我国奶牛乳房炎致病性金黄色葡萄球菌血清型分布

本试验采用玻片凝集法对从临床型乳房炎病乳中分离获得的56株金黄色葡萄球菌进行血清型分型。结果表明336型占67.9%(38/56),5型占7.1%(4/56),8型占3.6%(2/56)。     

耐甲氧西林葡萄球菌3种检测方法的实验比较及临床应用

目的 通过对200株临床分离的葡萄球菌耐苯唑西林的检测,比较3种表型检测法的阳性率并对其临床实用性进行评价。方法 采用美国NCCLS 2004年制订的头孢西丁-纸片扩散法、VITEK32微生物鉴定仪检测及苯唑西林盐琼脂法测试mecA介导的葡萄球菌耐药。结果 200株被检测的葡萄球菌中,头孢西丁-纸片扩散法检出耐苯唑西林的阳性率为68％（136／200）;苯唑西林盐琼脂法的阳性率为67．5％（135／200）;VITEK32仪的阳性率为68．5％（137／200）;且耐甲氧西林凝固酶阴性葡萄球菌（MRCNS）的耐药率（86．2％）高于耐甲氧西林金黄色葡萄球菌（26．23％）。3种检测方法结果经χ^2检测差异无显著性。结论 3种方法操作都简便,但各有优缺点,VITEK32仪器检测葡萄球菌耐笨唑西林费用高,一般小型医院不具备条件;盐琼脂筛选法判读直观,但要掌握好孵育时间;NCCLS2004版的纸片扩散法较经济实用,不仅可检测被检菌是否耐笨唑西林,同时还可获得大环内酯-林可霉素-链阳霉素（MLSB）结果,但是当头孢西丁的判断折点在临界时应当复检,建议与盐琼脂筛选法同步检测。     

警惕抗药性致病菌

致病菌当中金葡菌即金黄色葡萄球菌（Staphylococus aureus）系一种对机体有潜在威胁的G^＋致病源,最常见的感染源,其中90％以上的变种具有抗青霉素能力。有些致病菌对强力抗生素如万古霉素产生抗药性,这是在医院获得性感染的主要原因,已发现获得性抗药性基因如tn1546可以从另一种抗药性细菌如粪肠球菌中跳跃进入金葡菌中,这种交叉感染获得性抗药性有更大的危险性。     

利用系统作图(Systems mapping)研究大肠埃希菌和金黄色葡萄球菌的互作遗传机制

【背景】物种间相互作用是物种进化的重要推动力,然而如何将基因型和表型关联以及确定在物种相互作用过程中起重要作用的基因均面临挑战。【目的】通过系统作图(Systems mapping)得到两种微生物在相互作用过程中起重要作用的SNPs (Single nucleotide polymorphism),以及随着时间的变化,这些SNPs是如何相互联系进而影响大肠埃希菌和金黄色葡萄球菌的相互作用。【方法】分别对45株大肠埃希菌、45株金黄色葡萄球菌进行单独培养和混合共培养,通过实时荧光定量PCR(Real-time quantitative PCR,qPCR)进行绝对定量,得到一定时间内各个菌株的生长量,比较相同菌株在不同培养条件下生长情况,以各个菌株重测序结果为基础,结合系统作图得到在相互作用过程中起重要作用的显著SNPs及其相互联系。【结果】通过系统作图分析,获得具有54对显著SNPs组合的三维曼哈顿图,这些组合中41个显著SNPs来自大肠埃希菌,12个显著SNPs来自金黄色葡萄球菌。在上述SNPs中已有6个SNPs所在的候选基因都可以直接或者间接影响微生物的生长量变化,从而影响两种微生物相互作用方式。它们分别是nhaR(E19056)参与生物膜的形成,rhlE(E832164)与核糖体的组装有关,csiD (E2789300)的表达可以使细胞面对恶劣环境,alk B (E2309274)可以参与DNA的损伤修复,sucA(E759230)和yjjW(E4614704)都参与细胞的代谢过程。【结论】系统作图可以检测到物种在相互作用过程中显著SNPs;物种相互作用过程中不同SNPs遗传效应随着时间变化;细菌的相互作用过程是直接遗传效应、间接遗传效应和上位性效应共同产生的结果。     

依替米星对糖尿病足MRSA感染有较好的治疗效果

为探讨依替米星对糖尿病足耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(methicillin-resistant Staphylococcus aureus,MRSA)感染血清炎症因子的影响,并分析依替米星在临床上应用的疗效,本研究选取2015年6月至2017年6月糖尿病足MRSA感染患者120例,其中接受常规治疗及依替米星的患者73例作为依替米星组,只接受常规治疗的患者47例为对照组,比较两组患者的治疗效果及两组患者治疗前后金黄色葡萄球菌清除率,并通过检测白细胞介素-6 (interleukin 6, IL-6)、白细胞介素-8 (interleukin-8, IL-8)、肿瘤坏死因子-α(tumornecrosis Factor, TNF-α)、白细胞介素17 (interleukin 17, IL17)的水平来比较治疗前后两组患者的炎症指标的变化。结果发现治疗4周后,依替米星组总有效率明显高于对照组(p0.05),依替米星组金黄色葡萄球菌清除率明显高于对照组(p0.05),依替米星组IL-6、IL-8、TNF-α、IL-17的水平明显低于对照组(p0.05)。本研究初步结论表明,依替米星对糖尿病足MRSA感染具有较好的治疗效果,能显著降低血清炎性因子的水平。     

