血根碱通过NF-κB信号通路调控牙周膜干细胞成骨分化

摘要 目的：探究血根碱（SAN）对肿瘤坏死因子-α（TNF-α）处理的人牙周膜干细胞（hPDLSCs）成骨分化的影响及机制。方法：将hPDLSCs分为6组：Control组、TNF-α组、0.1SAN组、1SAN组、10SAN组和100SAN组,所有hPDLSCs均用成骨诱导培养液培养。除Control组外,其他组细胞培养液中均添加10 ng/mL的TNF-α。0.1SAN组、1SAN组、10SAN组和100SAN组细胞培养液中分别添加0、0.1、1、10和100 μmol/L的血根碱。各组hPDLSCs均在37℃、5% CO₂条件下培养21 d。通过可见光比色法检测碱性磷酸酶（ALP）活性。通过茜素红染色观察钙化结节形成,并统计OD_{562 nm} （代表钙化结节形成量）。通过qRT-PCR检测Runt相关转录因子2（RUNX2）、骨钙素（OCN）、osterix（OSX）、牙骨质附着蛋白（CAP）、Smad4转录水平。通过Western blot检测核因子-κB（NF-κB）p65磷酸化水平。结果：与Control组比较,TNF-α组细胞的相对ALP活性降低和钙化结节形成量以及RUNX2、OCN、OSX、CAP和Smad4的mRNA相对表达量降低（P<0.05）,p-NF-κB p65/NF-κB p65升高（P<0.05）。与TNF-α组比较,1SAN组、10SAN组和100SAN组的相对ALP活性和钙化结节形成量以及RUNX2、OCN、OSX、CAP和Smad4的mRNA相对表达量升高（P<0.05）,p-NF-κB p65/NF-κB p65降低（P<0.05）。结论：血根碱可促进TNF-α处理的hPDLSCs的成骨分化,其机制可能与抑制NF-κB的激活有关,血根碱可能是促进炎性微环境中hPDLSCs成骨分化的候选药物。     

miR-455-5p靶向SOCS3抑制RSV感染致气道上皮炎症反应的机制研究

摘要 目的：揭示miR-455-5p对呼吸道合胞病毒（RSV）感染致气道上皮细胞炎症反应的作用机制。方法：qRT-PCR检测30例健康体检儿童（健康组）、RSV感染轻症组（n=41）和重症组（n=31）患儿血清miR-455-5p水平。将16HBE细胞分为Control组、NC-agomir组、miR-455-5p-agomir组、NC-antagomir组、miR-455-5p-antagomir组。使用Lipofectamine 3000转染16HBE细胞后培养48 h后,分为Blank组、NC组（转染了NC-agomir的细胞）、RSV+NC-agomir组、RSV+miR-455-5p-agomir组,用RSV病毒液感染RSV+NC-agomir组和RSV+miR-455-5p-agomir组16HBE细胞,Blank组和NC组16HBE细胞正常培养。用CCK-8法和EdU法检测细胞增殖、TUNEL法检测细胞凋亡、ELISA法检测上清液中TNF-α、IL-6、IL-8水平,qRT-PCR检测miR-455-5p和SOCS3的mRNA水平,Western blot检测SOCS3、IFN-α、STAT1、STAT2、p-STAT1和p-STAT2的蛋白水平。结果：与健康组相比,轻症组和重症组患儿的血清miR-455-5p水平降低（P<0.05）。与轻症组相比,重症组的血清miR-455-5p水平降低（P<0.05）。与Control组和NC-agomir组相比,miR-455-5p-agomir组16HBE细胞的miR-455-5p水平、相对细胞活力和EdU阳性率升高（P<0.05）,TUNEL阳性率降低（P<0.05）,上清液中的TNF-α、IL-6和IL-8水平降低（P<0.05）,SOCS3 mRNA和蛋白水平降低（P<0.05）,IFN-α蛋白、STAT1和STAT2磷酸化水平升高（P<0.05）。与Control组和NC-antagomir组相比,miR-455-5p-antagomir组16HBE细胞的miR-455-5p水平、相对细胞活力和EdU阳性率降低（P<0.05）,TUNEL阳性率升高（P<0.05）,上清液中的TNF-α、IL-6和IL-8水平升高（P<0.05）,SOCS3 mRNA和蛋白水平升高（P<0.05）,IFN-α蛋白、STAT1和STAT2磷酸化水平降低（P<0.05）。与Blank组和NC组相比,RSV+NC-agomir组16HBE细胞的miR-455-5p水平、相对细胞活力和EdU阳性率降低（P<0.05）,TUNEL阳性率升高（P<0.05）,上清液中的TNF-α、IL-6和IL-8水平升高（P<0.05）,SOCS3 mRNA和蛋白水平升高（P<0.05）,IFN-α蛋白、STAT1和STAT2磷酸化水平降低（P<0.05）。与RSV+NC-agomir组相比,RSV+miR-455-5p-agomir组的miR-455-5p水平、相对细胞活力和EdU阳性率升高（P<0.05）,TUNEL阳性率降低（P<0.05）,上清液中的TNF-α、IL-6和IL-8水平降低（P<0.05）,SOCS3 mRNA和蛋白水平降低（P<0.05）,IFN-α蛋白、STAT1和STAT2磷酸化水平升高（P<0.05）。结论：miR-455-5p在RSV感染患儿血清中下调,上调miR-455-5p通过抑制SOCS3的转录和表达从而激活RSV感染的16HBE细胞中IFN-α介导的抗病毒反应。     

