兖州卷柏化学成分及体外抗菌活性研究

本文研究兖州卷柏Selaginella involvens Spring.的化学成分及体外抗菌活性.运用反复色谱层析进行纯化分离得到7个化合物,经波谱解析结合理化鉴定确定化合物结构为:正十六烷酸(1),正十八烷酸(2),β-谷甾醇(3),豆甾醇(4),穗花杉双黄酮(5),β-D-glucopyranoside,(3β)-cholest-5-en-3yl(6),β-香树脂醇(7).化合物1～7均首次从该植物中分离得到,6和7首次从该属植物中分离得到.此外研究了化合物5、6和7的体外抗菌活性.化合物5、6和7可能为兖州卷柏抗肺炎病菌的主要物质基础.     

铁甲草化学成分的初步研究

采用硅胶柱色谱分离方法,研究了铁甲草(Cassia mimosoides Linn.)乙醇提取物中的化学成分.从铁甲草中分离得到8个化合物:大黄素(1)、木犀草素(2)、间苯二酚(3)、齐墩果酸(4)、(R)-鹰爪三醇(5)、α-L-鼠李糖(6)、β-谷甾醇(7)和胡萝卜苷(8).除化合物1以外,其余均是首次从铁甲草中分离得到,其中化合物5为首次在该科植物中发现.     

大豆醛脱氢酶基因GmALDH3-1的克隆及在生殖器官中的表达

通过基因芯片技术,从大豆中鉴定了一个花优势表达基因,其在大豆花中的表达量为叶片中的85倍。通过生物信息学方法,拼接了该基因的全长序列,并通过RT-PCR克隆了该基因。BLAST检索分析表明该基因编码醛脱氢酶,命名为GmALDH3-1。GmALDH3-1包含一个1485 bp的开放阅读框,编码494个氨基酸残基。GmADLH3-1与白杨的醛脱氢酶PtALDH3相似性最高（氨基酸相似率83%,一致率为68%）,而与来自于人的ALDH3B的氨基酸一致率和相似率分别为39%和59%。系统发生分析表明GmALDH3-1与其它植物ALDH3亚家族成员位于一个分支,且与白杨PtALDH3和拟南芥AtALDH3F1亲缘关系最近。采用实时定量RT-PCR检测了GmALDH3-1基因在大豆叶、根和花中的表达,结果表明GmALDH3-1基因在花中高丰度表达,在根和叶中未检测到表达。运用基因芯片信息分析了GmALDH3-1在种子发育过程中的表达情况,结果表明GmALDH3-1在种子发育过程中的外表皮、内表皮、外胚珠和种脐中表达量较高。文章讨论了GmALDH3-1基因在大豆生殖器官发育中可能发挥的作用。     

一株多环芳烃降解菌的鉴定及GST基因克隆和序列分析

由石油污染土壤中分离到一株能以多环芳烃（菲、芴、萘）为唯一碳源的细菌,经形态观察、生理生化（BiologGN）和 G+C mol%分析,鉴定该菌为少动鞘氨醇单胞菌(Sphingomonas paucimobilis)。与16S rDNA序列同源性的比较进一步确证了鉴定结果。经菲诱导后的细菌谷胱甘肽S转移酶（Glutathione Stransferase, GST）酶活明显高于未诱导前,表明谷胱甘肽S转移酶可能与多环芳烃的降解有关。根据该酶基因的同源性序列设计引物,PCR扩增出编码谷胱甘肽S转移酶基因片段,进一步证实在该菌中有GST的存在。测序后基于编码GST的基因所进行的系统发育分析表明,该多环芳烃降解菌与其它多环芳烃降解菌在进化上亲缘关系较近。     

淡水鱼池土腥异味物质含量与浮游藻类和放线菌生物量的关系

通过顶空固相微萃取-气质联用色谱测定北京市精养鱼池中两种主要土腥异味物质(土臭味素和二甲基异莰醇)含量,同时测定鱼池中浮游藻类和放线菌生物量,研究了土腥异味物质含量与浮游藻类和放线菌生物量之间的关系。结果表明,试验鱼池中土腥异味物质以土臭味素为主,土臭味素在精养鱼池中普遍存在,含量为1.22～35.58ng·L-1,二甲基异莰醇在部分鱼池中被检出,含量1.39～6.00ng·L-1。精养鱼池中共检出浮游藻类6门22属,生物量17.33～178.34mg·L-1,以硅藻和裸藻为主。放线菌共测到4个属,其中链霉菌Streptomyces sp.是主要种类,放线菌总生物量0～76×104ind.L-1。鱼池中浮游藻类总生物量与土臭味素含量正相关。浮游藻类中的颗粒直链藻Melosira granulata和条纹小环藻Cyclotella striata可能是北京地区夏秋季节淡水精养鱼池中能够产生土臭味素的主要藻类,裸藻和其他鞭毛藻类对池中异味化合物的产生可能作用较小。     

