短间隔连续部分肝切除(SISPH)对大鼠肝ACP、AKP、 HSC70/HSP68和PCNA的影响

本文以间隔时间(4h和36h)相互交叉的短间隔连续部分肝切除(36-4-4 SISPH和4-36-36-36SISPH)为模型,分析了ACP、AKP、HSC70/HSP68和PCNA的活性和含量变化.结果表明140 kD的ACP和AKP活性在两种模型中都随着肝切除次数的增加而增加,而160 kD的AKP和ACP则与此相反;PCNA在4-36-36-36 SISPH中比在36-4-4SISPH中表达更多,而HSC70/HSP68的表达则与此相反.可见,连续部分肝切除的次数和方式能影响ACP、AKP、HSC70/HSP70和PCNA的活性和含量,并讨论了其可能的机理和生理意义.     

Q热疫苗研究进展

本文对Q热疫苗的研究进行了回顾、总结。灭活疫苗能刺激机体产生较强的抗Q热特异性体液免疫和细胞免疫，免疫保护效果好且持续时间长。但是，灭活疫苗有较强的副反应，可引起局部脓肿等副反应。减毒疫苗虽然免疫保护效果好，但可能有毒力恢复的危险。亚单位疫苗主要有CMR、TCAE和LPS，其中CMR和TCAE具有与灭活疫苗相近的保护效果，副反应很小，已进入临床研究。目前研究较多的保护性抗原蛋白有27kD、30kD、34kD、热休克蛋白等主要表面抗原，它们有可能发展成为重组亚单位疫苗。多价亚单位疫苗、DNA疫苗以及以活菌为载体的重组菌苗将是有前途的新型Q热疫苗。     

黑籽南瓜NBS类基因CfRFN2的克隆及VIGS验证

黑籽南瓜(Cucurbita ficifolia)是云南特有的具有高抗枯萎病遗传性状的瓜类种质资源。为鉴定黑籽南瓜中NBS-LRR类基因的抗病功能,该研究从其叶片中克隆了NBS类基因CfRFN2 (GenBank ID:MK618462),测序全长为4 303 bp,完整的编码框长度为4 092 bp,编码1 363个氨基酸残基,该基因注释为拟南芥抗病蛋白At4g27190类转录体X1的同源基因,含有1个NB-ARC和2个LRR结构域,属于具有信号肽的可溶性蛋白。核苷酸相似性分析显示,CfRFN2与其他瓜类NBS类基因相似性在87%～98%之间;系统进化树分析表明,CfRFN2蛋白和瓜类的其他NBS类抗病蛋白聚为一个分支,其中CfRFN2蛋白与中国南瓜和美洲南瓜的RPS2、印度南瓜的RPS2-like亲缘关系最近,其次是黄瓜的At4g27190和苦瓜的At4g27220,与甜瓜的Atg27190亲缘关系相对较远;组织表达特性分析表明,CfRFN2基因在黑籽南瓜叶片中表达量最高,其次是茎,而在果皮和根中表达量较低。该研究采用烟草脆裂病毒载体系统,构建了黑籽南瓜VIGS沉默载体pTRV2-CfRFN2,含沉默载体的农杆菌侵染黑籽南瓜幼苗后接种枯萎病菌,qRT-PCR检测表明,接种后2 d和4 d的转pTRV2-CfRFN2沉默组植株的CfRFN2基因表达量比接种后同时期的野生型植株显著降低(分别下降34.75%和98.27%),病情指数增加为野生型的1.32倍,初步证明黑籽南瓜CfRFN2基因具有抗枯萎病的功能,推测该基因可能在黑籽南瓜抗枯萎病防御过程中发挥着重要作用。该研究中NBS类基因CfRFN2的克隆和VIGS验证为黑籽南瓜更多优异基因的克隆和功能验证奠定了前期基础,也为发掘黑籽南瓜优异抗病基因和开展瓜类分子育种提供新信息。     

热水处理对金柑果实采后腐烂及生理特性的影响

金柑是果皮和果肉同食的柑果类型,对采后处理要求极为严格。该研究以金柑(Fortunella crassifolia)为材料,研究了其经30、40和50℃热水浸泡后果实的腐烂率、失重率、可溶性固形物、硬度、有机酸、细胞渗透率以及抗氧化酶活性变化。结果表明:经30℃热水处理5 min的果实失重率高于对照,而经40℃和50℃处理的果实失重率低于对照或差异不显著。经热水处理的果实总酸含量略低于对照,可溶性固形物含量在18%上下波动且差异不显著。热水处理可提高果实硬度,降低贮藏前期果实细胞渗透率以及贮藏过程中果实过氧化物酶和超氧化物歧化酶活性,激发过氧化氢含量升高,可有效降低贮藏过程中金柑果实腐烂率,但不同采收期的金柑所需的热水处理温度和时间不同。对于1月初采收的果实,处理时间为5 min或10 min可降低果实腐烂率;2月初采收的果实,40℃或50℃热水处理10 min可有效降低果实腐烂率;3月初采收的果实,当处理温度达到50℃,处理时间达到10 min,才可有效降低果实腐烂率,且对果实品质没有明显的不利影响。     