甲硫氨酸限制对骨肉瘤细胞增殖、凋亡及铁死亡的影响

摘要 目的：探讨甲硫氨酸限制对骨肉瘤细胞增殖,凋亡和铁死亡的影响。方法：使用细胞计数检测剥夺甲硫氨酸对三株不同的骨肉瘤细胞系增殖的影响;高通量测序（RNA-seq）分析甲硫氨酸限制后骨肉瘤细胞的转录组学变化;流式细胞术检测细胞周期,凋亡以及ROS,脂质ROS水平;Western blot检测铁死亡关键蛋白谷胱甘肽过氧化物GPX4以及铁死亡标志蛋白前列腺素内过氧化物合成Cox-2的表达。结果：甲硫氨酸限制显著抑制骨肉瘤细胞的增殖（P<0.001）;RNA-seq分析筛选出1719个差异表达基因,基因富集分析发现甲硫氨酸限制可显著激活铁死亡通路并显著抑制细胞周期通路;细胞实验证实甲硫氨酸限制将骨肉瘤细胞阻滞在G2M期,显著诱导凋亡细胞比例增加;同时,细胞内Cox-2的表达增加,GPX4的活性降低,活性氧和脂质活性氧积累,最终导致细胞死亡,且这种作用可以被铁死亡抑制剂Fer-1部分挽救。结论：本研究的结果为甲硫氨酸限制治疗骨肉瘤提供了一定的科学依据。     

星形胶质细胞铁代谢在帕金森病中的作用机制研究进展

脑铁累积及其诱导的氧化应激加剧了帕金森病(Parkinson's disease,PD)的发生发展.脑内星形胶质细胞存在区域异质性,PD中脑多巴胺能神经元死亡与星形胶质细胞之间存在相关性.该文概述了星形胶质细胞,黑质铁代谢,以及星形胶质细胞铁代谢相关分子铁调节蛋白、铁调素和铜蓝蛋白在PD发生发展中的作用,希望能为今后深...     

羰基化蛋白质组学研究规律运动调控大鼠脑纹状体细胞凋亡的作用与适应性机制

为研究探讨规律运动对老年大鼠纹状体蛋白质氧化应激与细胞凋亡的影响,通过差异羰基化蛋白质组学特征分析,筛选靶标蛋白质并阐明其作用机制.将24只健康雄性23月龄老年大鼠随机分为静息组(Con-SED)和规律运动组(Aero-EXE).采用运动强度相当于最大摄氧量(VO2max)60％～65％逐渐递增到70％ ～75％的10...     

