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外源钙调素和钙调素拮抗剂对烟草离体花粉管生长和生殖核分裂的调节 总被引:1,自引:0,他引:1
外源花椰菜钙调素(CaM)、牛脑CaMagarose以及CaM拮抗剂TFP对花粉管生长与生殖核分裂的作用均具有浓度和时间效应,CaM在花粉管生长早期,较低浓度能促进花粉管生长和生殖核分裂;但后期,较高浓度则有抑制作用。ITP在花粉管生长早0000000000000期,较高浓度抑制花粉管生长和生殖核分裂。 相似文献
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植物蓝光受体向光素(phototropin,PHOT)介导许多生理反应,现已从拟南芥中分离了其下游的一些信号转导组分。前期研究表明,拟南芥光敏色素底物PKS家族成员PKS1与部分Ca2+结合蛋白钙调素(calmodulin,CAM)成员互作,参与PHOT2介导的强蓝光诱导下胚轴向光反应。旨在探讨PKS2和CAM4之间的互作关系,首先用RT-PCR技术得到PKS2和CAM4的c DNA全长序列。通过酵母双杂交和双分子荧光互补技术,从体外与体内证实PKS2和CAM4能相互作用。此结果进一步丰富了PKS家族与CAM之间的联系,为深入解析PHOT功能研究奠定基础。 相似文献
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白芷细胞外钙调素结合蛋白(ECBP21)免疫组化及金标定位分析 总被引:1,自引:0,他引:1
ECBP21是我们从白芷悬浮培养细胞外纯化及cDNA克隆的一种钙调素结合蛋白(CaMBP),亦是植物中首次报道的细胞外CaMBP。本实验以大肠杆菌表达的重组ECBP21蛋白为抗原,制备了高效价特异性抗体;随后,利用免疫组化及金标定位技术,研究了ECBP21蛋白组织特异性分布及亚细胞定位。免疫组化结果表明:ECBP21在白芷各组织中均有分布,但在叶、花、花序轴中较多,而在根中较少,并且ECBP21在细胞中多分布于细胞壁区域;免疫胶体金电镜定位结果显示:在白芷花序轴细胞中金颗粒主要分布在细胞壁,表明ECBP21蛋白主要定位于细胞壁区域,从而首次为细胞外CaMBP(ECBP21)的胞外存在提供了直观证据,并为进一步研究其在植物生长发育中的功能提供了初步信息。 相似文献
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The gene coding for human CaM was amplified by PCR in which pUC/hCaM3 cDNA was usd as template. After inserting the hCaM III cDNA into the expression plasmid pBV220, we constructed the hCaM3 cDNA-recombinant expression vector(hCaM3/pBV220). The recombinant plasmid was then transformed into E. coli DH5 alpha. After heat induction, a high level expression of CaM protein was obtained. SDS-PAGE analysis showed that the recombinant E. coli could express a 17 kD protein which accounted for about 20% of the total cellular protein. Western blot analysis showed that anti-CaM monoclonal antibody(McAb) specifically bound to the 17 kD band of expression product. rhCaM was purified by Phenyl-sepharose CL-4B affinity chromatography from recombinant bacterial lysate. 3-4 mg of the purified protein were obtained from 1 liter of bacterial culture. The rhCaM was able to activate NAD kinase to the same extent as the standard human brain CaM (Sigma). K562 cells and SP2/0 cells were seeded in 24-well or 96-well plate and cultured for 48 h with rhCaM and CaM-antagonist trifluoperazine(TFP). Cell proliferation rates was determined by MTT assay. There was a significant positive correlation between the concentrations of rhCaM and the cell proliferation rates. CaM-antagonist TFP had an inhibitory effect on cell proliferation rate. The inhibition could be corrected by the addition of extracellular rhCaM. 相似文献
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细胞外钙调素对百合花粉细胞内钙离子浓度的影响 总被引:17,自引:0,他引:17
以川百合(Lilium davidii Duchartre)花粉为材料,利用低温装载法在完整花粉粒中成功地装置了酯化形式的钙离子荧光指示剂fluo-3AM,利用激光共聚焦显微技术研究了细胞外钙调素对细胞内游离钙离子浓度的影响,结果发现外源纯化钙调素可以使细胞内游离钙离子的浓度升高,在一定范围内促进效果与钙调素浓度呈正相关。不能透过细胞膜的钙调素拮抗剂W7-agarose和植物钙调素抗血清处理都可 使花粉细胞质中游离钙离子浓度降低,表明内源细胞外钙调素可能在维持和促进花粉细胞质中游离离子方面具有重要作用。 相似文献
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