脑电超慢涨落图技术在癫痫研究中的应用

目的：观察脑内多种神经递质对癫痫发作的影响。方法：以癫痫患者和ＳＤ大鼠为实验对象,用脑功能检测的最新脑电超电涨落图分析仪（ｅｎｃｅｐｈａｌｏｆｌｕｃｔｕｏｇｒａｍ ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ,ＥＴ）长时程采集脑电信号,提取在脑电中载有脑神经递质调节系统的震荡信息（即Ｓ谱线）,分析癫痫发作时的脑神经递质的变化。结果：患儿癫痫发作时,Ｓ谱线中Ｓ２（谷氨酸）增高;Ｓ１（γ－氨基丁酸）降低,造成Ｓ１＜Ｓ２。Ｓ５     

人外周血淋巴细胞膜电压依赖性钾通道的特性分析

淋巴细胞是直接参与机体免疫的重要效应细胞。淋巴细胞膜上存在多种离子通道 ,其中主要为电压依赖性钾通道。目前 ,对鼠淋巴细胞该通道的研究较深入 ,它可分为ｎ、ｎ’和ｌ型三种亚型 ,但对人外周血淋巴细胞膜上钾通道的研究较少。国内尚未见这方面的报道。本文采用膜片钳技术记录人外周血淋巴细胞电压依赖性钾通道电流 ,并对其进行特性分析 ,为研究其异常变化与某些疾病的关系提供实验依据。1　材料和方法(1)细胞的分离　取正常人外周静脉血 ,用Ｆｉｃｏｌｌ密度梯度离心法分离出单个核细胞 ,将其置于塑料平皿内 ,37℃孵育 2ｈ ,取含淋巴细…     

重组BCG疫苗的研究进展

卡介苗（ＢＣＧ）由于其广泛应用的安全性和免疫佐剂作用,因而以ＢＣＧ为载体的重组疫苗研究日益被科学家们重视。本文就近年来细菌、病毒、寄生虫等的重组ＢＣＧ疫苗的研究进展作一简要概述。     

从人发中连续提取亮氨酸和胱氨酸工艺初探

介绍了一种从人发中连续提取亮氨酸和胱氨酸的新工艺。人发用盐酸水解后 ,将水解液减压赶酸 ,再直接加入邻二甲苯 - 4-磺酸沉淀亮氨酸 ,所得沉淀经氨解及后续的精制过程可得亮氨酸精品 ,沉淀亮氨酸后所得的母液按传统的工艺用液氨和得胱氨酸粗品 ,再经一次精制中和可得胱氨酸精品。亮氨酸和胱氨酸的收率分别可达 4 .9%和 7.8% ,产品质量符合日本味之素标准     

人NK细胞对同种和异种内皮细胞MHCⅠ类分子的差异识别

以HUVEC和PAEC为靶细胞,人PBNK和NK92为效应细胞,研究了人NK细胞对同种和异种内皮细胞杀伤的差异性;并通过酸处理内皮细胞及抗体封闭MHCⅠ类分子、CD94和KIR(NKB1),研究了MHCⅠ类分子对人NK细胞杀伤HUVEC和PAEC的影响. 结果表明,PBNK和NK92对PAEC的杀伤均大于对HUVEC的杀伤. 酸处理后,两种NK细胞对HUVEC杀伤的增加幅度大于对PAEC的;此外,抗CD94单抗未能改变NK的杀伤效应;KIR(NKB1)封闭使PBNK杀伤HUVEC增加95%,杀伤PAEC仅增加29%. 以上结果提示:NK细胞对异种内皮细胞MHCⅠ类分子的差异识别作用可能是NK细胞杀伤PAEC的主要原因,而KIR很可能是NK杀伤内皮细胞时主要的传递抑制信号的受体.     