右美托咪定上调HIF-1α抑制NLRP3炎性体的激活减轻糖尿病小鼠心肌缺血再灌注损伤

摘要 目的：探讨右美托咪定（DEX）对糖尿病小鼠心肌缺血再灌注损伤的保护作用及可能分子机制。方法：将60只8周龄的SPF级C57BL小鼠高脂喂养6周,第7周通过腹腔注射链脲佐菌素（STZ）45 mg/kg/天,1次/天,连续5天,建立2型糖尿病模型,建模后采用随机数字表法分为假手术组（sham组）、缺血再灌注组（I/R组）、缺氧诱导因子-1α（HIF-1α）抑制剂2ME2组（2ME2组）、DEX组、DEX+2ME2组（DM组）,每组12只。假手术组仅切开皮肤后缝合,其余四组开胸结扎冠状动脉左前降支,缺血60 min后松开结扎线结,再灌注120 min建立缺血再灌注损伤模型。于再灌注120 min时抽取小鼠腹主动脉血,ELISA检测血清肌钙蛋白I（cTnI）、白介素-1β（IL-1β）、肿瘤坏死因子-α（TNF-α）的浓度,随后处死小鼠,分离左心室,HE染色观察心肌组织形态结构,Western blot检测HIF-1α、nod样受体蛋白3（NLRP3）的表达量,再灌注24 h时超声心动图评估心功能。结果：与sham组相比,I/R组、2ME2组、DEX组、DM组cTnI、IL-1β,TNF-α浓度明显升高,心肌组织结构紊乱,心肌纤维断裂增加,心肌细胞明显肿胀,炎性细胞浸润增加,心肌组织NLRP3表达量显著增加,每搏量（SV）、射血分数（EF）%、短轴缩短率（FS）%明显下降（P＜0.05）;与I/R组相比,DEX组、DM组HIF-1α表达量明显增加,NLRP3表达明显降低,cTnI、IL-1β,TNF-α浓度明显下降,心肌组织结构明显改善,炎性细胞浸润明显减少,SV,EF、FS明显升高（P＜0.05）;与DEX组相比,DM组HIF-1α表达量明显降低,NLRP3表达量明显增加,cTnI、IL-1β、TNF-α浓度明显增加,心肌组织结构紊乱,心肌纤维断裂增加,心肌细胞明显肿胀,炎性细胞浸润增加,SV,EF、FS明显降低（P＜0.05）。结论：DEX可能通过上调心肌组织HIF-1α的表达,抑制NLRP3炎性体的激活,减轻心脏炎症反应,改善糖尿病小鼠心肌缺血再灌注损伤。     

胃饥饿素对哮喘大鼠气道组织损伤、血清Th1/Th2细胞因子以及TLR4/NF-κB信号通路的影响

摘要 目的：探讨胃饥饿素介导Toll样受体4（TLR4）/核转录因子-κB（NF-κB）信号通路对哮喘模型大鼠的气道组织损伤和血清Th1/Th2细胞因子的影响机制。方法：选择健康Wistar雄性大鼠平均7周龄（体重平均220 g）共40只,随机分为4组,每组10只,分别为对照组、模型组、胃饥饿素低浓度组（1 μmol/L）和高浓度组（5 μmol/L）。除了对照组,其他三组复制急性哮喘模型,胃饥饿素低浓度组和高浓度组腹腔注射10 mL/kg胃饥饿素,对照组和模型组注射等量生理盐水。造模结束24 h 后评估各组大鼠的哮喘症状评分,检测血清中性粒细胞与淋巴细胞百分比,计算中性粒细胞与淋巴细胞比值（NLR）,ELISA法检测血清IgE、Th1型细胞因子IFN-γ和Th2 型细胞因子 IL-4,计算IFN-γ/IL-4,HE染色肺组织计算气道壁厚度和气管平滑肌厚度,评估气道损伤程度,Western blot法检测肺组织TLR4和NF-κB p65蛋白相对表达量。结果：与对照组相比,模型组大鼠哮喘症状评分、淋巴细胞百分比、IgE、IL-4、气道壁厚度和气管平滑肌厚度、TLR4和NF-κB p65蛋白相对表达量均显著增加,而NLR、IFN-γ和IFN-γ/IL-4显著降低（P＜0.05）。与模型组相比,胃饥饿素低浓度组和高浓度组大鼠哮喘症状评分、淋巴细胞百分比、IgE、IL-4、气道壁厚度和气管平滑肌厚度、TLR4和NF-κB p65蛋白相对表达量明显降低,而NLR、IFN-γ和IFN-γ/IL-4明显升高（P＜0.05）。与低浓度组相比,高浓度组上述指标也存在显著差异（P＜0.05）。结论：胃饥饿素可能通过抑制TLR4/ NF-κB信号通路活性,进而改善哮喘症状,降低炎症反应,调节Th1/Th2平衡,减轻气道组织损伤,且表现出一定的浓度依赖性。胃饥饿素有望成为临床干预哮喘的新途径。     

