是核桃核仁脂肪合成旺盛的时期,此时加强田间栽培管理可以提高脂肪含量.在核桃脂肪合成前期G6PDH是影响脂肪含量的主要酶,PK活性影响丙酮酸形成,从而间接影响脂肪的合成.ACCase活性影响了最终的脂肪含量,并在脂肪合成的各个时期均起到重要的调节作用,是影响核桃脂肪合成的关键酶.     

人质子感知受体G2A和OGR1在低氧性肺动脉高压患者外周血细胞中的表达

目的：检测人质子感知受体G蛋白偶联受体2A （G2A）和卵巢癌G蛋白偶联受体1（OGR1）在低氧性肺动脉高压（HPH）患者外周血细胞中的变化。方法：研究对象选取31例HPH患者为低氧性肺动脉高压组（HPH组）,男性16例,女性15例,年龄（65.19 ±5.86）岁。同时符合中华医学会呼吸病学分会慢性阻塞性肺疾病学组诊断标准和呼吸衰竭诊断标准,选取30例健康体检者为正常组（NC组）,男15例,女15例,年龄（63.47 ±6.16）岁。心脏彩超计算HPH组肺动脉压力、进行血气分析和肺功能检测,采集外周血检测G2A、OGR1基因mRNA表达水平、血清肿瘤坏死因子α（TNF-α）水平。结果：HPH组PaCO₂较NC组明显增高（P<0.05）,1 s用力呼气容积占预计值的百分比（FEV1pro%）和1 s用力呼气容积与用力肺活量比值（FEV1/FVC）明显低于NC组（P<0.05）。HPH组外周血中G2A mRNA及TNF-α含量明显高于NC组（P<0.05）。OGR1 mRNA与NC组无差别。HPH组G2A mRNA及TNF-α表达与肺动脉压力呈显著正相关。结论：肺动脉高压患者外周血细胞中质子感知受体G2A表达增加,TNF-α水平增加,G2A的表达和TNF-α水平与肺动脉压力呈明显正相关。     

热休克蛋白A5介导的自噬在小鼠脑缺血/再灌注损伤中的作用

目的：探讨热休克蛋白A5（HSPA5）诱导的自噬在小鼠脑缺血/再灌注损伤中的作用。方法：将36只BALB/c小鼠随机分为sham、缺血再灌注（I/R）、vehicle + I/R、3-甲基腺嘌呤（3-MA） + I/R、scramble siRNA + I/R和HSPA5 siRNA + I/R组（n=6）。Sham组只进行手术操作,不插入线栓。I/R采用大脑中动脉阻塞（MCAO）60 min后再灌注24 h。Vehicle + I/R组和3-MA + I/R将5μl 0.9% NaCl或3-MA （30 mg/ml）在MCAO前30 min侧脑室注射。scramble siRNA + I/R组和HSPA5 siRNA + I/R组将5μl scramble siRNA或HSPA5 siRNA （2μg/μl）在MCAO前24 h侧脑室注射。检测神经细胞内自噬体、缺血大脑皮层（LC3）-Ⅱ/LC3-I表达、神经元损伤程度及神经功能缺损。结果：显微镜下sham组小鼠大脑皮层神经细胞形态正常;I/R组小鼠缺血大脑皮层神经元胞质中细胞器减少,自噬体形成。与sham组比较,I/R组缺血大脑皮层LC3-Ⅱ/LC3-I蛋白表达水平显著增高（P < 0.05）;与I/R组相比,3-MA + I/R组或HSPA5 siRNA + I/R组缺血大脑皮层LC3-Ⅱ/LC3-I蛋白表达明显减少（P < 0.05）;3-MA + I/R组及HSPA5 siR-NA + I/R组I/R后脑缺血性损伤及神经系统症状加重（P < 0.05）。结论：HSPA5诱导自噬可能在小鼠局灶性I/R损伤中发挥保护作用。     

雷公藤内酯醇对多发性骨髓瘤细胞凋亡及组蛋白H3K4甲基化的影响

目的：探讨雷公藤内酯醇（TPL）对多发性骨髓瘤RPMI8226细胞增殖、凋亡和组蛋白H3K4甲基化的影响。方法：以人多发性骨髓瘤细胞株RPMI8226为研究对象,在不同浓度（10、20、40、80、160 nmol/L） TPL中共培养不同时间（24 h、48 h、72 h）后,采用噻唑蓝（MTT）法检测细胞增殖活性;流式细胞术检测细胞凋亡和细胞周期;Western blot法检测组蛋白H3K4me2、H3K4me3的甲基化状态,实时荧光定量RT-PCR分析组蛋白甲基化酶SMYD3和组蛋白去甲基化酶LSD1的表达水平。结果：TPL对RPMI8226细胞有明显的增殖抑制作用,呈剂量和时间依赖性（P<0.05）;TPL对RPMI8226细胞有明显诱导凋亡的作用,并且随着TPL作用浓度的增加,细胞凋亡比例逐渐增加（P<0.05）;同时TPL还可以诱导RPMI8226细胞周期阻滞于G₂/M期;TPL以浓度依赖性降低组蛋白H3K4me2、H3K4me3的甲基化水平（P<0.05,P<0.01）,并抑制SMYD3和上调LSD1的表达（P<0.05）。结论：TPL可抑制RPMI8226细胞增殖、引起细胞周期阻滞于G₂/M期,并诱导其凋亡;通过抑制组蛋白甲基化酶SMYD3和增强组蛋白去甲基化酶LSD1的表达,降低组蛋白H3K4me3和H3K4me2的甲基化水平,这可能是TPL诱导多发性骨髓瘤细胞凋亡和抗肿瘤作用的机制之一。