鸭乙型肝炎病毒复制复合体（DHBVRCs）的提纯及其对外源模板的利用

鸭乙型肝炎病毒复制复合体（ＤＨＢＶＲＣｓ）的提纯及其对外源模板的利用邵兴无,陶佩珍,郭巨涛,陈鸿珊（中国医学科学院医药生物技术研究所,北京１０００５０）关键词鸭乙型肝炎病毒复制复合体,ＤＮＡ聚合酶,核心抗原,外源模板１鸭乙型肝炎病毒复制复合体（ＤＨＢ...     

鸭疫里默氏杆菌流行菌株的分离鉴定及生物学特性

【背景】鸭疫里默氏杆菌(Riemerella anatipestifer,RA)是引起雏鸭、鹅、火鸡等多种家禽、野禽发生传染性浆膜炎的病原,在全世界范围内广泛存在,危害养禽业发展,造成严重的经济损失。【目的】了解国内RA的流行现状,探究该菌的生物学特性,更好地指导防控鸭疫里默氏杆菌病。【方法】对2020-2021年从山东省、河北省、广东省、山西省等地分离的RA疑似菌株进行PCR、生化和血清型鉴定,并根据药物敏感性结果分析耐药现象,根据半数致死量(median lethal dose,LD₅₀)测定结果分析致病力差异。【结果】共鉴定78株RA分离株,其中,血清1型4株、2型21株、10型11株、6型3株、7型17株,1株有交叉凝集现象,21株血清型未定型;药敏结果显示78株分离株对多粘菌素B、磷霉素、克林霉素等的耐药性最强,对头孢拉定、多西环素、呋喃唑酮、氟苯尼考等抗生素最为敏感,并且78株分离株均存在多重耐药性,其中77株耐药5重及以上;动物试验结果显示,RA的分离株致病力普遍较强,而且不同地区分离株、同地区不同分离株之间均存在差异,数株RA分离株的LD₅₀在10⁴-10⁷ CFU不等。【结论】RA在国内流行表现了强致病力及严重耐药情况,本研究结果为更好地预防控制、临床用药及后续致病机制研究提供了参考依据。     

西藏鸟类新纪录——夜鹭

<正>2014年1月21日下午在西藏自治区贡嘎县索岗村雅鲁藏布江边(29°16'59.40″E,91°5'13.10″N)观察到4只鹭鸟正在灌丛上休息,该鸟头顶及背部黑色,胸部白色,颈背具两条白色丝状羽,根据这些羽色颜色及形态特征确定为夜鹭Nycticorax nycticorax的成鸟。与夜鹭在同域活动的还有普通鸬鹚Phalacrocorax carbo、针尾鸭Anas acuta、斑头雁Anser indicus、黑颈鹤Grus nigricollis等水鸟正在附近农田中取食。经查阅《中国鸟类野外手册》(马敬能等,1999)、《中国鸟类分类与分布名录》(郑光美,     

鸡鸭异种间嵌合体的制备

本研究采集孵化14期鸡胚血液中的原始生殖细胞,在液氮中冷冻保存三个月后,解冻成活率达80％以上。以Ficoll密度梯度离心将其从血液中分离纯化,分离获得纯度为27.5%,平均每枚胚胎可获得近50个PGCs。将分离的PGCs 100-200个以微注射法转移至15期早期麻鸭胚胎中制备了鸡鸭种间嵌合体,孵出8（6♂,2♀）只雏鸭,总孵化率为7.3%（8／110）。以鸡W染色体特异性DNA探针原位杂交法在早期鸭胚性腺中检测鸡PGCs。在被检测的21个鸭胚的性腺中,16个有不同程度的阳性信号,嵌合率达76.2%(16/21)。实验结果表明鸡原始生殖细胞能够迁移并定居到鸭胚性腺中,并有可能在鸭性腺中增殖分化成有功能的配子。     

核酶的体外合成及其对鸭乙型肝炎病毒S基因体外转录物的定点切割

选择鸭乙型肝炎病毒作为核酶的靶病毒,设计针对病毒前基因组Ｓ基因区第１２８８位和１４６９位“锤头状”核酶序列（ＲＺ１和ＲＺ２）。经体外转录及做核酶切割,ＲＺ１和ＲＺ２均有切割作用,以ＲＺ１作用更强。鉴于核酶在相当于鸭体温（４２℃）有切割作用,因此有可能在鸭体内研究其切割作用。     