TMED10对骨关节炎中TGF-β/Smads信号通路的影响

摘要 目的：探究跨膜P24转运蛋白10（TMED10）对骨关节炎中转化生长因子-β（TGF-β）/Smads信号通路的影响。方法：将大鼠软骨细胞分为Control组、IL-1β组、NC-sh+IL-1β组、TMED10-sh+IL-1β组、NC-OE+IL-1β组和TMED10-OE+IL-1β组。Control组和IL-1β组细胞不进行转染处理,NC-sh+IL-1β组、TMED10-sh+IL-1β组、NC-OE+IL-1β组和TMED10-OE+IL-1β组细胞分别转染NC-sh、TMED10-sh、NC-OE和TMED10-OE。转染后,除Control组之外,其他组软骨细胞均用白介素-1β（IL-1β）（10 ng/mL）处理24 h模拟OA软骨细胞的病理微环境。通过MTT法检测细胞增殖,通过TUNEL法检测细胞凋亡。采用前交叉韧带切断加内侧半月板部分切除法建立OA大鼠模型,将OA大鼠分为OA组、OA+NC-sh组和OA+TMED10-sh组（n=12）,Sham组（n=12）大鼠进行假手术操作。Sham组和OA组大鼠关节腔内注射40 μL生理盐水,OA+NC-sh组和OA+TMED10-sh组大鼠关节腔内分别注射40 μL的NC-sh和TMED10-sh（滴度为1×10⁹ TU/mL）,每周注射1次,共4周。采用番红O/固绿染色法评价膝关节软骨形态,采用TUNEL法检测软骨细胞凋亡。采用RT-qPCR检测软骨细胞和大鼠关节软骨中TMED10的mRNA水平,采用Western blot检测软骨细胞和大鼠关节软骨中TMED10、TGF-β1、Smad2、p-Smad2、Smad3、p-Smad3、Collagen II和MMP-13的蛋白表达水平。结果：与Control组比较,IL-1β组TUNEL阳性率、TMED10 mRNA和TMED10、MMP-13蛋白水平均升高（P<0.05）,相对细胞活力以及TGF-β1、p-Smad2/Smad2、p-Smad3/Smad3和Collagen II的蛋白水平均降低（P<0.05）。与IL-1β组和NC-sh+IL-1β组比较,TMED10-sh+IL-1β组TUNEL阳性率、TMED10 mRNA水平和TMED10、MMP-13的蛋白水平均降低（P<0.05）,相对细胞活力以及TGF-β1、p-Smad2/Smad2、p-Smad3/Smad3和Collagen II的蛋白水平均升高（P<0.05）。与IL-1β组和NC-OE+IL-1β组比较,TMED10-OE+IL-1β组TUNEL阳性率、TMED10 mRNA水平和TMED10、MMP-13的蛋白水平均升高（P<0.05）,相对细胞活力以及TGF-β1、p-Smad2/Smad2、p-Smad3/Smad3和Collagen II的蛋白水平均降低（P<0.05）。与Sham组比较,OA组大鼠的OARSI评分、TUNEL阳性率、TMED10 mRNA水平以及TMED10和MMP-13的蛋白水平均升高（P<0.05）,TGF-β1、p-Smad2/Smad2、p-Smad3/Smad3和Collagen II蛋白水平均降低（P<0.05）。与OA组和OA+NC-sh组比较,OA+TMED10-sh组大鼠的OARSI评分、TUNEL阳性率、TMED10 mRNA水平以及TMED10和MMP-13的蛋白水平均降低（P<0.05）,TGF-β1、p-Smad2/Smad2、p-Smad3/Smad3和Collagen II蛋白水平均升高（P<0.05）。结论：本研究表明TMED10可能通过抑制TGF-β/Smads信号通路导致软骨细胞丢失和软骨退变,TMED10/TGF-β/Smads信号通路可能是治疗OA的新靶标。     