人红细胞非凝集型单抗(自身全血凝集试验试剂)的研制及鉴定

应用杂交瘤技术 ,混合人O型红细胞免疫纯系BALB/C小鼠 ,包被的红细胞作为固相抗原 ,ELISA法筛选出识别红细胞表面共同抗原的抗体 ,然后利用Coombs原理 ,加入抗球蛋白试剂。用玻片法筛选出非凝集型抗体 ,得到 2株稳定分泌上述抗体的杂交瘤并进行初步鉴定 ,单抗上清血凝效价可达 1∶5 0～ 1∶10 0 ,腹水血凝效价为 1∶8× 10 4 ～ 1∶16× 10 4 。另外 ,本文特别讨论了凝集型单抗的Fab段作为非凝集型抗体应用的可能性。     

人血管生成素-PE40融合蛋白基因的构建、表达及活性研究

利用 PCR扩增出人血管生成素 (h ANG)成熟肽的基因片段 .与绿脓杆菌外毒素缺失突变体PE40的基因连接后 ,克隆入 p UC1 9载体中 .测序后克隆入表达载体 p RSETB,构建成 h ANG-PE40融合基因的表达载体 .IPTG诱导 ,表达出分子量约为 58k D的 His6- ANG- PE40融合蛋白 ,占菌体总蛋白的 8% .Ni2 +- NTA树脂纯化表达蛋白 ,SDS- PAGE结果显示纯化重组蛋白为单一条带 .鸡胚绒毛尿囊膜鉴定表明重组蛋白体外能够有效地抑制血管的形成 .     

重组p16腺病毒的构建及其对人白血病细胞的抑制作用

为了探讨腺病毒载体用于基因治疗的可行性及野生型 p1 6基因的抗肿瘤特性 ,构建了复制缺陷型重组 p1 6腺病毒 .首先将 p1 6全长 c DNA插入穿梭质粒 p Ad CMV产生重组质粒 p Ad-CMV- p1 6,然后通过脂质体介导与 p JM1 7共转染 2 93细胞 ,经同源重组产生 E1区缺失的重组腺病毒空斑 .用纯化后的腺病毒感染人白血病细胞株 HL- 60后 ,PCR及 Western blot分析显示在感染细胞中有外源性 p1 6 c DNA存在和 p1 6蛋白表达 ;被感染的 HL- 60细胞的生长受到明显抑制 ,而未感染细胞及对照腺病毒感染的细胞没有受到抑制 .结果表明 ,腺病毒作为一种新型基因转移载体 ,可有效地介导肿瘤抑制基因 p1 6的表达 ,在肿瘤基因治疗方面具有很大的应用前景 .     

人白细胞介素11融合蛋白切割位点的改变及成熟蛋白的纯化

将 h IL- 1 1 c DNA克隆入硫氧还蛋白基因融合表达载体 p TRXFUS的 trx A基因 3′末端 ,构建符合读码框的融合基因 ,并在两基因间改变原有的肠激酶切割位点 ,引入蛋白质的羟胺切割位点序列 ,该融合蛋白在大肠杆菌中表达量达 2 0 %以上 .经羟胺切割 ,柱层析等纯化步骤后 ,得到纯度98%以上的成熟 h IL - 1 1 .用 IL- 6依赖细胞株 7TDI及 MTT法测定生物学活性 ,比活达 8× 1 0 6 IU/mg.并对纯品进行了 Western blot,N端 1 5个氨基酸测序及 h IL- 1 1氨基酸组成等分析和鉴定     

CH50真核表达载体pCH503的构建及小鼠体内表达的趋化与抗肿瘤活性

构建重组 FN多肽 CH50真核表达载体并在小鼠体内表达 ,研究其趋化与抗肿瘤作用 .采用重组 DNA技术构建表达质粒 ;体内进行基因转染 ,采用 RT- PCR鉴定导入基因的表达 ;通过肝素亲和层析、SDS- PAGE和 Western blot鉴定表达产物 ;腹腔细胞计数、Giemsa染色分析以及肌肉组织切片与染色观察体内基因转染后的趋化作用 ;小鼠黑色素瘤模型研究基因转染抑制肿瘤的作用 .从 CH50原核表达载体获得重组多肽的 c DNA,5′端加上小鼠 IFN- 5′端非编码区和信号肽编码区的 c DNA,3′端加上人 FN c DNA的 3′端非编码区 ;将重组 c DNA插入 p REP8质粒 ,即构建出p CH50 3质粒 .巨噬细胞在体内经 p CH50 3转染 ,然后在体外培养 ,能够产生 CH50多肽 .以p CH50 3分别进行腹腔基因转染和肌肉内基因转染 ,均可对免疫细胞产生趋化作用 ;p CH50 3体内转染可以使小鼠腹腔内黑色素肿瘤结节数降低 50 %～ 60 % . CH50真核表达载体 p CH50 3可在小鼠体内表达 ,体内基因转染可趋化免疫细胞和抑制肿瘤结节形成 ,在肿瘤综合治疗中有重要意义 .