广东肇庆地区药材金线莲种质资源调查与生态生物学特性研究

为了解粤中药材金线莲[Anoectochilus roxburghii(Wall.)Lindl.]种质资源的分布情况,对肇庆地区金线莲的生态生物学特性进行了研究。结果表明,肇庆地区金线莲属植物有金线莲和银线兰两近缘种,均处于濒危状态,通常以红叶株型金线莲入药。金线莲为典型的浅根性和中阴性地生兰,种群的适生坡度45°,郁闭度为60%~80%,常见于西南方位常绿阔叶林下,适生温度为12℃~26℃,空气湿度、群落植被结构和土壤腐殖质成分等共同影响自然种群的生长。同时对药材金线莲的濒危原因进行了分析,并提出保护对策。     

有网脉和无网脉金线莲杂交及分子鉴定

对源自福建武夷山道地金线莲种质资源‘武夷1号’有网脉和无网脉植株进行性状观察和药用成分分析,并以二者为亲本进行人工杂交,研究杂交亲和性及杂交后代性状分离规律,利用ISSR和CDDP分子标记对亲本和杂交后代进行鉴定,为福建道地金线莲种质资源进行品种改良提供依据。结果显示:(1)金线莲有网脉植株类黄酮和总多糖含量显著较高,分别为无网脉植株的1.2和1.3倍,但无网脉植株金线莲苷含量略高于有网脉植株。(2)杂交结果显示,金线莲父母本为相同网脉性状组合的杂交亲和性要高于网脉性状不同的组合;杂交后代有网脉、无网脉性状分离比例约为3∶1;推断有网脉为纯合基因型,无网脉为杂合基因型。(3)ISSR和CDDP分子标记联合应用能有效区分金线莲无网脉植株和有网脉植株,也可以用于鉴定杂交后代;聚类分析结果表明,有网脉与无网脉金线莲的遗传距离为0.04。研究结果表明福建道地金线莲不同品系间的药用成分含量差异较大,并支持有网脉金线莲与无网脉金线莲为不同品种(系)的观点。     

蓝光胁迫对金线莲游离氨基酸组分的影响

以金线莲(Anoectochilus roxburghii)为试材,在光密度30 μmol·m–2s–1的白光基础上补充60 μmol·m–2·s–1、120 μmol·m–2·s–1和180 μmol·m–2·s–1三个强度蓝光胁迫56 d,采用氨基喹啉-N-羟基丁二酰氨基甲酸酯(AQC)柱前衍生结合超高效液相色谱-串联质谱法测定游离氨基酸组分含量变化,分析金线莲游离氨基酸组分对蓝光胁迫的响应特征。共稳定检测出22种氨基酸,苏氨酸、丙氨酸、谷氨酰胺、缬氨酸、肌氨酸、组氨酸、天冬酰胺和酪氨酸是金线莲的特征氨基酸,游离氨基酸总量随着胁迫时间延长呈先增加后减少的趋势,在14 d 时含量最高。综合结果表明,蓝光胁迫14?d对金线莲中多种游离氨基酸的合成有促进作用,在补充180 μmol·m–2·s–1强度蓝光时效果最好。     

金线莲HPLC指纹图谱研究

以14批不同来源金线莲药材为原料,采用高效液相色谱法(HPLC),乙腈-甲酸水溶液为流动相,梯度洗脱,建立栽培及野生金线莲(Anoectochilus roxburgii)的指纹图谱,结合相似度分析,探讨金线莲与银线莲(Goodyera hachijoensis)的差异。结果表明,金线莲HPLC指纹图谱标定了24个共有峰,并指认了金线莲苷和葫芦巴碱、鼠李素-3-O-芸香糖苷、槲皮素、山柰酚、异鼠李素、Batatasin-Ⅲ等6个共有峰。除3批药材外,其余11批相似度均高于0.910,相似度总体较好。银线莲图谱相似度仅达0.529、0.721、0.698,均低于14批金线莲样品间的相似度。根据相似度评价,认为金线莲与银线莲存在差异,该结果可为分析评价金线莲与银线莲差异提供参考。     

