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181.
大鼠催乳素基因真核细胞可表达性质粒的构建及应用研究 总被引:4,自引:0,他引:4
735bp的PRLcDNA片段从质粒PRL-SP65#1中回收后,用粘性末端连接法将其重组到真核表达载体pcDNA3上,筛选出正向连接重组体pcDNA3-PRLS和反向连接重组体pcDNA3-PRLAS。将重组体pcDNA3-PRLs和空载体pcDNA3分别转入NIH3T3细胞系,用G418筛选出阳性细胞后与未转染的NIH3T3细胞在加E2和不加E2的情况下,用原位杂交的方法,分别用PRLcDNA探针和原癌基因c-H-rascDNA探针进行检测,未转染的NIH3T3细胞在加E2和不加E2时都几乎无催乳素基因的表达,同样,转入空载体的NIH3T3细胞也无PRL的表达,而转入重组体pcDNA3-PRLS的NIH3T3细胞则有大量的PRL基因的表达,与对照组相比有显著差异(P<0.01)。正常和转入空载体的NIH3T3细胞有一定程度的原癌基因c-H-ras的表达,当分别加入E2和转入重组体pcDNA3-PRLS后,NIH3T3细胞中的c-H-ras基因表达水平都显著升高(P<0.05)。 相似文献
182.
戊型肝炎病毒(HEV)合成肽及基因重组抗的免疫反应性研究 总被引:1,自引:0,他引:1
用ORF2、ORF3合成肽抗原(1-10号)及基因工程重组的ORF2抗原(1和2号)分别建立了酶联免疫方法(EIA),检测60份戊型肝炎病人血清中HEVIgG及IgM10个合成肽抗原及2人重组抗原,均和HEV阳性血清发生特异反应,但阳性率和反应强度差别很大。以Rel(ORF2,402-660)检测的抗体阳性率最高,为96.7%;Sp6(ORF3,88-123)次之,为93.3%(56/60);以上 相似文献
183.
新型戊型肝炎诊断试剂盒的研制及其应用 总被引:5,自引:1,他引:4
用HEVORF3合成肽及ORF2重组抗原研制成新型HEVEIA诊断试剂盒。与GenlabsHEVEIA检测比较,灵敏度和特异性均达100%(60/60)。三批试剂精密性测定均<10%。该试剂盒置4℃8个月或37℃4d保持稳定。检测不同肝炎患者HEV抗体,发现急性非甲非乙非丙肝炎中有63.2%,甲肝有13.4%,乙肝有8.3%,丙肝有6.6%,正常人群为2.9%。所研制的戊型肝炎诊断试剂盒,灵敏度高,特异性强,精密性好,稳定性合格。适用于戊型肝炎诊断及戊肝病毒感染的流行病学调查 相似文献
184.
火炬松胚性细胞悬浮培养物的生长参数变化 总被引:1,自引:0,他引:1
以火炬松(PinustaedaL.)成熟合子胚来源的胚性愈伤组织为材料建立了胚性细胞悬浮系,测定了其培养物的鲜重、干重、细胞体积和胚数及培养液中的pH值、电导率和蔗糖浓度等生长参数在培养过程中的变化动态。结果表明,在培养周期内,培养液中的pH值、电导率和蔗糖浓度的逐步降低与培养物的鲜重、干重、细胞体积和胚胎数的逐步增加保持一致性。在培养至18—21d,pH值、电导率和蔗糖浓度均接近或降到最低点,而胚数及细胞体积的增长都达到最高点。 相似文献
185.
传染性法氏囊病病毒在次代鸡胚成纤维细胞上的增殖 总被引:2,自引:0,他引:2
研究了用次代鸡胚成纤维细胞(SCEF)增殖传染性法氏囊病病毒(IBDV)的可能性。在研究了原代鸡胚成纤维细胞(PCEF)与SCEF的生长特性的基础上,就各种培养方式采用PCEF与SCEF增殖IBDV进行了比较。结果表明,可用SCEF代替PCEF进行IBDV的增殖培养。 相似文献
186.
