鸭源H6N6亚型AIV荧光定量PCR方法的建立及应用

[目的]为检测鸭感染H6N6亚型AIV后排毒及在组织器官病毒分布情况。[方法]通过建立H6N6亚型AIV荧光定量PCR检测方法,以H6N6亚型AIV M基因保守序列设计特异性引物,将分离到的H6N6亚型AIV病毒反转录为cDNA,进行pMD18-T-M基因克隆质粒构建,以其为标准品建立荧光定量PCR标准曲线,并进行敏感性和重复性试验,利用所建立的方法检测鸭感染H6N6亚型AIV后排毒及在组织器官病毒分布情况。[结果]该方法灵敏度高,最低检测到1.0×10^(1) copies/μL,从而可以得出拷贝数与Ct值之间的线性关系曲线表达式:Ct=-3.408×lg Copynumber+33.773(R^(2)=0.998),线性范围为1.0×10^(7)~1.0×10^(1)拷贝/μL,熔解峰的熔解温度在83℃左右。[结论]表明建立的鸭源H6N6亚型AIV荧光定量PCR检测方法,特异性强,重复性好,为后续实验研究提供了技术和数据支撑。     

鸭坦布苏病毒E蛋白结构与功能的研究进展

鸭坦布苏病毒病是一种由鸭坦布苏病毒（Duck tembusu virus, DTMUV）引起雏鸭出现神经症状、种鸭生产性能降低、蛋鸭产蛋性能大幅下降的传染性疾病。DTMUV编码3种结构蛋白（C, E, prM），其中E蛋白作为DTMUV重要的免疫原性蛋白，其各结构域的氨基酸位点突变可对病毒粒子的致病性产生不同影响。本文总结了目前关于DTMUV E蛋白的研究进展，包括结构特点和关键毒力位点分析、其在病毒入侵细胞过程的功能与诱导细胞凋亡等的最新研究、以及蛋白抗原表位的最新发现。为进一步探究DTMUV E蛋白的致病机理奠定理论基础。     

鸭冠状病毒实时荧光定量PCR检测方法的建立及应用

为建立一种鸭冠状病毒（Duck coronaviruses,DuCoV）的临床快速诊断方法，根据鸭冠状病毒1b基因保守区域设计特异性引物，成功建立了用于检测鸭冠状病毒的特异性SYBR GreenⅠ荧光定量PCR方法。该方法特异性强、敏感性高、重复性好，对鸭冠状病毒有特异性扩增，最低检测限为8.04×100拷贝/μL，比普通PCR方法敏感10倍，批内变异系数与批间变异系数分别为0.28%～0.34%、0.25%～0.36%，均小于1%。对临床可疑鸭泄殖腔拭子进行检测，本方法与常规PCR方法的检测结果阳性符合率为100%，阴性符合率为96.43%，样本总符合率为97.62%。本研究建立的鸭冠状病毒SYBR GreenⅠ实时荧光定量PCR方法，可用于鸭冠状病毒的临床快速诊断及流行病学监测。