复方金线莲胶囊治疗Ⅱ型糖尿病初步研究

经药效学、急性毒性及临床初步观察表明,复方金线莲胶囊对Ⅱ型糖尿病有明显的疗效。     

腐殖质土添加杉木屑对金线莲生长及活性成分的影响

目的：研究腐殖质土添加不同腐熟程度杉木屑对金线莲生长与活性成分的影响。方法：以金线莲组培苗为材料,设置100%腐殖质土（处理A）、40%腐熟杉木屑+60%腐殖质土（处理B）、40%未腐熟杉木屑+60%腐殖质土（处理C）3个处理,测定金线莲生长指标以及活性成分含量,分析腐殖质土中添加不同腐熟程度杉木屑对杉木下仿野生栽培金线莲生长及活性成分的影响。结果：种植在处理B中的金线莲幼苗保存率最高,达到了84.80%;幼苗茎粗、叶片数、叶片长、叶片宽、根长的增长量均高于其余2个处理;总黄酮与生物碱含量分别比处理A与处理C高出1.17%、25.63%和3.55%、11.34%。结论：腐殖质土中添加杉木屑可提高金线莲保存率,促进金线莲生长,其中60%腐殖土+40%腐熟杉木屑栽培效果最佳,值得进一步推广。     

建立金线莲原球茎悬浮体系生产次生代谢产物

研究植物激素浓度和培养周期对金线莲原球茎悬浮培养生长及其代谢产物积累的影响,以增加金线莲悬浮培养的生长量,提高次生代谢产物的生产。结果表明,MS培养基添加S-3307 1.0mg/L,6-BA0.5mg/L和3%的蔗糖适合总生物量的生长(214.45g/L,FW和18.23g/L DW)。而MS培养基添加S-3307 1.0mg/L,6-BA 3.0mg/L和5%的蔗糖,总黄酮,总酚和多糖的干重(5.43mg/g,2.87mg/g和243.23mg/g)达到最大化。研究原球茎悬浮培养过程,发现经过7个星期培养就能获得最大的生物质总量(225.98 g/L的FW和18.53 g/L的DW)、总黄酮干重(5.09mg/g)和总酚干重(2.04mg/g),而多糖生产达到其峰值(229.36mg/g干重)是在培养后5个星期。     

不同LED光质对金线莲生长的影响

以福建产金线莲（Anoectochilus roxburghii）为材料,研究不同LED光质（红光、黄光、蓝光）对金线莲生长指标以及叶绿素、气孔的影响。结果表明,红光与黄光有利于金线莲株高增长,与对照相比分别提高18.74%、21.47%,但二者处理的植株较为瘦弱,且红光和黄光处理下的植株叶绿素a和叶绿素b含量较低。蓝光处理下金线莲生长情况较好,叶面积与对照相比增长明显,且叶绿素含量相对较高。不同LED光质处理下的植株气孔频度、长度、宽度与对照相比都有一定增长。     

金线莲组织培养(简报)

以金线莲茎段为外植体进行离体快速繁殖体系研究。结果表明：芽诱导最佳培养基为1/2MS+6-BA 1.5 mg·L^-1+NAA 0.2 mg·L^-1;增殖培养基为1/2MS +6-BA 2.0 mg·L^-1+NAA 0.5 mg·L^-1+香蕉100 g·L^-1;增殖系数达6～8倍;生根培养基为1/2MS + IBA 1.0 mg·L^-1+NAA 0.5 mg·L^-1+活性炭0.2 g·L^-1,生根率可达95%。将生根苗移栽入滤水性好的细兰石与炭渣混合基质中,盖膜保湿。成活率可达90%。     

金线莲抑制斑马鱼黑色素形成的活性组分筛选及机理研究

为探索金线莲中对黑色素形成具有抑制效果的活性组分,本研究对金线莲进行分离、提取,获得总提组、醇沉组与醇提组,利用斑马鱼筛选金线莲具有美白作用的活性组分。将受精后0.75 h的斑马鱼胚胎分别暴露于不同浓度的金线莲总提组、醇沉组、醇提组,72 h时观察结果表明,金线莲醇提物能有效抑制斑马鱼胚胎黑色素和黄色素沉着,浓度越高抑制效果越明显,且不影响胚胎生长发育。进一步采用半定量PCR和整胚原位杂交技术定量和定性地检测黑色素形成相关基因mRNA表达,结果表明金线莲醇提物可以有效降低silv、tyr和tyrp1a等黑色素合成相关基因的转录水平,且具有浓度依赖关系。通过检测酪氨酸酶活性显示,加入醇提物的实验组其酪氨酸酶活性随着处理浓度升高而逐渐降低。此外,在黑色素已经大量形成的情况下,金线莲醇提物仍可通过下调黑色素合成相关基因的mRNA表达及酪氨酸酶活性来抑制黑色素的形成,并且这种抑制效果可在金线莲醇提物撤除后得到恢复。上述实验结果表明,金线莲醇提物能显著抑制斑马鱼黑色素的形成,本文为金线莲在美白产品领域的开发和应用方面提供了有力支撑。