血管生成素样蛋白4和Ⅱ型肺泡细胞表面抗原-6与急性呼吸窘迫综合征严重程度的关系及对预后的评估效能研究

摘要 目的：分析血管生成素样蛋白4(ANGPTL4)和Ⅱ型肺泡细胞表面抗原-6(KL-6)与急性呼吸窘迫综合征严重程度的关系及对预后的评估效能。方法：选择我院自2020年1月至2022年12月收治的120例急性呼吸窘迫综合征患者作为研究对象（观察组）,根据氧合指数（PaO₂/FiO₂）分为轻度组、中度组和重度组;另选120例非急性呼吸窘迫综合征患者作为对照组。检测所有患者血清ANGPTL4和KL-6的表达水平,分析血清ANGPTL4和KL-6与APACHE Ⅱ评分、PaO₂/FiO₂的关系,使用受试者工作特征曲线（ROC）下面积（AUC）评价血清ANGPTL4联合KL-6对急性呼吸窘迫综合征预后的评估效能。结果：对比对照组,观察组血清ANGPTL4、KL-6的表达水平均明显升高（P＜0.05）;血清ANGPTL4、KL-6的表达水平在轻度组、中度组和重度组中差异有统计学意义,且急性呼吸窘迫综合征越严重,升高越明显（P＜0.05）;经Pearson相关性分析,急性呼吸窘迫综合征患者血清ANGPTL4、KL-6的表达水平与PaO₂/FiO₂呈负相关,与APACHE Ⅱ评分呈正相关（P＜0.05）;经ROC曲线分析,血清ANGPTL4联合KL-6预测急性呼吸窘迫综合征患者入院28d内死亡的敏感度为90.14%、特异度为65.74%,AUC为0.900。结论：血清ANGPTL4、KL-6表达水平升高与急性呼吸窘迫综合征严重程度增大密切相关,两者联合在患者预后评估中具有一定价值,可作为判断病情及预后的辅助指标。     

CYFRA21-1、MMP-3及CEA 和细胞学联合检查对恶性胸腔积液的诊断价值分析

摘要 目的：探讨细胞角蛋白19片段（CYFRA21-1）、基质金属蛋白酶-3（MMP-3）及癌胚抗原（CEA） 和细胞学联合检查对恶性胸腔积液的诊断价值。方法：选择2020年1月至2023年1月我院接诊的100例胸腔积液患者进行研究,并根据病理结果分为实验组47例（病理检查结果恶性）,对照组53例（病理检查结果良性）,分析血清CYFRA21-1、MMP-3及CEA 和细胞学水平变化情况及其的诊断价值。结果：实验组患者血清血清CYFRA21-1、MMP-3及CEA水平显著高于对照组,差异显著（P＜0.05）;实验组患者CYFRA21-1、MMP-3及CEA 和细胞学阳性率均显著高于对照组,差异显著（P＜0.05）;CYFRA21-1诊断恶性胸腔积液的AUC为0.989,95%CI为0.977~1.000;MMP-3诊断恶性胸腔积液的AUC为0.979,95%CI为0.964~0.994;CEA 诊断恶性胸腔积液的AUC为0.982,95%CI为0.967~0.997;细胞学诊断恶性胸腔积液的AUC为0.823,95%CI为0.766~0.879,联合检测时AUC为0.995,95%CI为0.990~1.000,较单独检测曲线下面积比较显著差异;且特异度、准确度均较单独检测更高。结论：CYFRA21-1、MMP-3及CEA 和细胞学联合检查可有效提高诊断恶性胸腔积液的准确性,临床应用价值高。