用基因克隆技术制造A蛋白

A蛋白(Protein A)原来是从致命性金黄色葡萄球菌的细胞外壳提取的。由于细菌的致病性,A蛋白的生产过程很不安全。最近,Repligen公司成功地用大肠杆菌表达了A蛋白的基因,并在该基因上接加了一个启动子,使产量提高。     

基于免疫磁分离的三重荧光定量PCR检测食品中沙门氏菌、志贺氏菌和金黄色葡萄球菌

【目的】开发一种同时对食品中沙门氏菌、志贺氏菌和金黄色葡萄球菌快速、灵敏、准确的检测方法。【方法】利用特异性免疫磁球,在37°C条件下从250 m L猪肉增菌液体系中边富集边循环捕获目标菌。快速提取DNA后,利用特异性的引物与探针,对3种食源性致病菌进行三重荧光定量PCR检测。【结果】针对沙门氏菌、志贺氏菌和金黄色葡萄球菌的检测限分别达到2.0、6.8和9.6 CFU/g。方法总体灵敏度、特异性和准确度达到99.2%、100%及99.5%。对151份实际样品进行检测,与国标(GB/T 4789.4-2010、GB 4789.5-2012和GB/T4789.10-2010)方法的检测结果相比,金黄色葡萄球菌有一例阴性偏差。【结论】开发的基于免疫磁分离的三重荧光定量PCR方法,能够在8 h内完成对食品中3种致病菌检测,并且灵敏度高、特异性好、检测准确,可以作为快速应对此类食品安全突发事件的检测手段。     

慢性皮肤溃疡大鼠模型的比较研究

目的 采用不同方法构建大鼠慢性皮肤溃疡模型,通过多种指标比较评价不同模型的差异和各自特征。方法 大鼠随机分为4组,在建立全层皮肤缺损的开放性创面基础上施加不同因素,分别为：皮肤缺损组(皮损组)、皮肤缺损+激素干扰组(皮损+激素组)、皮肤缺损+激素干扰+菌感染组(皮损+激素+菌组)、皮肤缺损+异物组(皮损+异物组);实验期间测量大鼠的体重,观察其活动状态及创面愈合情况,第14天取材,进行溃疡组织局部病理形态学观察,并检测免疫器官脏器指数、血液白细胞水平、肉芽组织中羟脯氨酸(Hyp)、总蛋白和肿瘤坏死因子-α(TNF-α)含量。结果 实验期间各组大鼠体重没有显著性差异,造模后皮损组大鼠创面愈合较快,皮损+激素组的“难愈”现象维持时间相对较短,皮损+异物组前期新生肉芽颜色灰白,但后期肉芽生长速度较快,而皮损+激素+菌组创面出现黄脓、肉芽组织生长速度较慢的特征;病理形态学观察显示,皮损+激素+菌组、皮损+异物组的炎症细胞浸润现象明显;与皮损组比较,其他3个模型组表现出脾指数增加、白细胞水平增加、创面组织羟脯氨酸含量显著降低(P<0.05或P<0.01),而且皮损+激素+菌组的总蛋白...     

畜禽养殖粪污中典型致病菌的三重微滴式数字PCR定量检测方法的建立北大核心CSCD

为精准、快速检测畜禽养殖粪污中典型致病微生物,减少人畜共患病的传播风险,以金黄色葡萄球菌、大肠埃希氏菌(O157:H7)和肠炎沙门氏菌3种常见致病菌为研究对象,通过筛选其特异性引物与探针、优化反应系统,建立起快速、稳定的多重微滴式数字PCR(droplet digital PCR,ddPCR)反应体系。通过检测不同菌株验证该体系的特异性,并确定畜禽养殖废弃物致病菌的检出限,开发出多重微滴数字PCR快速检测方法。研究结果表明,各对引物探针对目标菌株均能扩增,ddPCR体系内未出现交叉反应,检测肠炎沙门氏菌的绝对定量检测低限为0.68 copies/μL;检测金黄色葡萄球菌的绝对定量检测低限为0.79 copies/μL;检测大肠埃希氏菌的绝对定量检测低限为1.02 copies/μL。研究建立的方法可实现对畜禽养殖粪污中3种典型致病菌的高效率、高精度的检测。     

用于检测葡萄球菌肠毒素的免疫芯片技术

免疫芯片是指包被在固相载体上的高密度抗原或抗体微点阵 ,是继基因芯片之后提出的一种新型的生物芯片。在检测大分子物质葡萄球菌肠毒素 (SE)时采用双抗体夹心法。检测时将SEA、SEB、SEC加入反应池中 ,反应后清洗掉未结合的SE ,再加入相应的标记抗体 ,形成固定抗体 待测物 标记抗体的夹心式结构。对影响免疫芯片检测效果的条件进行了优化 ,按优化后的条件进行SEA、SEB、SEC的检测 ,结果表明荧光信号强度随待测物浓度的增加而增加 ,当浓度高于一定值时 ,荧光信号强度趋于一定值 ,本法最低可检测 0.0 1 μg ml的SEA和SEB及 0.1 μg ml的SEC。将此项技术应用于环境和食品中污染物检测领域 ,将会使卫生监督工作水平得到明显的提高。