快速展示糖苷水解酶活性架构单点突变导致结合力变化的电泳技术

酶分子在长期进化过程中形成一系列氨基酸残基组成的活性架构,参与底物的识别、结合与催化过程,而活性架构中相应氨基酸残基是如何影响酶分子结合底物的能力,进而影响酶分子的催化效率,一直是酶分子理性改造研究的热点.利用亲和电泳技术,可以快速展示内切纤维素酶Tr Cel12A和木聚糖酶Tl Xyn A活性架构中不同突变体的催化活性及其迁移率的变化,进而通过在不同底物浓度凝胶中蛋白质相对迁移率变化程度的定量回归分析,发现由氨基酸单点突变导致蛋白质迁移率的相对变化,可以定量表征酶分子突变前后结合底物能力的变化.亲和电泳测定的有效阻滞常数Kb值与等温滴定量热法和荧光光谱法测定的相关参数比较具有明显相关性.由于亲和电泳技术在测定酶分子与底物的结合能力时具有简便、快速、灵敏的特点,因而可作为常规生化实验室常规普筛技术来检测突变文库中系列突变体导致结合力的变化.     

梅氏热厉螨寄生对西方蜜蜂生存率和取食量的影响

【目的】梅氏热厉螨Tropilaelapsmercedesae是亚洲地区西方蜜蜂Apismellifera的重要害螨,给我国蜂产业造成巨大损失。该研究主要探究了梅氏热厉螨寄生对西方蜜蜂生存、糖水和花粉取食量及体内病毒变化的影响。【方法】从蜂群中收集被梅氏热厉螨寄生的和未被寄生的新出房蜂,并在室内饲养15 d,统计蜜蜂的存活率。统计蜜蜂每天对糖水和花粉取食量及对总的糖水和花粉取食量。检测7日龄幼虫、新出房蜜蜂和人工饲养15 d的蜜蜂体内BQCV、DWV、VDV-1、ABPV、CBPV、IAPV、SBV和CSBV8种病毒的感染情况。【结果】梅氏热厉螨寄生使蜜蜂对糖水和花粉取食量显著增加,并且寄生显著降低蜜蜂寿命。7日龄蜜蜂幼虫体内均检出DWV;新出房蜂体内均检测到DWV和IAPV;人工饲养15 d的蜜蜂,对照组蜜蜂体内检测到DWV,梅氏热厉螨寄生的蜜蜂体内检测到BQCV、DWV、IAPV和VDV-1病毒。【结论】研究发现,梅氏热厉螨寄生的蜜蜂随着存活时间的增加病毒种类增多。即使梅氏热厉螨寄生未引起某些蜜蜂形态变化,但寄生可能导致体内病毒增加,病毒的复制和免疫反应使蜜蜂能量消耗增多,从而致使蜜蜂寿命缩短。     

嗜热真菌 Thermomyces lanuginosus热稳定a—淀粉酶的纯化及特性

嗜热真菌Thermomyces lanuginosus在液体培养基中于50℃静止培养14d,培养液经硫酸铵分级沉淀、DEAE-Toyopearl离子交换层析、Butyl-Toyopearl疏水层析、SephacrylS-300分子筛层析和FPLC MonoQ离子交换层析,得到了凝胶电泳均一的淀粉酶。纯酶与淀粉反应不同时间后,用碘色反应法和DNS法测定淀粉和还原糖量,结果显示淀粉量在开始时迅速下降,但还原糖的量却增加很慢;产物经TLC层析分析为麦芽糖和少量葡萄糖。由此说明它为α-淀粉酶。用SDS-PAGE和Sephacryl S-300分子筛层析测定分子量为56000,不具亚基。酶反应最适温度和pH分别为65℃和4.5～5.0。在pH4.6条件下,酶在50℃是稳定的;60℃保温1h,仍保留94％的原酶活性;酶在70℃的半衰期为10min。钙离子对酶有激活作用。酶对糖原和糊精有一定的水解能力。     

热休克蛋白的生物医学功能

热休克蛋白（Ｈｓｐ）是真核细胞和原核细胞在应激条件下产生的一种蛋白质,在正常状态的细胞中也广泛存在。Ｈｓｐ是生物种系发育中最保守的蛋白质之一,其主要功能是促进新生多肽的正确折叠并维持折叠状态,从而发挥调节细胞生长、分化、生存的功能。Ｈｓｐ还有调节免疫功能、参与疾病发生的作用。