鸭肠炎病毒核衣壳蛋白受体的筛选与鉴定

为进一步阐明鸭肠炎病毒(DEV)致病机理,本研究通过构建DEV感染鸭肝组织cDNA文库及其文库质粒和DEV核衣壳蛋白(NP)基因"诱饵"质粒,利用酵母双杂交系统筛选DEV NP互作蛋白(受体)基因,并采用GSTpull-down试验进行验证,结果显示:所构建鸭肝组织cDNA文库的库容量为1×106 CFU,插入片段大小集中在0.5～1kb;"诱饵"质粒pGBKT7-NP无自激活现象;筛选并初步证实DEV NP在鸭肝组织细胞的受体蛋白为蛋白激酶C抑制蛋白(PKCI)。这些结果为进一步研究DEV致病机理提供新的线索。     

不同种雏鸭建立鸭乙肝病毒感染模型及抗病毒效果的实验

目的探讨不同种雏鸭建立鸭乙肝病毒感染模型的影响因素,观察应用该模型抗病毒的效果。方法采集鸭血清,应用PCR方法定性检测鸭血清中病毒DNA;定量PCR方法检测鸭血清中病毒DNA载量变化;用抗病毒药物处理,观察其在鸭DHBV感染模型中的抗病毒效果。结果不同种鸭DHBV自然感染率不同,樱桃谷鸭为8.75%,湖北麻鸭两个批次分别为17.80%和10.68%;静脉注射和腹腔注射两途径均能致雏鸭感染DHBV,静脉注射感染率80%,腹腔注射感染率65%;鸭感染DHBV后,体内病毒载量维持在106～108copies/mL,可持续20 d以上;抗病毒药物处理后,在不同DHBV模型中其抗病毒效果变化趋势一致。结论鸭的种类和人工感染途径可影响DHBV感染率;雏鸭感染DHBV后其体内有持续性的病毒血症;DHBV感染模型是药物抗病毒研究较好模型。     

“双季稻-鸭”共生生态系统稻作季节氮循环

“稻鸭共生”是对我国传统农业稻田养鸭的继承与发展.2010年5-10月在长江流域双季稻主产区湖南布置了稻田养鸭田间试验,以常规稻作为对照,研究了早、晚稻两季“稻鸭共生”生态系统氮(N)循环特征.结果表明：“早稻-鸭”共生系统N输出是239.5 kg·hm^-2,其中鸭产品N是12.77 kg·hm^-2.“晚稻-鸭”共生系统N输出是338.7 kg·hm^-2,其中鸭产品N是23.35 kg·hm^-2.在早、晚稻两季,“稻鸭共生”系统在目前的N养分投入水平下,土壤均存在N亏缺;鸭子系统N输入主要来自系统外投入的饲料N;鸭粪N作为系统内被循环利用的养分,早、晚稻两季循环率分别为2.5%和3.5%.两季稻作后,土壤截存的N量是178.6 kg·hm^-2.     

利用16S rDNA建立种特异性PCR快速检测鸭疫里默氏菌

鸭疫里默氏菌感染是危害养鸭业的主要疾病,用表型指标鉴定鸭疫里默氏菌存在不足,因此有必要建立检测该菌的种特异性PCR法。利用已登录的鸭疫里默氏菌、大肠杆菌、沙门氏菌、多杀性巴氏杆菌的16S rDNA基因序列,设计了一对鸭疫里默氏菌16S rDNA基因的特异性引物190f和843r,分别以基因组DNA和菌落提取液为模板,从1~19型鸭疫里默氏菌参考菌株和代表亚型、变异株和可能新型的国内分离株共26株细菌中均扩增出大小为654bp的特异性片段,而扩增鸭大肠杆菌、鸭沙门氏菌和禽多杀性巴氏杆菌等感染鸭的常见细菌的结果均呈阴性。分别将鸭疫里默氏菌基因组DNA和菌落提取液进行10倍梯度稀释,基因组DNA的最小检出量为50pg,菌落最小检出量为15CFU/mL。结果说明,该PCR法具有较好的特异性和敏感性,可用于快速鉴定鸭疫里默氏菌。     

几种初生鸟类（家禽）肝脏液晶类脂滴的比较研究

本文中,我们观察到初生鸭、山鸡、乌鸡、鹌鹑和鸽的肝脏组织中液晶类脂滴（ＬＣＬＤ）分布于肝索上肝细胞内,血窦中少有;ＬＣＬＤ液晶态重复间距依次分别为３６．８Ａ,３７．４Ａ,３７．６Ａ,３７．８Ａ和３８．４Ａ。经冷冻处理室温下ＬＣＬＤ均以结晶态存在;它们的Ｘ射线衍射特性均与其对应的脂类提取物结晶的衍射特性一致。衍射分析表明,初生鸭、山鸡、乌鸡和鹌鹑与鸡胚肝ＬＣＬＤ结晶为同一类晶相,而初生鸽肝ＬＣＬＤ结