苦楝果实中某些化学成分及其对菜青虫的生物活性

采用生物活性追踪法,从苦谏(Melia azedarach)果实中分得苦楝新醇(I)、苦谅酮(II)苦楝醇(III)、苦楝二醇(IV),苦楝三醇(V)、香草酸(VI)、香草醛(VII)和川楝素(VIII)。根据波谱(1R,MS,¹H-NMR,¹³C-NMR)分析和理化常数测定确定其结构,其中I为一新化合物。生测结果表明,II-V和VIII对菜青虫(Pieris rapae)有明显的拒食活性,VIII还表现出明显的胃毒活性;I、VI和VII仅表现出一定的拒食活性。     

鞘脂类对胰岛素信号的调控——Ⅱ型糖尿病研究的新兴领域

胰岛素抵抗是Ⅱ型糖尿病的病理基础之一,近年来已成为Ⅱ型糖尿病研究的关键和热点．众多研究发现,机体内鞘脂类物质水平的改变直接影响胰岛素信号的强弱．神经酰胺和神经节苷脂GM3对胰岛素信号具有负向调控作用,介导胰岛素抵抗的形成,该调节效应依赖于细胞膜上微囊蛋白．1-磷酸鞘氨醇则通过氧化还原途径增强胰岛素信号．微囊蛋白功能性活动和1-磷酸鞘氨醇的介导作用均与钙信号相关,因此,可通过实时检测细胞外钙内流和细胞内钙瞬间变化,从离子通道水平进一步探索鞘脂类调节胰岛素信号的相关机制．本文综述了鞘脂类物质调控胰岛素信号的机制,干预鞘脂类水平和改善胰岛素抵抗的策略,将为鞘脂类物质在Ⅱ型糖尿病预防和治疗的研究及应用提供有力的帮助．     

藜芦醇和吐温80对白腐菌产木质素降解酶的影响及在偶氮染料脱色中的作用

担子菌PM2在限氮液体培养下,分泌木质素过氧化物酶和锰过氧化物酶;藜芦醇、吐温 80的补充,提高了该菌锰过氧化物酶的产生,获得的最大锰过氧化物酶Mnp酶活为254.2u/L、190.2 u/L,分别是对照的3.4倍和2.5倍。选择三种偶氮染料,在染料体系下,进一步分析藜芦醇、吐温 80对担子菌PM2产过氧化物酶及染料脱色的影响。结果表明,担子菌PM2分泌的锰过氧化物酶Mnp与染料脱色有关,脱色程度受其分子结构特征影响;吐温80的补充,更有利于染料的脱色降解,48h后三种染料均可达到80%以上的脱色率。     

糖基化3－磷酸甘油醛脱氢酶的分离纯化及糖基代位点的探讨

应用糖基化蛋白亲和层析技术对兔肌及人红细胞的３－磷酸甘油醛脱氢酶的分离分析表明,兔肌非糖基化ＧＡＰＤＨ的比活为１８０—２００单位,而糖基化ｇＧＡＰＤＨ的为４０—５０单位,并占该酶蛋白总量的４０％。人类红细胞糖基化ｇＧＡＰＤＨ的活力占其总活力的５５％左右。以上结果表明：哺乳动物体内存在糖基化３－磷酸甘油醛脱氢酶。由于（１）糖基化明显影响ＧＡＰＤＨ的活力;（２）糖基化酶活性部位的巯基（Ｃｙｓ－１４９）空间位置发生了改变;（３）糖基化影响活性部位的空间构象及（４）ＯＰＴ对糖基化及非糖基化酶的修饰无论在动力学上还是在ＫＩ淬灭时都有明显差异,因此,糖基化的位点可能与赖氨酸残基有关,并且接近或位于酶的活性部位。     

醛脱氢酶基因敲除的K.pneumoniae重组菌的构建

在利用KlebsiellapneumoniaeM5aL厌氧发酵甘油生产1,3丙二醇的过程中,一部分甘油通过氧化代谢途径经醛脱氢酶(ALDH)催化合成大量副产物乙醇,降低了1,3丙二醇的产量和得率。首次以醛脱氢酶ALDH为改造目标,利用同源重组技术获得了ALDH基因敲除的K.pneumoniae重组菌。首先,采用PCR的方法分别从K.pneumoniaeM5aL基因组DNA及质粒pBR322上扩增得到ALDH基因和四环素抗性基因(Tcr);然后将ALDH基因定向插入到质粒pUC18的多克隆位点得到中间载体pUC18ALDH,该载体与Tcr基因分别用AvaI和BsaAI双酶切后进行连接,得到ALDH基因敲除的重组载体pUCAT;经DNA测序及限制性酶切电泳分析,构建的载体由5′ALDHTcr3′ALDHpUC18组成,与设计结果相符;最后,利用该载体通过同源重组技术得到两株K.pneumoniae重组菌06231hb及06231hc,经菌落PCR及酶活鉴定,两株菌的ALDH基因均已缺失。与出发菌株K.pneumonaieM5aL相比,重组菌的乙醇合成浓度降低了43%～53%,1,3丙二醇合成浓度提高了27%～42%。