影响甲醇酵母中外源蛋白表达的因素

甲醇酵母系统由于其在表达蛋白方面无可比拟的优越性,已越来越得到广泛的应用。但不同的个源蛋白表达量有很大差异。介绍了影响甲醇酵母中外源蛋白表达的因素,这将有助于揭示甲醇酵母中外源蛋白表达的内在机制。     

组织工程面临的技术挑战与发展趋势

当前组织工程研究仍处于初级阶段,还仅仅是初步应用组织工程技术修复临床简单组织缺损,还有许多制约组织工程应用与发展的基本科学问题没有阐明.随着组织工程各个层面技术难题的逐个攻破,组织工程的内涵和外延将不断拓展,并有助于加快组织工程的产业化进程,促进临床应用.针对组织工程核心要素研究的不足,结合最新的组织工程研究进展,阐述...     

酵母ENO2上游激活顺序对酵母 LEU2表达的影响

本文将酿酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)中编码烯醇化酶的基因之—ENO2的上游墩活顺序嵌入穿梭质粒YEpl3上酵母LEU2基因上游—405Hpa I的酶切部位。LEU2为编码β-异丙基苹果酸脱氢酶基因。从而研究了酵母ENO2的上游激活顺序对酵母LEU2表达的影响。实验结果表明ENO2上游激活顺序不论正向或反向嵌八都激活LEU2的表达达四倍左右。有亮氨酸存在的条件下,LEU2的表达受到抑制。ENO2上游激活顺序在对LEU2表达的激活上并不受葡萄糖的诱导。提出了用ENO2上游激活顺序组建高表达系统的可能性。     

发酵工程实验教学改革初探

发酵工程作为生物工程专业学生的必修课程,是一门实践性极强的学科。为了在发酵工程实验教学中训练学生科学的思维和方法、培养适合于社会需求的创新型、综合型人才,在发酵工程实验课程内容、教学方法和考核方式等方面进行了初步改革,并取得了较好的效果。     

生长激素释放激素和人血清白蛋白融合蛋白的克隆表达

目的:通过与人血清白蛋白(HSA)融合,延长生长激素释放激素(GHRH)在体内的半衰期。方法:根据毕赤酵母偏爱密码子重新设计GHRH的核酸序列,并通过化学合成和重叠PCR法将GHRH的N端与HSA的C端通过一个11肽的接头连接,获得GHRH和HSA融合的全长基因序列。构建pPIC9-HSA-GHRH表达载体,电击转化毕赤酵母GS115感受态细胞,通过表型筛选和诱导表达实验得到蛋白表达工程菌,对表达产物进行分离纯化和生物学活性分析。结果:克隆了HSA-GHRH融合基因,构建了pPIC9-HSA-GHRH融合表达载体;电击转化后通过表型筛选和诱导表达实验得到蛋白表达工程菌;经分离纯化后,对表达产物的生物学活性分析显示其在体内有促进生长的作用。结论:与人血清白蛋白的融合有效地提高了GHRH的表达水平,并延长了GHRH的半衰期。     

一次有意义的评估活动

美国斯坦福研究所是国际上颇有名的软科学研究机构之一。今年一月下旬,应上海市经委新兴产业办公室的邀请,斯坦福研究所生物技术和生化研究室主任米勒(Jon P.Miller)和生物技术项目主任史密森Luther H,smithson)对上海地区中国科学院有关 。     

酵母细胞周期调控的研究进展

酵母是一种研究细胞周期调控的好材料,在细胞周期的调控研究中具有重要作用。现在通常以芽殖酵母和裂殖酵母为代表进行研究。这两种酵母的细胞周期进程与高等真核生物相比各有其特点。 酵母细胞周期运行中存在有三个不同的控制点,即start点、S期启动点、G2/M转换处。在这三个不同的控制点起作用的CDK的组成是不同的。芽殖酵母分别是Cdc28-Clns;Cdc28-Clb5和Cdc28-Clb6;Cdc28-Clb1、Cdc28-Clb2、Cdc28-Clb3和Cdc28-Clb4。裂殖酵母中分别是Cdc2-Cig2;Cdc2-Cig2;Cdc2-Cdc13和Cdc2-Cig1,其中芽殖酵母中的Cdc28和裂殖酵母中的cdc2是等效基因。不同的控制点存在着不同 的调控机制,它们涉及到大量的基因,其中以G2/M转换处的调控机制研究得最早也最透彻。另外,APC途径在M中期/后期转化中起着重要作用。     

人粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子的克隆及在毕赤酵母中的表达

采用加长引物5＇端的方法克隆了hGM-CSF的编码基因,克隆过程中对该基因的局部做了密码子优化。然后克隆进毕赤酵母分泌型表达载体pPIC9K,电击转化毕赤酵母。PCR、SDS-PAGE与Western blotting证实hGM-CSF已整合进酵母基因组,摇瓶水平粗蛋白表达量达389mg/L,动物实验证实蛋白产物活性正常,SDS-PAGE与N-糖苷酶F去糖基化分析发现hGM-CSF被糖基化。     

现代生物技术在食品工业中的应用

介绍了以基因工程为核心内容,包括细胞工程、酶工程和发酵工程的现代生物技术在改造食品资源、改进食品加工工艺,改善食品质量及开发新型保健食品等方面的应用状况,并展望了其发展前景。     

蛋白酶抗性人睫状神经营养因子突变体基因的构建及其在巴斯德毕赤酵母中的表达

AX15是一种比天然睫状神经营养因子具有更高的生物学活性、更好的稳定性和可溶性的hCNTF突变体。在巴斯德毕赤酵母中表达时AX15易发生降解。氨基酸序列分析表明降解位于由12和13位氨基酸残基组成的双碱性氨基酸之后。根据KEX2蛋白酶的底物专一性把双碱性氨基酸从RR变为RK,构建了KEX2抗性的AX15突变体AX15（R13K）。AX15（R13K）的稳定性得到了显著的提高,在诱导100 h后也未发生降解。利用超滤浓缩和凝胶过滤得到了纯度>90%的AX15（R13K）。TF-1细胞存活实验表明AX15（R13K）具有与AX15相同的生物学活性。蛋白酶抗性人睫状神经营养因子突变体可能具有更好的体内稳定性,在临床应用上具有潜在的优势。