MLC_2-糜酶融合基因克隆及转基因小鼠的产生 总被引:2,自引:0,他引:2
为研究糜酶基因在体内的结构与功能以及与心肌肥厚的关系,并提高糜酶基因在小鼠心脏中的表达,构建肌球蛋白轻链-2启动子(myosinlightchain-2promoter,MLC2)-糜酶融合基因并产生转基因小鼠.通过删除糜酶基因启动子序列,构建结构基因克隆,然后与大鼠心脏肌球蛋白轻链-2启动子序列相拼接,构建MLC2-糜酶融合基因克隆,回收并纯化融合基因片段,显微注射入小鼠受精卵产生转基因小鼠,经PCR扩增、Southern印迹杂交和PCR扩增产物的测序,筛选和确定转基因鼠.在新出生的46只小鼠中有2只为转基因阳性鼠,且外源基因能稳定遗传给后代,从而获得了可用于研究糜酶基因在体内的结构与功能以及与心肌肥厚的关系的转基因小鼠模型. 相似文献
187.
以人睾丸组织总RNA为材料,用RT-PCR方法合成了人腺苷酸环化酶激活多肽(ACAP)编码区(530bp)和全长cDNA(1930bp)片段.并分别将这些cDNA片段克隆入pUC18载体的SmaⅠ限制性内切酶位点.对重组质粒分别采用直接DNA双链末端终止法和在核酸外切酶Ⅲ和核酸酶S1作用下连续缺失DNA后,相继克隆,构成一系列连续缺失的缺失体的方法,测定了全部核苷酸顺序.结果表明:ACAP编码区的cDNA顺序与已报道的有12处碱基的改变,其中11处碱基顺序的改变不引起编码的氨基酸变化,只有第385位的T→A后,才引起其编码的氨基酸由Ser→Thr,但由于Ser和Thr的理化性质极其相似,这一变化可能并不导致蛋白质的生物活性的变化.这些改变可能是由于种族、群体或个体的差异. 相似文献
188.
天花粉蛋白Y14F/R22L定点突变及其活性研究 总被引:1,自引:0,他引:1
利用多聚酶链式反应(PCR)技术,对天然天花粉蛋白(nTCS)基因在Tyr14和Arg22两个保守残基处同时进行定点突变,即Tyr14变成Phe,Arg22变成Leu,然后克隆到pET-8c高效表达载体上,构建成重组质粒pETY14F/R22L.经序列分析,定点突变的结果与预先设计的完全一致,突变后的天花粉蛋白命名为Y14F/R22LTCS.将pETY14F/R22L转化到E.coliBL21(DE3,pLysS)中,进行表达.经CM-SepharoseCL-6B柱纯化,SDS-PAGE鉴定,纯度可达90%.RIP活性测定显示,Y14F/R22LTCS的活性比nTCS降低了7.5倍,活性变化不显著,因此,TCS的Try14和Arg22对维持其活性部位构象并不是必需的.但由于Y14F/R22LTCS在E.coli中的表达量与nTCS相比明显下降,因此,Tyr14和Arg22可能与TCS翻译后的折叠有关. 相似文献
189.
为了减少rIL-2工程菌高密度培养时乙酸的积累,在诱导阶段对该工程菌进行细胞再循环培养的研究,比较了细胞再循环补料液、pH、细胞循环培养时间段对工程菌的生长及rIL-2表达的影响。结果表明在菌密度D_(600)为50时,细胞再循环补料液中酵母抽提物与胰蛋白胨浓度为发酵培养基的5倍就能满足rIL-2表达的需求,同时选择诱导后4~6h之间的细胞再循环培养能有效地防止乙酸的过高积累并减少营养物质的损失,有利于rIL-2的表达。根据以上研究结果得到了rIL-2工程菌诱导阶段细胞再循环培养方法,使得在诱导前菌密度D_(600)为50左右时rIL-2的表达水平约为40%。 相似文献
190.
抗癌胚抗原单链抗体基因的构建及高效表达 总被引:8,自引:2,他引:6
采用重组PCR技术将已获得的抗癌胚抗原鼠源单克隆抗体E7B10重,轻链可变区基因经(Gly3Ser)3编码的寡核苷酸拼接成单链抗体基因,并在大肠杆菌中高效表达了单链抗体C端的融合蛋白,其表达量达到菌体总蛋白的20%,SDS-PAGE和Western印迹图谱显示表达产物分子量为27kD,与其基因编码蛋白的理论推算值相符。 相似文献